牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测

论文摘要

为了制备牛分枝杆菌的单克隆抗体,本试验利用制备的原核表达的牛分枝杆菌重要抗原蛋白MPB70作为免疫原皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术,经过5次亚克隆与筛选,取已免疫好的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG3500的作用下进行细胞融合。筛选得到了2株分泌抗牛分枝杆菌MPB70蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为Anti-B-MPB70:8和Anti-B-MPB70:12。采用间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行亲和常数检测、效价分析及亚类鉴定,通过SDS-PAGE凝胶试验对单克隆抗体进行纯度分析,并检测其浓度,通过Western blotting方法对单克隆抗体的反应特性进行鉴定。结果显示,纯化后的MPB70蛋白分子质量大小为20 ku,浓度为0.5 mg/mL。两株单克隆抗体的亲和常数分别为9.95×109和9.53×108;抗体效价分别为1∶102 400和1∶12 800;抗体亚类分别为IgG2b和IgG1,轻链类型均为κ型;纯度>90%;浓度分别为3.0和2.2 mg/mL;且具有良好的反应特性。以上研究结果表明,本试验成功制备了抗MPB70蛋白单克隆抗体,可为牛结核病病原和抗体检测技术研究奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验动物及菌种
•   1.2 主要试剂
•   1.3 MPB70蛋白的原核表达与纯化
•   1.4 BALB/c小鼠免疫
•   1.5 细胞融合
•   1.6 杂交瘤细胞筛选
•   1.7 腹水制备及纯化
•   1.8 单克隆抗体的检测
•     1.8.1 免疫效价检测
•     1.8.2 单克隆抗体亲和常数及效价检测
•     1.8.3 单克隆抗体亚类鉴定
•     1.8.4 单克隆抗体纯度及浓度检测
•     1.8.5 反应性检测
• 2 结 果
•   2.1 MPB70蛋白的原核表达与纯化
•   2.2 免疫小鼠血清效价检测
•   2.3 杂交瘤细胞筛选
•   2.4 单克隆抗体亲和常数及效价检测
•   2.5 单克隆抗体亚类鉴定
•   2.6 单克隆抗体纯度及浓度检测
•   2.7 反应特性检测
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周曼莉,周玉成,张海威,乔连江,杨艳玲

关键词: 结核分枝杆菌,蛋白,单克隆抗体

来源: 中国畜牧兽医 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院特产研究所,宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室

基金: “十三五”重点研发项目“牛羊重要病原分子诊断新技术”(2016YFD00500900),宁夏回族自治区重点研发计划项目(东西部合作)“牛羊重要传染病快速诊断与检测关键技术研究”(2017BN041)

分类号: S852.61

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.10.030

页码: 3075-3083

总页数: 9

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