导读:本文包含了载体扩增论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:传染性法氏囊病病毒(IBDV),VP2基因,幽门螺杆菌,铁蛋白
载体扩增论文文献综述
朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯[1]（2019）在《鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
周炜清,燕星燃,李娟,那向明,马光辉[2]（2018）在《适于间充质干细胞体外扩增的微载体设计与制备》一文中研究指出在多种类型干细胞中,间充质干细胞被认为是最接近临床应用的类型。然而,即使是体内间充质干细胞最丰富的骨髓中,其含量也仅为0.001%-0.01%。为了满足临床治疗的需求,需要进行体外扩增。微载体培养技术被认为是细胞最为有效的增殖方法之一,但干细胞的培养有其独特的特点,需要对载体或培养工艺加以改进。(本文来源于《中国生物工程学会第十二届学术年会暨2018年全国生物技术大会论文集》期刊2018-11-09）
李新新,何雷,王嘉伟,廖成水,李静[3]（2018）在《禽腺病毒Fiber1、Fiber2和Hexon蛋白基因扩增及真核表达载体的构建》一文中研究指出【目的】扩增出禽腺病毒主要保护性抗原Fiber-1、Fiber-2和Hexon基因并构建真核表达载体。【方法】本研究通过设计Fiber1、Fiber2、Hexon蛋白的基因和表达载体特异性引物,以FADV-4毒株为模板,PCR扩增的Fiber1、Fiber2、Hexon蛋白基因,以LS-GFP质粒为模板通过长链PCR扩增表达载体LS-vector-P/M。之后使用In-Fusion技术分别将各个目的基因片段与载体相连接,构建LS-Fiber1、LS-Fiber2、LS-Hexon真核表达载体并转化到Stble2感受态细胞中,在含有羧苄西林(CAR)的LB液体培养基上培养16-18h,提取质粒并作为模板,进(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集》期刊2018-07-27）
何雷,胡小飞,王嘉伟,廖成水,李静[4]（2018）在《鸡端粒酶逆转录酶基因的扩增及载体构建》一文中研究指出【目的】为研究鸡端粒酶逆转录酶的功能及其在细胞永生化中的应用。【方法】本研究通过设计cTERT和cTR的特异性引物,以四日龄SPF鸡胚的组织RNA为模板用RT-PCR的方法扩增鸡端粒酶逆转录酶基因和端粒酶RNA基因,同时扩增出载体,通过In-fusion方法将鸡端粒酶逆转录酶基因和端粒酶RNA基因与载体相连,并将连接产物转化到Stble2感受态细胞中,最后把克隆所得重组质粒转染进入肝细胞构建真核表达载体。【结果】研究结果表明,本研究成功扩增cTERT和cTR的基因片段,其中,cTERT全长4764bp,cTR为(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集》期刊2018-07-27）
何晴[5]（2018）在《基于微载体转瓶体系扩增间充质干细胞的研究》一文中研究指出间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有分化潜能、自我更新能力和低免疫原性,是再生医学领域最有潜力的种子细胞。尽管当前MSCs的临床应用已成为现实,但直接供体来源MSCs数量有限,而临床治疗所需细胞剂量大,传统的体外2D含血清培养又会影响细胞产品的质量、数量和安全,并不能完全满足临床需求。因此,鉴于临床级MSCs扩增要求,本研究采用全细胞贴附法分离得到大鼠骨髓来源MSCs(Bone marrow-derived MSCs,bMSCs)和脂肪来源的 MSCs(Adipose-derived MSCs,aMSCs),利用形态学观察、增殖检测、集落形成能力评价、诱导分化实验以及表面表型分析等手段,对比考察长期培养和微载体扩增对不同组织来源MSCs生长和功能特性的影响,并研究了不同生物活性分子组合对MSCs贴附生长的影响,以筛选适合MSCs生长的无血清培养基。首先,通过考察长期培养对bMSCs和aMSCs的影响,发现bMSCs和aMSCs细胞形态上无明显差异,但是在220天的长期培养过程中两种细胞形态均呈现变小的趋势,同时集落形成能力下降,而增殖能力增强。经综合比较可以看到,bMSCs的增殖能力强于aMSCs,并且只有bMSCs能长期保持分化能力。此外,CD29+/CD90+/CD34-/CD45-的表达情况不依赖于MSCs的类型和倍增数,而CD44、CD73和CD106则表现出相反的现象。其次,通过系统对比微载体上MSCs的扩增行为,本研究发现MSCs体外扩增效果依赖于微载体种类和MSCs的来源。一方面,bMSCs在Cytopore 2以及aMSCs在Cytodex 1和Cytodex 3上能够在保持其自我更新和分化能力的基础上进行贴附生长,在培养14天内的实际最大扩增倍数分别为4.56、3.53和1.79;另一方面,虽然bMSCs在Cultispher S以及aMSCs在Cultispher S和Cytopore 2上,可分别实现4.84、4.23和3.36倍的扩增,但bMSCs和aMSCs均不能维持其集落形成能力和分化能力。最后,通过研究不同生物活性分子组合对bMSCs贴附生长的维持效果,发现胰岛素、非必需氨基酸溶液、L-VC、EGF、PDGF-BB以及Collagen I能显着促进bMSCs的增殖。基于此,本研究初步筛选出能够维持bMSCs贴附增殖、表面抗原表达和成骨及成脂分化的无血清培养基opt-2。综上,本研究考察了长期培养对不同来源MSCs影响,初步确立了适于MSCs体外扩增的微载体和无血清培养基。当然,无论是微载体培养体系还是opt-2培养基,都有待进一步优化以更大程度地提高MSCs扩增效率。本论文工作为将来建立临床级MSCs的大规模扩增体系提供了科学指导,这将能极大促进MSCs的广泛临床应用。(本文来源于《华东理工大学》期刊2018-05-18）
陶英杰,刘凤娟,毕春晓,任雪冰,曲瑞红[6]（2018）在《山黧豆CASase基因DNA全长序列的扩增及CRISPR/Cas9敲除载体的构建》一文中研究指出【目的】克隆山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因(CASase)DNA全长序列,构建CRISPR/Cas9敲除载体,为筛选"低毒、高硫"山黧豆品系奠定基础。【方法】以萌发4d山黧豆幼苗根部为材料,提取其基因组DNA,利用PCR克隆CASase基因全长;经序列同源性、内含子、外显子、sgRNA靶位点和脱靶分析后,在CASasecDNA上选取5个sgRNA靶位点进行寡核苷酸链设计和体外活性检测;从5个sgRNA靶位点中取活性较高的4个sgRNA,利用酶切连接法构建基因敲除载体pPLHACas9-sgRNA20r、pPLHACas9-sgRNA68r、pPLHACas9-sgRNA225f和pPLHACas9-sgRNA256f。【结果】获得了CASase基因3 143bp的DNA全长序列,该序列编码β-腈基丙氨酸合成酶;在CASase cDNA中选取5个sgRNA靶位点在体外均能有效剪切靶序列;菌落PCR检测结果显示,4个CRISPR/Cas9基因敲除载体构建成功。【结论】克隆了山黧豆CASase基因DNA全长,成功构建了该基因上4个sgRNA靶位点的CRISPR/Cas9敲除载体。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2018年08期）
陈静怡,张泸娇,刘丹慧[7]（2017）在《高GC含量基因NADK2的扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出在构建线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK2)真核表达载体时,该文发现,使用Ex Taq DNA聚合酶扩增无法得到其编码区域全长,5′端缺失一段DNA片段。对其cDNA序列进行分析发现,NADK2编码区GC含量不均衡。起始密码子附近GC含量最高可达92.5%,而3′端终止密码子附近GC含量最低只有27.5%。之后,使用LA Taq及GC缓冲液进行扩增,得到了NADK2基因ORF(open reading frame)全长,并克隆入真核表达载体。该文结果对类似高GC含量DNA片段的PCR扩增有一定的提示作用。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2017年04期）
肖星,张军民,冯姣,陈志文,陈春梅[8]（2016）在《Fonsecaea monophora多聚酮合酶基因的扩增及敲除载体的构建》一文中研究指出目的扩增Fonsecaea monophora中控制黑素合成的多聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)基因并测序,构建PKS基因敲除载体。方法扩增PKS基因,根据测序结果设计引物,从Fonsecaea monophora基因组DNA扩增PKS基因5’-同源臂和3’-同源臂,从质粒pBHt1中扩增潮霉素B抗性标记基因(hyg),最后将各片段插入载体PDHt/sk中。结果测序得到5 389bp大小的PKS基因序列,构建了PKS基因的敲除载体,用酶切及测序等方法鉴定载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora PKS基因敲除载体,为研究PKS基因及黑素的生物学功能奠定了良好的基础。(本文来源于《中国真菌学杂志》期刊2016年02期）
张莎莎,崔琳,宰军华,李强,路玲玲[9]（2014）在《PAI-1启动子序列与荧光素酶报告基因扩增及载体连接问题分析》一文中研究指出目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)启动子荧光素酶表达质粒构建中扩增、转化、酶切及连接的问题。方法利用PCR技术扩增1100 bp长度PAI-1启动子片段,与PUC-19T载体连接,将PUC19T-PAI-1 1100质粒,及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌(DH5a)后扩增,提取并纯化;以BglⅡ,MluⅠ酶切,电泳并回收PAI-1 1100片段和pGL3-Basic酶切大片段,将PAI-1 1100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中,构建含PAI-1 1100片段荧光素酶质粒。结果扩增PAI-11100 bp片段成功,目的片段与载体PUC19T,pGL3-Basic载体连接条件较苛刻,需要增加连接时间及效率的摸索。结论控制扩增时DNA浓度,胶回收,感受态质量,LB平板质量,内切酶,连接时间及质量比等问题都可增加连接成功概率。(本文来源于《中国医药指南》期刊2014年12期）
林坤章,邱建烽,尹志亮,刘朝良,朱保建[10]（2014）在《应用RACE技术扩增柞蚕Lectin基因及原核表达载体构建》一文中研究指出根据其它昆虫Lectin基因同源序列分析,设计引物对,以柞蚕幼虫总RNA为模板,采用RTPCR技术扩增获得了176bp的部分柞蚕Lectin基因序列。根据获得的已知序列分别设计引物,采用3'-RACE和5'-RACE技术手段分离、克隆柞蚕Lectin基因,将编码区全长DNA序列克隆并连接至PET-28a(+)中构建原核表达载体。结果为后续柞蚕Lectin基因原核表达、抗体制备及其功能研究奠定基础。(本文来源于《蚕桑茶叶通讯》期刊2014年02期）
载体扩增论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在多种类型干细胞中,间充质干细胞被认为是最接近临床应用的类型。然而,即使是体内间充质干细胞最丰富的骨髓中,其含量也仅为0.001%-0.01%。为了满足临床治疗的需求,需要进行体外扩增。微载体培养技术被认为是细胞最为有效的增殖方法之一,但干细胞的培养有其独特的特点,需要对载体或培养工艺加以改进。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
载体扩增论文参考文献
[1].朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2019
[2].周炜清,燕星燃,李娟,那向明,马光辉.适于间充质干细胞体外扩增的微载体设计与制备[C].中国生物工程学会第十二届学术年会暨2018年全国生物技术大会论文集.2018
[3].李新新,何雷,王嘉伟,廖成水,李静.禽腺病毒Fiber1、Fiber2和Hexon蛋白基因扩增及真核表达载体的构建[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集.2018
[4].何雷,胡小飞,王嘉伟,廖成水,李静.鸡端粒酶逆转录酶基因的扩增及载体构建[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十叁次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第叁次学术研讨会、中国兽医病理学家第叁次学术研讨会论文集.2018
[5].何晴.基于微载体转瓶体系扩增间充质干细胞的研究[D].华东理工大学.2018
[6].陶英杰,刘凤娟,毕春晓,任雪冰,曲瑞红.山黧豆CASase基因DNA全长序列的扩增及CRISPR/Cas9敲除载体的构建[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2018
[7].陈静怡,张泸娇,刘丹慧.高GC含量基因NADK2的扩增及其真核表达载体的构建[J].中国细胞生物学学报.2017
[8].肖星,张军民,冯姣,陈志文,陈春梅.Fonsecaeamonophora多聚酮合酶基因的扩增及敲除载体的构建[J].中国真菌学杂志.2016
[9].张莎莎,崔琳,宰军华,李强,路玲玲.PAI-1启动子序列与荧光素酶报告基因扩增及载体连接问题分析[J].中国医药指南.2014
[10].林坤章,邱建烽,尹志亮,刘朝良,朱保建.应用RACE技术扩增柞蚕Lectin基因及原核表达载体构建[J].蚕桑茶叶通讯.2014
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