A型肉毒毒素重链在大肠杆菌中的厌氧表达

论文摘要

目的:用大肠杆菌表达可溶性A型肉毒毒素（BoNT/A）重链。方法:按大肠杆菌偏好密码子设计合成重链N端（HN）编码序列,重叠延伸PCR连接HN和重链C端（HC）构成重链基因;将重链基因构建至pTIG-TrxA载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）,厌氧培养与好氧培养分别诱导表达重链;SDS-PAGE比较表达条带,ELISA比较不同表达条件的重链表达水平。结果:测序结果表明正确设计合成了HN编码序列;SDS-PAGE结果显示重链厌氧表达条带的相对分子质量与预期一致,好氧表达条带的相对分子质量比预期小;定性ELISA结果显示静置培养表达的重链活性远远高于摇床培养。结论:BoNT/A重链在大肠杆菌中厌氧条件下表达活性明显高于好氧表达,为厌氧生物蛋白在大肠杆菌中的表达提供了新思路。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 HN编码序列的设计合成
•   1.3 HC表达载体的构建
•   1.4 HC表达条件的考察
•   1.5 ELISA
•   1.6 蛋白表达定量
• 2 结果
•   2.1 HN编码序列的设计
•   2.2 HC表达载体构建
•   2.3 HC表达条件的考察
•     2.3.1 HC好氧表达
•     2.3.2 HC好氧表达与厌氧表达比较
•     2.3.3 HC表达定量
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韦娜,付楚溪,汪建华,熊向华,张惟材

关键词: 型肉毒毒素,重链,大肠杆菌,厌氧条件

来源: 生物技术通讯 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

基金: 国家科技重大专项（2018X09J18105-003）

分类号: Q78

页码: 751-755

总页数: 5

文件大小: 1733K

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