导读:本文包含了猪氨基肽酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪德尔塔冠状病毒,猪氨基肽酶N,受体
猪氨基肽酶论文文献综述
卢曼曼,张家林,王洪峰,时洪艳,张鑫[1]（2017）在《猪氨基肽酶N不是猪德尔塔冠状病毒入侵宿主细胞的受体》一文中研究指出猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的冠状病毒,能够引起猪只发生呕吐和水样腹泻,临床症状与猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)相似。相关研究表明猪氨基肽酶N(pAPN)是PED病毒(PEDV)和TGE病毒(TGEV)入侵宿主细胞的功能性受体。为研究pAPN是否是PDCoV入侵宿主细胞的受体,本研究以TGEV为指示病毒,通过BHK-pAPN细胞感染试验、pAPNRNA干扰试验、ST细胞过表达pAPN试验、可溶性pAPN阻断试验,发现BHK-pAPN细胞是PDCoV非易感细胞,在易感细胞ST上沉默和过表达pAPN对PDCoV的增殖并无影响,可溶性pAPN不能阻止PDCoV感染ST细胞。这些研究结果表明pAPN不是PDCoV入侵宿主细胞的受体,而且对PDCoV的增殖无影响。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年09期）
焦文超[2]（2016）在《抗猪氨基肽酶单克隆抗体的制备及阻断氨基肽酶受体功能的分析》一文中研究指出猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)这使两种病毒是哺乳仔猪高致死率的主要原因,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。如何有效防治这两种疾病是当前亟待解决的问题,而对相关致病机理的研究可为有效防治提供理论依据。猪氨基肽酶(porcine aminopeptidase N,p APN)是一类锌离子依赖性的膜结合II型金属糖蛋白,存在于细胞表面,广泛分布于哺乳动物的多种组织细胞的表面,在中枢神经系统的突触膜、粒细胞和单核细胞、肾近曲小管上皮和肺脏细胞表面都有高水平的表达,尤其在小肠微绒毛表面大量存在,主要功能是水解肽、酰胺等结构中的酰胺键,从而释放出不同的N-中性氨基酸。APN作用的天然底物包括血管作用肽、神经肽激素、细胞因子和免疫调节剂等,因此它能参与很多重要过程的深度反应。研究发现,PEDV和TGEV均以pAPN作为细胞感染受体,同时p APN的抗体可以有效阻断p APN与PEDV和TGEV的结合。因此,制备抗p APN抗体及对其生物学特性的分析可以为有效防治PED和TGE提供理论依据和试验数据。本研究以天然p APN蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合,通过间接ELISA方法筛选,最终获得2株抗p APN的杂交瘤细胞系(命名为3E5和2E3),这两株细胞分泌的抗体亚类分别为IgG1和IgM,效价分别为1:1000和1:500。通过Western blot证实3E5株和2E3株分泌的抗体是针对p APN的SPC段(p APN 500aa-963aa段),且与天然p APN可发生特异性结合,免疫荧光实验证实3E5株和2E3分泌的抗体可以与IEC-2细胞和PK-15细胞上的天然p APN蛋白发生特异性结合。将抗p APN的单克隆抗体与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再分别感染PEDV和TGEV,于接毒后24h、48h、72h在显微镜下观察病变效果,结果表明,抗p APN的单抗可有效阻断p APN受体,且IEC-2细胞和PK-15细胞病变均被不同程度的抑制。进一步收取吸附后、病毒感染24h和病毒感染48h的细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,并对这叁组样品进行显着性分析。结果表明,经p APN单克隆抗体作用后,细胞感染物中的病毒拷贝数显着降低,表明抗p APN单抗有效地阻断了p APN受体与病毒的结合,并进一步抑制了病毒的繁殖。将p APN单克隆抗体分别做1:10、1:100和1:1000倍稀释,将不同稀释度的p APN单抗分别与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再接种PEDV和TGEV,于病毒吸附后,收取细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,检测分析不同浓度p APN单抗对p APN受体的阻断作用。结果表明,不同浓度的pAPN单抗都具有阻断p APN受体,抑制p APN受体与病毒结合,从而抑制病毒在细胞中的吸附的能力,且随着单抗浓度的降低阻断作用也随之降低。此外,将抗p APN的单克隆抗体与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再分别感染不同拷贝数的PEDV和TGEV,于病毒吸附后,收取细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,检测分析p APN单抗对p APN受体阻断后对不同浓度病毒增殖的抑制作用。结果表明,p APN单抗对不同浓度的病毒都具有阻断作用,且不同浓度病毒组p APN单抗对p APN受体的阻断作用并无明显差异。以上结果证明,3E5株和2E3株分泌的抗体对p APN具有较高的特异性和亲和性,3E5株可有效阻断p APN受体与TGEV的结合,并抑制TGEV在细胞中的感染和增殖,为进一步设计抗病毒药物、封闭病毒受体、阻止病毒感染等研究奠定基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2016-06-01）
单智夫,唐丽杰,乔薪媛,葛俊伟,李一经[3]（2012）在《猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定》一文中研究指出为研究猪的氨基肽酶(Porcine aminopeptidase,pAPN)的特异性功能区域及作用机制,将除去信号肽的pAPN分为SPA,SPB和SPC叁段,利用一对同尾酶XholI和SalI将信号肽分别与SPA,SPB和SPC相连接后再构建到杆状病毒表达载体pFastBacTM1上,通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系进行蛋白表达。结果表明,经SDS-PAGE分析可见获得的目的蛋白与预期大小相一致,即SPA约为42 ku,SPB和SPC相同,约为56 ku的分泌蛋白;经western-blot鉴定叁段蛋白均可与天然的pAPN抗血清特异性结合,表明已经成功获得SPA,SPB和SPC叁段蛋白,可为进一步研究pAPN特异性功能区域奠定基础。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2012年09期）
杨殿奎[4]（2008）在《猪氨基肽酶在MDCK细胞中的表达与鉴定》一文中研究指出研究发现氨基肽酶(aminopeptidase, APN)是冠状病毒的细胞感染受体,同属于I群冠状病毒的猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、人冠状病毒229E、猫冠状病毒等都以相应的氨基肽酶作为其细胞感染的受体。本研究以pMD18-T-pAPN为模版,设计了一对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,将pAPN基因克隆出来并插入到真核表达载体pEFP-C1的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建了重组质粒pEGFP-C1-pAPN。经公司测序,所插入的pAPN基因连接位点正确,并利用叁维蛋白空间结构预测软件预测分析,pAPN基因可以和GFP基因融合表达,所表达出的蛋白的空间结构相互没有影响,与自然存在的蛋白结构相符。选用PEDV非许可性细胞犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney, MDCK),通过脂质体介导的方法将重组质粒转染至MDCK细胞中,利用载体pEFP-C1含有中新霉素磷酸转移酶抗性基因的特性,向细胞培养液中添加新霉素抗性药物G418筛选,同时运用荧光检测手段,实时检测GFP蛋白的表达情况。经过筛选,筛选出了几株有G418抗性MDCK细胞系,此时,提取该MDCK细胞的总RNA,用OligdT将mRNA进行反转录,针对pAPN基因设计一对检测引物进行RT-PCR反应,检测出了3株转染MDCK细胞有pAPN基因mRNA转录。用PEDV对该3株MDCK细胞系进行感染,有2株产生细胞病变,证明了pAPN在MDCK细胞中表达;同时将该MDCK细胞传10代后,去除选择压力G418药物,并续传至20代后,PEDV感染实验结果还可以产生病变,证明了pAPN在该MDCK细胞中表达稳定。经抗pAPN血清及抗PEDV S蛋白血清中和实验的验证,进一步表明pAPN在PEDV细胞感染过程中起关键作用,推测PEDV S蛋白也参与此过程中,很可能是受体是pAPN,配体是PEDV S蛋白。本实验结果在MDCK细胞上表达了pAPN,经证明PEDV可以在该细胞系上繁殖,从理论上阐明了pAPN最为冠状病毒受体在PEDV感染中的作用,为冠状病毒受体的研究提供了良好的技术平台。(本文来源于《东北农业大学》期刊2008-04-10）
猪氨基肽酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)和猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE)这使两种病毒是哺乳仔猪高致死率的主要原因,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。如何有效防治这两种疾病是当前亟待解决的问题,而对相关致病机理的研究可为有效防治提供理论依据。猪氨基肽酶(porcine aminopeptidase N,p APN)是一类锌离子依赖性的膜结合II型金属糖蛋白,存在于细胞表面,广泛分布于哺乳动物的多种组织细胞的表面,在中枢神经系统的突触膜、粒细胞和单核细胞、肾近曲小管上皮和肺脏细胞表面都有高水平的表达,尤其在小肠微绒毛表面大量存在,主要功能是水解肽、酰胺等结构中的酰胺键,从而释放出不同的N-中性氨基酸。APN作用的天然底物包括血管作用肽、神经肽激素、细胞因子和免疫调节剂等,因此它能参与很多重要过程的深度反应。研究发现,PEDV和TGEV均以pAPN作为细胞感染受体,同时p APN的抗体可以有效阻断p APN与PEDV和TGEV的结合。因此,制备抗p APN抗体及对其生物学特性的分析可以为有效防治PED和TGE提供理论依据和试验数据。本研究以天然p APN蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合,通过间接ELISA方法筛选,最终获得2株抗p APN的杂交瘤细胞系(命名为3E5和2E3),这两株细胞分泌的抗体亚类分别为IgG1和IgM,效价分别为1:1000和1:500。通过Western blot证实3E5株和2E3株分泌的抗体是针对p APN的SPC段(p APN 500aa-963aa段),且与天然p APN可发生特异性结合,免疫荧光实验证实3E5株和2E3分泌的抗体可以与IEC-2细胞和PK-15细胞上的天然p APN蛋白发生特异性结合。将抗p APN的单克隆抗体与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再分别感染PEDV和TGEV,于接毒后24h、48h、72h在显微镜下观察病变效果,结果表明,抗p APN的单抗可有效阻断p APN受体,且IEC-2细胞和PK-15细胞病变均被不同程度的抑制。进一步收取吸附后、病毒感染24h和病毒感染48h的细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,并对这叁组样品进行显着性分析。结果表明,经p APN单克隆抗体作用后,细胞感染物中的病毒拷贝数显着降低,表明抗p APN单抗有效地阻断了p APN受体与病毒的结合,并进一步抑制了病毒的繁殖。将p APN单克隆抗体分别做1:10、1:100和1:1000倍稀释,将不同稀释度的p APN单抗分别与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再接种PEDV和TGEV,于病毒吸附后,收取细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,检测分析不同浓度p APN单抗对p APN受体的阻断作用。结果表明,不同浓度的pAPN单抗都具有阻断p APN受体,抑制p APN受体与病毒结合,从而抑制病毒在细胞中的吸附的能力,且随着单抗浓度的降低阻断作用也随之降低。此外,将抗p APN的单克隆抗体与IEC-2细胞和PK-15细胞作用后,再分别感染不同拷贝数的PEDV和TGEV,于病毒吸附后,收取细胞感染物,提取RNA,通过荧光定量PCR检测病毒拷贝数,检测分析p APN单抗对p APN受体阻断后对不同浓度病毒增殖的抑制作用。结果表明,p APN单抗对不同浓度的病毒都具有阻断作用,且不同浓度病毒组p APN单抗对p APN受体的阻断作用并无明显差异。以上结果证明,3E5株和2E3株分泌的抗体对p APN具有较高的特异性和亲和性,3E5株可有效阻断p APN受体与TGEV的结合,并抑制TGEV在细胞中的感染和增殖,为进一步设计抗病毒药物、封闭病毒受体、阻止病毒感染等研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪氨基肽酶论文参考文献
[1].卢曼曼,张家林,王洪峰,时洪艳,张鑫.猪氨基肽酶N不是猪德尔塔冠状病毒入侵宿主细胞的受体[J].中国预防兽医学报.2017
[2].焦文超.抗猪氨基肽酶单克隆抗体的制备及阻断氨基肽酶受体功能的分析[D].东北农业大学.2016
[3].单智夫,唐丽杰,乔薪媛,葛俊伟,李一经.猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定[J].东北农业大学学报.2012
[4].杨殿奎.猪氨基肽酶在MDCK细胞中的表达与鉴定[D].东北农业大学.2008