PCV3 Cap基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

论文摘要

试验旨在获得具有天然构象且反应原性良好的猪圆环病毒3型（porcine circoviurs 3,PCV3）Cap蛋白。以本实验室保存的PCV3 Cap基因为模板,设计不同引物扩增Cap基因,将其亚克隆至pEASY-Blunt载体上,验证正确后将目的基因分别克隆至杆状病毒表达载体pFastBacTM上（含有双启动子）,获得含有2个PCV3 Cap基因的重组质粒pFBD-P2C。将该重组质粒转化大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞当中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid P2C,利用脂质体转染至SF9细胞中进行病毒拯救,转染后72 h,收取上清病毒液,盲传3代,收取SF9细胞应用间接免疫荧光法（IFA）及Western blot检测目的蛋白是否表达。结果显示,重组质粒pFBD-P2C酶切验证正确,重组杆粒Bacmid P2C构建成功,杆状病毒中能够表达PCV3 Cap蛋白且能与His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定出现特异性绿色荧光,表明成功表达了PCV3 Cap蛋白且具有反应原性,为深入开展PCV3抗体制备、新型疫苗研发奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物设计与合成
•   1.3 Cap基因PCR扩增
•   1.4 重组转移质粒的构建与鉴定
•   1.5 重组杆粒的制备
•   1.6 重组杆状病毒的拯救
•   1.7 间接免疫荧光法（IFA）鉴定PCV3 Cap蛋白的表达
•   1.8 Western blot检测PCV3 Cap蛋白的表达
• 2 结果
•   2.1 PCV3 Cap基因的扩增、克隆及鉴定分析
•   2.2 目的基因测序结果分析
•   2.3 重组转移质粒构建与鉴定
•   2.4 重组杆粒Bacmid-P2C的鉴定
•   2.5 重组杆状病毒rBV-P2C的获得
•   2.6 IFA鉴定Cap蛋白的表达
•   2.7 重组蛋白pFBD-P2C的Western blot检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 姜宇航,徐一鸣,许汪,杜寿文,宋利娜,陈竞,郝鹏飞,金宁一,李昌

关键词: 猪圆环病毒型,重组杆状病毒,蛋白,表达

来源: 中国兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科技学院,吉林省畜牧总站,军事医学研究院军事兽医研究所省部共建吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0502304),国家自然科学基金资助项目(31702210)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.03

页码: 2112-2117+2128

总页数: 7

文件大小: 2718K

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