烟草合子时期表达基因NtZE1的克隆及结构分析

论文摘要

通过分析烟草Nicotianatabacum长形合子和卵细胞的c DNA差减文库,获得一条合子时期表达的基因NtZE1的EST序列。分析显示,EST序列中含有315 bp编码序列,通过RT-PCR（reverse transcription polymerase chain reaction）成功克隆到该序列。生物信息学分析显示,NtZE1基因编码105个氨基酸残基;Nt ZE1蛋白为不稳定的亲水性蛋白,具有信号肽;蛋白二级结构多为α-螺旋,软件预测该蛋白可能定位于细胞外。利用Genome walking技术获得ATG起始密码子前共2578bp的5’侧翼序列（启动子和5’UTR）,将该序列连入EGFP核定位载体中并通过瞬时表达技术使其在小叶烟草N. benthamiana叶表皮细胞中表达,有明显的绿色荧光,证实所获得的5’侧翼序列具有启动基因表达的活性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 植物材料
•     1.1.3 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 烟草基因组文库获得和NtZE1基因5’侧翼区克隆
•     1.2.2 烟草长形合子c DNA的获得和NtZE1基因编码序列验证
•     1.2.3 NtZE1基因启动子的EGFP核定位表达载体构建
•     1.2.4 NtZE1基因启动子活性检测
•     1.2.5 生物信息学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 烟草合子的分离
•   2.2 烟草NtZE1基因的克隆
•   2.3 NtZE1蛋白基本理化性质
•   2.4 NtZE1蛋白二、三级结构预测
•   2.5 NtZE1蛋白亚细胞定位及信号肽序列
•   2.6 NtZE1基因5’侧翼序列分析及其启动基因表达的活性检测
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 罗岸,左紫怡,焦雄,刘夏

关键词: 烟草,合子,基因克隆,生物信息学分析,基因表达活性检测

来源: 亚热带植物科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 长江大学生命科学学院

基金: 长江大学大学生创新创业训练计划(2017071)

分类号: Q943.2

页码: 103-108

总页数: 6

文件大小: 1203K

下载量: 52