导读:本文包含了抗体筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,噬菌体,不规则,单克隆抗体,对硫磷,蛋白,细胞。
抗体筛选论文文献综述
李俊鑫[1]（2019）在《中和H7N9禽流感病毒全人源单克隆抗体的快速筛选及抗病毒机制研究》一文中研究指出H7N9禽流感病毒是一种甲型流感病毒,可以通过禽类感染人。人感染H7N9禽流感是一种急性呼吸道传染病,可以迅速发展为重症肺炎和急性呼吸窘迫综合征,死亡率高达40%,至今仍然缺乏有效的药物和疫苗。目前,高致病性H7N9禽流感病毒的出现已经对家禽养殖业、畜牧业以及人类健康构成严重的威胁,亟需卫生部门采取有效的控制措施。全人源单克隆抗体能够中和和清除禽流感病毒,在防治禽流感上具有显着的疗效,因此,快速筛选靶向病毒保守中和表位的人源抗体对控制H7N9禽流感疫情具有重大意义。在本研究中,我们利用单个记忆B细胞PCR技术和微量中和H7N9病毒实验,两周内快速地从康复病人的可转化记忆B细胞(switched memory B cells)中鉴定和克隆全人源单克隆抗体3L11和5J13,并分别研究两种全新的人源抗体的抗病毒机制。3L11抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因分别由罕见的VH1-8*01/D2-15*01/JH5*02和VL2-13*01/JL3*02家族基因组成,而且分别带有8.87%和5.55%的体细胞突变,使3L11抗体能够结合H7N9病毒的血凝素(Hemagglutinin,HA),亲和力KD为5.32×10~(-9)M。我们构建的稳转CHO细胞能够生产250.12mg/L的3L11,抗体纯度达99%。在体外,3L11能够广谱中和A/Anhui/1/2013(AH1)、A/Shanghai/2/2013(SH2)、A/Shenzhen/Th004/2017(SZ4)、A/Shanghai/1/2013(SH1)等H7N9禽流感病毒,也可以介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)清除感染病毒的细胞。对3L11的H7N9逃逸病毒株测序发现,病毒的HA蛋白发生了G151R(Gly~(151)→Arg~(151))和S152P(Ser~(152)→Pro~(152))的氨基酸替换,这表明3L11的中和表位是在HA头部受体结合位点(receptor binding site,RBS)附近的抗原位点A(RRSGSS)。而且通过序列比对的结果发现,流行的H7N9野生型病毒都没有这两个氨基酸突变。因此,3L11有极大潜力能够中和所有出现过的H7N9流行毒株。更重要的是,无论是预防实验还是治疗实验,3L11都可以完全地保护小鼠免受H7N9病毒的致命攻击。5J13抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因分别由VH3-30*03/D2-2*01/JH6*02和Vκ4-1*01/Jκ4*01组成,并且分别带有15.25%和4.42%的体细胞突变。5J13特异地高亲和力结合H7N9病毒的HA蛋白,KD值为1.95×10~(-10)M。稳转5J13抗体基因的CHO细胞能够生产84.48mg/L的5J13,抗体纯度达99%。在体外,5J13能够抑制病毒的血凝作用和膜融合作用,从而高效地中和了H7N9病毒;在体内,5J13能够预防和治疗致命的H7N9病毒感染小鼠。更重要的是,通过氢氘交换质谱、逃逸病毒株测序和竞争结合实验等结果发现,5J13的表位在HA蛋白头部RBS的对面,是一个之前国内外从未报道过的全新的中和表位,其中一个氨基酸E89K(Glu~(89)→Lys~(89))的突变能够导致5J13失去结合病毒的活性。我们把这个全新的中和表位命名为抗原位点J。综上所述,本项研究工作证明了记忆B细胞PCR技术快速鉴定、克隆抗流感病毒人源抗体的可行性,对迅速控制严峻的特别是未来新出现的流感疫情具有重大的指导意义。我们获得了两个新的中和H7N9病毒的人源抗体,为预防和治疗H7N9禽流感提供了优质的候选抗体药物。另外,两个人源抗体的抗病毒机制以及全新中和表位的发现,将有力地促进通用型禽流感疫苗及广谱性中和抗体的研究和发展。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)》期刊2019-12-01）
杜虎,王瑞,杨晓珊,邢艳清,吴廷全[2]（2019）在《黄瓜抗体库的建立及抗、感差异蛋白的筛选》一文中研究指出利用黄瓜抗、感疫病材料,建立抗疫病相关抗体组平台,筛选和鉴定黄瓜抗、感材料差异蛋白,并在黄瓜资源中进行验证,为今后的蛋白高通量检测和研究提供平台,发掘黄瓜的抗疫病相关蛋白,解析黄瓜抗疫病分子机理,为抗疫病分子育种打下基础。(1)构建黄瓜子叶和茎蛋白抗体组:选取2份对疫病高抗和2份高感的黄瓜材料,在子叶和茎接种瓜类疫霉菌(Phytophthora melonis Katsura)后3、6、12、24 h分别取样,提取蛋白,等量混合,均一化处理后分段免疫小鼠,抽取小鼠脾脏细胞,将其与骨髓瘤细胞进行融合制作单克隆抗体库。(2)筛选、鉴定黄瓜抗、感材料中的差异蛋白:将得到的单克隆抗体点制成抗体芯片,利用该芯片筛选黄瓜抗、感极端材料在瓜类疫霉菌侵染条件下的差异蛋白,并利用免疫沉淀(IP)富集–质谱测序方法对差异蛋白进行鉴定。本研究中建成的黄瓜抗体库容量达到15 000个单克隆抗体,覆盖约5 000个黄瓜蛋白。基于此抗体库制作黄瓜蛋白抗体芯片,并利用该芯片对黄瓜在接种后3、6、12、24 h分别检测黄瓜抗、感材料中的蛋白表达,筛选出抗、感黄瓜材料差异蛋白470个,其中受疫霉菌诱导上调的67个,下调的403个,并利用IP WB方法已经鉴定出11个蛋白。本研究通过建立黄瓜抗体库平台,不仅为黄瓜疫病抗性研究打下了坚实的基础,越来越多的抗疫病蛋白将被鉴定和验证,另外也为黄瓜其它性状在蛋白水平上进行研究提供了良好的平台。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）
杨艳丽,张齐,张星星,许龙,黄新[3]（2019）在《抗牛结核分枝杆菌VHH抗体T7噬菌体库的构建与筛选》一文中研究指出为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段。将目的片段用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体。对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×10~8 PFU,库阳性率为85.7%。通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性。本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年10期）
李梦婕,田俊,韦曦[4]（2019）在《基于抗体芯片技术筛选牙髓炎诊断标记物的初步研究》一文中研究指出目的：获取大鼠牙髓组织细胞因子差异表达谱，筛选差异表达因子并揭示其与牙髓炎组织病理表现的相关性，探讨利用生物标记物评估牙髓炎症状态的可行性。材料与方法：LPS诱导建立大鼠上切牙实验性牙髓炎模型，HE染色观察牙髓炎症情况，并对冠、根部牙髓炎症程度进行分段评分。采用抗体芯片技术检测LPS作用12 h和72 h后炎症牙髓与正常牙髓67个细胞因子表达水平，筛选差异显着的因子作为牙髓炎潜在生物标记物。ELISA验证差异表达因子在健康牙髓以及(本文来源于《2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编》期刊2019-10-11）
王垚,金前跃,周稳,李旭锋,柴永笑[5]（2019）在《猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选》一文中研究指出为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。(本文来源于《河南农业科学》期刊2019年10期）
贾涛[6]（2019）在《抗体筛选红细胞等倍稀释对凝聚胺法抗体筛查结果的影响》一文中研究指出不规则抗体的产生是由于在输血或妊娠过程中,患者本身不含抗原红细胞刺激机体产生了免疫应答,经免疫应答后产生了免疫抗体。提高不规则抗体的检出率,对于临床安全输血有重要价值。早期50%患者的不规则抗体筛查只有二步酶法和凝聚胺法,但是凝聚胺方法结果的判读是比较主观的,日常工(本文来源于《中国冶金工业医学杂志》期刊2019年04期）
张玉琪,张瑾如,王锋,李家冬,司睿[7]（2019）在《对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究》一文中研究指出对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段(15 kDa),来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×10~(7 )cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法(Phage ELISA)鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。(本文来源于《分析化学》期刊2019年09期）
王慧[8]（2019）在《论述输血前不规则抗体筛选与输血安全的重要性》一文中研究指出目的讨论输血前不规则抗体筛选与输血安全的重要性。方法选取2017年1月到2018年1月对我院输液科收治的240例患者进行输血前不规则抗体筛选者作为研究对象,随机分为对照组120例,观察组120例,对照组患者采用输血前不进行不规则抗体筛选,观察组患者采用微柱凝胶剂术进行输血前不规则抗体筛选。比较观察两组患者在输血中不良反应的发生几率。结果观察组的不良反应发生几率明显低于对照组,两组数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论输血前进行不规则抗体的筛选可以有效提高输血的安全性,减少不良反应的发生几率,这对患者的生命健康有着重要意义,值得临床上推广应用。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2019年54期）
杨艳艳,乔松林,李睿,郭军庆,李青梅[9]（2019）在《IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究》一文中研究指出为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H_2O_2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年03期）
柴宝[10]（2019）在《不规则抗体筛选在新生儿溶血病中的临床诊疗价值》一文中研究指出目的探析不规则抗体筛选对于新生儿溶血病的临床诊疗价值。方法在2015年6月—2018年7月间于驻马店市中心医院选取232例新生儿溶血病患儿作为研究分析对象,抽取3～4 ml抗凝血离心后获取血清,使用微柱凝胶法对不规则抗体进行筛选。结果纳入患儿中共有3例(1.29%)经微柱凝胶免疫检测确认存在不规则抗体,经鉴定谱细胞检测,其中有1例抗-E,1例抗-D,1例抗-C。依据检测结果选择合适的血源对3例患儿进行治疗,患儿均痊愈出院。结论不规则抗体筛选对于新生儿溶血病临床临床诊断和治疗具有重要意义,可检测出患儿是否存在不规则抗体,为选择合适血源提供依据,可提高输血安全性,避免不良反应的发生,确保治疗效果。(本文来源于《黑龙江医学》期刊2019年06期）
抗体筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
利用黄瓜抗、感疫病材料,建立抗疫病相关抗体组平台,筛选和鉴定黄瓜抗、感材料差异蛋白,并在黄瓜资源中进行验证,为今后的蛋白高通量检测和研究提供平台,发掘黄瓜的抗疫病相关蛋白,解析黄瓜抗疫病分子机理,为抗疫病分子育种打下基础。(1)构建黄瓜子叶和茎蛋白抗体组:选取2份对疫病高抗和2份高感的黄瓜材料,在子叶和茎接种瓜类疫霉菌(Phytophthora melonis Katsura)后3、6、12、24 h分别取样,提取蛋白,等量混合,均一化处理后分段免疫小鼠,抽取小鼠脾脏细胞,将其与骨髓瘤细胞进行融合制作单克隆抗体库。(2)筛选、鉴定黄瓜抗、感材料中的差异蛋白:将得到的单克隆抗体点制成抗体芯片,利用该芯片筛选黄瓜抗、感极端材料在瓜类疫霉菌侵染条件下的差异蛋白,并利用免疫沉淀(IP)富集–质谱测序方法对差异蛋白进行鉴定。本研究中建成的黄瓜抗体库容量达到15 000个单克隆抗体,覆盖约5 000个黄瓜蛋白。基于此抗体库制作黄瓜蛋白抗体芯片,并利用该芯片对黄瓜在接种后3、6、12、24 h分别检测黄瓜抗、感材料中的蛋白表达,筛选出抗、感黄瓜材料差异蛋白470个,其中受疫霉菌诱导上调的67个,下调的403个,并利用IP WB方法已经鉴定出11个蛋白。本研究通过建立黄瓜抗体库平台,不仅为黄瓜疫病抗性研究打下了坚实的基础,越来越多的抗疫病蛋白将被鉴定和验证,另外也为黄瓜其它性状在蛋白水平上进行研究提供了良好的平台。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗体筛选论文参考文献
[1].李俊鑫.中和H7N9禽流感病毒全人源单克隆抗体的快速筛选及抗病毒机制研究[D].中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院).2019
[2].杜虎,王瑞,杨晓珊,邢艳清,吴廷全.黄瓜抗体库的建立及抗、感差异蛋白的筛选[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019
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[10].柴宝.不规则抗体筛选在新生儿溶血病中的临床诊疗价值[J].黑龙江医学.2019
论文知识图
