鸭疫里默氏杆菌类似crp基因的鉴定及其突变株对雏鸭免疫效果的评价

论文摘要

旨在鉴定鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer）中的crp基因,并探究该基因与菌株毒力的关系,了解crp基因突变株的免疫保护效力,为开发新型R.anatipestifer减毒活疫苗奠定基础。采用P-BLAST在R.anatipestifer蛋白质组中搜寻与沙门菌crp基因相似的蛋白基因,发现R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因与沙门菌crp基因相似度为45%;将B739-0373基因克隆到表达载体上,并回补到沙门菌Δcrp突变株中,利用麦芽糖-麦康凯培养基颜色反应对其糖代谢功能进行鉴定,结果发现该基因可完全回补沙门菌自身crp的缺失,推测R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因具有类似沙门菌crp基因的功能;利用同源重组和自杀质粒,构建R.anatipestifer CH-1Δcrp突变株,比较野生及突变株的生长情况和毒力(包括黏附率、侵染率、LD50、在雏鸭肝脑中的定殖能力),结果表明,crp基因的缺失使菌株生长变得缓慢,黏附力（P<0.01）和侵染力（P<0.001）显著下降,对雏鸭的半数致死量(LD50)显著提高,在雏鸭肝脏、脑中定殖能力也显著下降（P<0.01）;在CH-1Δcrp突变株免疫雏鸭后7,14,21 d,检测雏鸭血清中IgG水平,并以R.anatipestifer野生株对免疫后的雏鸭进行肌注攻毒,观察其临床症状和免疫保护率,发现Δcrp突变株能刺激雏鸭产生高水平的IgG抗体（P<0.01）,对雏鸭的免疫保护率为100%。综上表明, B739-0373基因鉴定为R.anatipestifer CH-1株的类似crp基因,可全局调控该菌株的生长和毒力;安全剂量的CH-1Δcrp突变株可诱导雏鸭产生较强的免疫保护效力,可作为新型减毒活疫苗的候选菌株。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物合成及序列测定
•   1.3 沙门菌回补株构建及CH-1株类似crp基因的鉴定
•   1.4 CH-1 Δcrp突变株的构建
•   1.5 CH-1 Δcrp突变株生长曲线的测定
•   1.6 CH-1 Δcrp突变株黏附和侵染能力测试
•   1.7 CH-1 Δcrp突变株对雏鸭半数致死量（LD50）的测定
•   1.8 CH-1 Δcrp突变株定殖力的测试
•   1.9 CH-1 Δcrp突变株免疫保护效果的测试
•   1.10 数据统计分析
• 2 结果
•   2.1 RA CH-1 crp基因的鉴定
•   2.2 CH-1 Δcrp 突变株的构建与鉴定
•   2.3 CH-1野生株及其 Δcrp突变株的生长曲线
•   2.4 CH-1野生株及其Δcrp突变株的黏附力和侵染力
•   2.5 CH-1野生株与 Δcrp突变株对雏鸭的半数致死量
•   2.6 CH-1野生株与 Δcrp突变株定殖能力的比较
•   2.7 CH-1 Δcrp突变株的免疫保护效果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘青,卞晓萍,唐一波,王豪举

关键词: 鸭疫里默氏杆菌,沙门菌,环腺苷酸受体蛋白基因,毒力,免疫保护效力

来源: 中国兽医学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西南大学动物科技学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(31472179)

分类号: S852.61

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.09

页码: 2322-2329

总页数: 8

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