导读:本文包含了核基质结合序列论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基质,序列,转基因,基因,活性,引物,沉默。
核基质结合序列论文文献综述
胡晓明,谌颜,高丽,扈廷茂,李光鹏[1]（2013）在《基质结合区(MAR)序列及其对动物转基因表达的影响》一文中研究指出基质结合区(matrix attachment regions,MAR)是一段能与核基质特异性结合的DNA序列,在进化上较为保守,对于真核生物基因组中的染色体折迭有着非常重要的作用。将其构建到外源基因两侧时可以增加转基因的表达水平,并在一定程度上降低个体之间的差异。目前MAR序列已成为动物和植物基因工程领域的研究热点之一。本文主要综述MAR序列的特征、分布及功能、对转基因动物的影响及作用机制等。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2013年11期）
苏瑞波,陈明,徐兆师,李连城,马庆[2]（2014）在《用核基质结合区(SAR)序列提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性》一文中研究指出采用最小表达框技术转化植物可以规避由骨架序列引起的安全风险。核基质结合区序列SAR(scaffold attachment region)可作为边界元件与核基质结合阻挡转基因片段邻近染色质区的作用与影响,提高外源基因稳定性。本研究在最小表达框序列两端添加SAR序列,提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性,提高转化基因的表达效率。首先,以GUS为目的基因构建带有SAR序列的最小表达框,以科农199为受体进行基因枪转化,同时以不加SAR序列的最小表达框片段为对照。带有SAR序列的最小表达框片段共轰击857个幼胚,T0代获得40株再生植株,PCR检测到16株阳性植株,转化效率为1.87%;对这16个阳性单株进行GUS染色,15株显色;从来自4个T0阳性植株的18个T1代植株中随机选取18株进行PCR和GUS染色检测,有15株表现为阳性。不带SAR序列的对照片段轰击1012个幼胚,获得31株再生植株,其中5株PCR阳性,转化效率0.49%,这5个阳性植株中仅2株为GUS染色阳性;来自于5个T0代PCR阳性株系的10个T1代单株中没有发现PCR和GUS染色阳性株。表明SAR序列可以提高基因枪转基因效率和目的基因表达稳定性。为了创制抗旱转基因小麦,以来自大豆的抗旱相关转录因子基因GmDREB3为目的基因,Bar基因为筛选标记基因,转化受体小麦济麦22,共轰击6045个幼胚,获得再生植株130株,PCR检测阳性植株30株,转化效率为0.50%;随机选取6株PCR阳性植株进行RT-PCR分析,其中5株可检测到外源基因的转录。进一步对这5株RT-PCR阳性植株插入片段完整性进行分析,其中4株插入片段基本完整。通过real-time PCR分析,发现T0代6个RT-PCR阳性植株的外源GmDREB3的拷贝数为1~3个。以上结果证明,在最小表达框两端加上SAR序列后可以提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性。(本文来源于《作物学报》期刊2014年01期）
冀芦沙[3]（2009）在《烟草核基质结合序列TM6在转基因植物中的功能鉴定及机理分析》一文中研究指出核基质结合序列(Matrix Attachment Region,MAR)是真核生物基因组上一段富含A/T,且能够将DNA或染色质附着到核基质上的一段DNA序列。当染色体周围富集大量置换蛋白时,这些置换蛋白能特异识别并结合到MAR序列区域并替换掉H1组蛋白,使MAR区域的染色体形成一种易于调节因子及修饰因子接近的开放结构,因而MAR序列的出现使染色质上核小体处于松散状态,从而影响邻近基因的表达。根据研究推断,MAR在维持和/或修饰DNA或染色质结构及调控相关基因表达中发挥重要的作用。TM6是本实验室从烟草核基质中分离得到的一段具有MAR结构特征的DNA序列。为了验证TM6在植物体内的功能,我们构建不同的植物表达载体转化烟草,对转基因烟草中外源基因的表达情况进行了分析检测。为了进一步研究TM6的作用机理,本实验分析了TM6周围的染色体区域活跃程度及TM6的结合蛋白与TM6相互作用关系,主要实验结果如下:1.在双子叶植物烟草中,双端TM6序列均能显着提高表达盒中报告基因gusA的表达。虽然细胞类型对转基因表达有一定的影响,但并不影响TM6的调控功能。本实验将P35S,PPNZIP,PCOR及Pmini35S特异型启动子引入MAR研究,结果显示,TM6的作用依赖于启动子的类型,但TM6并不能改变启动子的作用模式。本实验结果为以后在转基因植物特定发育时期或特定器官中提高外源基因的表达提供了实验依据。2.在转化烟草的过程中发现,连有TM6的载体其转化效率高于不连TM6的载体。通过对转基因烟草中卡那抗性基因的表达分析发现,抗性基因的表达量的高低与转化频率存在着直接的关系,因此推测TM6通过增加抗性基因的表达来提高了转化效率,同时这种转化效率的提高使抗性芽发生提前,数量增多,并且抗性苗的生长势也明显高于对照。3.对TM6的缺失分析表明,TM6II(551-1193bp)区域是TM6的核心功能区,占TM6功能的79.1%。TM6II序列上的拓扑异构酶Ⅱ结合位点、MRS区域及AT?box区域在调控基因表达上起到了协同作用。推测TM6通过序列上的拓扑异构酶Ⅱ结合位点与植物体内的拓扑异构酶Ⅱ相结合,从而促进T?DNA插入位点附近的DNA解旋,进而一些外源的调控元件识别并结合到TM6上的AT富含区及ARS区,同时加快外源基因的复制和转录。4.烟草TM6序列能够显着提高侧翼启动子区对核酸酶的敏感性。在微球菌核酸酶(MNase)处理后的转TM6的转基因烟草细胞核内,TM6显着降低了35S和NOS启动子区域的特异扩增水平,说明TM6能够使邻近启动子区域DNA结构松散,便于外源转录因子的结合从而开启外源基因表达。5.从烟草cDNA文库中分离到两个TM6序列的潜在结合蛋白NtMBP1和NtHMGB,凝胶阻滞(EMSA)分析表明这些蛋白能够与TM6片段体外结合。在竞争性EMSA实验中,蛋白NtDBP1和NtHMGB分别特异结合到TM6II的两个不同区域TM6II-I(761-870 bp)和TM6II?II(934-1013 bp)。同时多种侯选靶位点竞争结合实验验证:NtHMGB能特异结合到TM6II上MRS区域,而NtDBP1蛋白在TM6II上可能有多个潜在的核基质结合位点,也间接说明TM6作用机理的复杂性。6.根据以上的实验结论,对TM6作用模型进行推测:TM6周围的染色体区域与外源染色质调控蛋白(拓扑异构酶II等)识别并结合后,解开TM6染色体区域的高级结构从而使染色体敏感性增强。同时TM6结合蛋白(NtMBP1和NtHMGB等)将TM6II上特定位点的DNA双链释放,便于外源调控因子(RNA聚合酶和甲基化酶等)的结合从而增加外源基因表达。(本文来源于《山东农业大学》期刊2009-06-05）
卢龙涛[4]（2009）在《烟草核基质结合序列在转基因遗传稳定性中的功能及机理分析》一文中研究指出目前通过植物转基因技术进行作物品种的改良已经成为作物品质改良的重要手段。我们都希望外源转入的优良基因能在作物中得到高效和稳定的表达,但是外源的基因在转入植物中一代或者几代后会出现不再表达、表达变弱的现象。这种现象的发生很大程度上是由于转基因沉默现象导致的。由于转基因沉默严重阻碍转基因商品化的进程,因此,如何提高转基因后代的遗传稳定性、减少转基因沉默的发生是一个亟待解决的问题。核基质结合区(Matrix Attachment Regions,MARs)是基因组上通常富含A/T的能够将DNA或染色质附着到核基质上的DNA序列。通过与结合蛋白的互作,MARs在维持或修饰DNA或染色质结构及调控相关基因方面表达中发挥重要作用。以往的研究者发现核基质结合序列在减少转基因沉默方面具有重要作用。TM6是本实验室从烟草核基质中分离得到的一个具有一般MARs结构特征的DNA序列,核基质体外结合实验证明TM6与烟草核基质具有很强的体外结合能力。为了研究TM6在植物体内的功能,主要是在其提高转基因后代遗传稳定性中的作用,我们构建不同的植物表达载体并转化了双子叶植物烟草和拟南芥,对转基因植株中TM6连接的外源基因的表达情况进行了分析。为了进一步研究TM6的作用机理,本实验还分析了TM6对其邻近启动子区域DNA甲基化的影响,主要实验结果如下:1.在双子叶植物烟草中,双TM6能够明显的降低杂交后代的转基因沉默比例,提高转基因后代的遗传稳定性。这个实验结果为TM6在提高外源基因在转基因植物中的遗传稳定性方面的应用提供了实验依据。2.烟草TM6序列能够显着提高侧翼启动子区对核酸酶的敏感性。在DNaseI处理后的转TM6的转基因烟草细胞核内,TM6显着降低了CaMV35S启动子区域的特异扩增水平,初步说明TM6能够减低其邻近启动子区域DNA甲基化水平,从而降低基因沉默的发生,提高基因表达。3.对转基因烟草中CaMV35S和NOS启动子区域的DNA甲基化程度进行检测,分析得知:在CaMV35S启动子区域,没有TM6的转基因烟草植株的DNA甲基化水平较高大约在13%～37%,而有TM6的转基因烟草植株中几乎没有DNA甲基化的发生;在NOS启动子区域,没有TM6的转基因烟草植株的DNA甲基化水平较高大约在24%～51%,而有TM6的转基因烟草植株的DNA甲基化水平在9%～14%左右。该实验进一步验证了TM6能够显着降低其邻近启动子区域DNA甲基化水平。4.双子叶植物烟草中分离的TM6同样可以在拟南芥中增强外源基因的表达,并且在不同类型的启动子(组成型35S启动子、冷诱导型COR启动子和光合组织特异型启动子PNZIP启动子)的驱动下都能有增强表达的作用。说明TM6是一个能广泛提高外源目的基因表达的核基质结合序列,并且这种对外源基因表达的提高并不改变启动子的作用类型。(本文来源于《山东农业大学》期刊2009-06-05）
王芳,孙爱平,焦云娟,王天云[5]（2009）在《表达盒两侧不同核基质结合区序列介导表达载体的构建》一文中研究指出目的构建表达盒两侧含有不同来源核基质结合区(MAR)序列的载体pCCF-βg,为进一步研究MAR的调控功能提供基础。方法用限制酶酶切质粒pCCM-in,将切下的interferon-MAR片段连接至表达盒一侧含有globin-MAR的表达载体上,构建表达盒两侧含异源MAR的表达载体pCCF-βg。结果酶切及琼脂糖凝胶电泳证实所构建的载体pCCF-βg正确,pCCF-βg表达盒两侧分别含有interferon-MAR和globin-MAR片段。结论成功构建了表达盒两侧含有不同来源的MAR片段的载体pCCF-βg。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2009年01期）
韩忠敏,昝玉玺,王天云[6]（2007）在《人β-干扰素核基质结合区序列的克隆与分析》一文中研究指出采用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀提取人基因组DNA,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增人β-干扰素核基质结合区(matix at tachment region,MAR),琼脂糖凝胶电泳鉴定,连接T-载体,测序,分析其序列特征。结果显示PCR扩增出800bp条带,与预期片段大小相符。测序结果显示克隆的片段序列和报道的序列同源性为97%,克隆的DNA片段具备典型的MAR特征。结果显示我们成功从人基因组克隆了人β-干扰素MAR序列。(本文来源于《郑州铁路职业技术学院学报》期刊2007年02期）
王亚峰,王天云,姬翔,刘红涛,王建民[7]（2006）在《杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白cDNA片段的克隆及序列分析》一文中研究指出目的:克隆杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白片段。方法:根据多种生物MAR结合蛋白氨基酸的高度保守序列EWYGWHF和KYGLIYQ,设计一对简并引物,以杜氏盐藻的cDNA为模板,进行PCR扩增,PCR产物与T载体相连,转化大肠杆菌JM109后,筛选鉴定,对阳性菌落进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列,与GenBank上其他物种MAR结合蛋白序列进行同源性分析。结果:在杜氏盐藻中得到的cDNA片段,核苷酸长度为474bp,编码158个氨基酸(GenBank收录号为DQ124215)。推导的氨基酸序列与稻、莲、拟南芥、豌豆、烟草、酵母、果蝇和蟾的MAR结合蛋白相比较,同源性分别为74%、73%、73%、73%、71%、70%、68%和67%。结论:所克隆的序列可能为杜氏盐藻MAR结合蛋白片段。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2006年03期）
张萌萌[8]（2005）在《烟草核基质结合（MAR）序列的机理研究和应用》一文中研究指出转基因技术广泛应用于物种改良和分子生物学的基础研究领域,随着大量转基因植株的获得,人们发现外源基因沉默和外源基因表达量过低的问题普遍存在。造成这一现象的原因很多,主要有甲基化、位置效应、共抑制、染色体包装方式及反式作用等。如何克服转基因沉默是完善转基因技术的关键。近年来发现,将MAR序列构建到表达盒两翼不仅可以克服基因沉默、增强外源基因表达,还可以促进外源基因在后代中的稳定遗传。因而,MAR序列作为一种很有效的基因表达顺式调控元件,具有良好增强效果,MAR序列构建的高效表达载体对于优化转基因技术有非常重要的意义。本实验选用了烟草的两个MAR 序列:TM2 和220MAR。TM2 是由本实验室首次克隆并注册的烟草强核基质结合序列,基因注册号为AF373415。220MAR 是Spiker 实验室用体外结合实验的方法从烟草核基质中分离得到的MAR 序列。因此,本实验将TM2 和220MAR 分别连接到叁个启动子驱动的标记基因GUS 或GFP 的表达盒两翼,研究TM2和220MAR 对遗传转化频率和外源基因表达水平的影响,以上叁个启动子分别为:双子叶植物的CaMV35S 组成型启动子,单子叶植物的Ubi 组成型启动子和本实验室从裂叶矮牵牛基因组中克隆得到的PNZIP 叶片特异型启动子,具体试验结果如下:1.将TM2 以顺式重复方向分别插入到pBI121、pCAMBIA1301 的启动子上游和标记基因GUS 的下游,以及改造过的pBI121、pCAMBIA1301 的启动子上游和标记基因GUS 的下游,使TM2 位于表达盒的两翼构建了CaMV35S 启动子、PNZIP 启动子控制的两个双子叶植物表达载体和Ubi 启动子、PNZIP 启动子控制的两个单子叶植物表达(本文来源于《山东农业大学》期刊2005-06-09）
张可伟,王健美,郑成超[9]（2004）在《核基质结合序列(MAR)与基因表达调控》一文中研究指出核基质结合序列 (MAR)是能在体外与核基质特异结合的DNA序列 ,广泛存在于染色质Loop结构的边界序列中。随着研究的深入 ,发现MAR序列不仅在染色质折迭中起到重要作用 ,影响邻近内源基因表达 ,而且将MAR序列构建到外源基因表达盒两侧转化动植物时 ,也影响外源基因的表达。因此 ,MAR序列是基因组中一种重要的基因间边界序列 ,为阐明非编码序列在基因表达中的作用和构建真核生物高效表达载体提供了新途径。(本文来源于《生物工程学报》期刊2004年01期）
丁一,李卓,乐晓萍,邢文英,朱晓燕[10]（2004）在《胃癌组织中核基质蛋白与p16基因上游序列结合检测》一文中研究指出目的 :研究胃癌组织核基质蛋白与p1 6基因上游序列的结合情况及其意义。方法 :采用Southwestern印迹技术及Genetools定量分析软件 ,对 2 2例胃癌及相应正常组织的核基质蛋白与P1 6基因上游序列的结合进行了检测。结果 :正常胃组织核基质蛋白与p1 6基因上游序列结合主带的相对分子质量 (Mr)为 2 80 0 0、30 0 0 0、4 0 0 0 0、4 30 0 0、5 0 0 0 0 ,胃癌组织中为 4 0 0 0 0、6 6 0 0 0。与正常胃组织比较 ,胃癌组织中核基质蛋白与P1 6基因上游序列结合的6 0 0 0主带阳性信号明显增强 (P <0 .0 5 ) ;而不同分化程度及不同临床分期胃癌组织间 ,此主带阳性信号强度差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :胃癌组织中 6 6 0 0 0蛋白与p1 6基因上游区结合量的异常可能是胃癌发生的早期分子事件。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2004年01期）
核基质结合序列论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用最小表达框技术转化植物可以规避由骨架序列引起的安全风险。核基质结合区序列SAR(scaffold attachment region)可作为边界元件与核基质结合阻挡转基因片段邻近染色质区的作用与影响,提高外源基因稳定性。本研究在最小表达框序列两端添加SAR序列,提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性,提高转化基因的表达效率。首先,以GUS为目的基因构建带有SAR序列的最小表达框,以科农199为受体进行基因枪转化,同时以不加SAR序列的最小表达框片段为对照。带有SAR序列的最小表达框片段共轰击857个幼胚,T0代获得40株再生植株,PCR检测到16株阳性植株,转化效率为1.87%;对这16个阳性单株进行GUS染色,15株显色;从来自4个T0阳性植株的18个T1代植株中随机选取18株进行PCR和GUS染色检测,有15株表现为阳性。不带SAR序列的对照片段轰击1012个幼胚,获得31株再生植株,其中5株PCR阳性,转化效率0.49%,这5个阳性植株中仅2株为GUS染色阳性;来自于5个T0代PCR阳性株系的10个T1代单株中没有发现PCR和GUS染色阳性株。表明SAR序列可以提高基因枪转基因效率和目的基因表达稳定性。为了创制抗旱转基因小麦,以来自大豆的抗旱相关转录因子基因GmDREB3为目的基因,Bar基因为筛选标记基因,转化受体小麦济麦22,共轰击6045个幼胚,获得再生植株130株,PCR检测阳性植株30株,转化效率为0.50%;随机选取6株PCR阳性植株进行RT-PCR分析,其中5株可检测到外源基因的转录。进一步对这5株RT-PCR阳性植株插入片段完整性进行分析,其中4株插入片段基本完整。通过real-time PCR分析,发现T0代6个RT-PCR阳性植株的外源GmDREB3的拷贝数为1~3个。以上结果证明,在最小表达框两端加上SAR序列后可以提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
核基质结合序列论文参考文献
[1].胡晓明,谌颜,高丽,扈廷茂,李光鹏.基质结合区(MAR)序列及其对动物转基因表达的影响[J].农业生物技术学报.2013
[2].苏瑞波,陈明,徐兆师,李连城,马庆.用核基质结合区(SAR)序列提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性[J].作物学报.2014
[3].冀芦沙.烟草核基质结合序列TM6在转基因植物中的功能鉴定及机理分析[D].山东农业大学.2009
[4].卢龙涛.烟草核基质结合序列在转基因遗传稳定性中的功能及机理分析[D].山东农业大学.2009
[5].王芳,孙爱平,焦云娟,王天云.表达盒两侧不同核基质结合区序列介导表达载体的构建[J].新乡医学院学报.2009
[6].韩忠敏,昝玉玺,王天云.人β-干扰素核基质结合区序列的克隆与分析[J].郑州铁路职业技术学院学报.2007
[7].王亚峰,王天云,姬翔,刘红涛,王建民.杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白cDNA片段的克隆及序列分析[J].郑州大学学报(医学版).2006
[8].张萌萌.烟草核基质结合（MAR）序列的机理研究和应用[D].山东农业大学.2005
[9].张可伟,王健美,郑成超.核基质结合序列(MAR)与基因表达调控[J].生物工程学报.2004
[10].丁一,李卓,乐晓萍,邢文英,朱晓燕.胃癌组织中核基质蛋白与p16基因上游序列结合检测[J].郑州大学学报(医学版).2004
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