地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用

论文摘要

目的制备地高辛（digoxigenin,DIG）标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2. 1 RNA原位杂交探针。经全胚胎原位杂交（whole-mount in situ hybridization,WM-ISH）技术分析胚胎8. 5、9. 5、10. 5 d小鼠体内Nkx2. 1基因的表达情况。结果制备的探针浓度为1 521. 986 ng/mL,纯度A260/280=2. 39。Nkx2. 1基因反义探针能高效检测到Nkx2. 1基因在胚胎8. 5、9. 5及10. 5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号。结论成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2. 1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2. 1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 载体及菌株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 实验动物
•   1.4 引物设计及合成根据NCBI中登录的小鼠Nkx2.1
•   1.5 目的基因的合成
•   1.6 重组质粒的构建及表达
•   1.7 DIG-Nkx2.1 RNA探针的制备
•   1.8 DIG-Nkx2.1 RNA探针的WM-ISH
• 2 结果
•   2.1 重组质粒的鉴定
•   2.2 Nkx2.1基因探针模板的鉴定
•   2.3 DIG-Nkx2.1 RNA探针制备
•   2.4 DIG-Nkx2.1 RNA探针WM-ISH结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张凯丽,孙雨晴,王宇飞,赵虹,郝宇卉,杨丽红,白云,刘志贞

关键词: 基因,探针,全胚胎原位杂交

来源: 中国生物制品学杂志 2019年08期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,儿科学,神经病学

单位: 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,忻州职业技术学院医学系基础医学教研室,山西省妇幼保健院妇产科

基金: 国家自然科学基金(81300487),山西省回国留学人员科研资助项目(2016-051),山西省回国留学人员科研资助项目(2012-048),山西省重点研发计划(指南)项目(201703D421022)

分类号: R748;Q78

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002720

页码: 870-873+879

总页数: 5

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