导读:本文包含了膜受体结合区论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:受体,毒素,病毒,亲和性,诱导,艰难,珠母。
膜受体结合区论文文献综述
曹丹煜,陈刚,张健东,汤保贵,周晖[1]（2019）在《马氏珠母贝α2-巨球蛋白受体结合区酵母双杂交系统的构建及自激活检测》一文中研究指出【目的】构建马氏珠母贝(Pinctada martensii)酵母双杂交文库及α2-巨球蛋白受体结合区诱饵载体,检测其在酵母细胞中的自激活作用。【方法】利用CLONTECH SMART技术及酵母体内同源重组的方法构建马氏珠母贝酵母双杂交cDNA文库;将α2-巨球蛋白受体结合区克隆至pGADT7载体,并转化AH109酵母感受态细胞,检测自激活作用。【结果与结论】酵母双杂交文库容量为1.11×107克隆/mL,重组率大于90%;菌落PCR结果显示,插入片段长度均在500bp以上;诱饵质粒成功转化至AH109菌株,且无自激活性,符合文库构建指标,可用于文库筛选。(本文来源于《广东海洋大学学报》期刊2019年01期）
周旋,寇志华,郭彦,李江凡,何雷[2]（2018）在《一种不依赖于活病毒的中东呼吸综合征冠状病毒受体结合区特异性中和抗体检测方法的建立》一文中研究指出目的拟建立一种不依赖于活病毒和高等级生物安全条件,快速简便检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERSCoV)受体结合区(RBD)特异性的中和抗体。方法利用哺乳动物表达系统表达重组rRBD-Fc蛋白;应用流式细胞术检测rRBD-Fc蛋白与Huh-7细胞结合的最佳浓度,建立通过流式细胞术检测rRBD-Fc与Huh-7结合活性的方法,并利用无关蛋白验证结合的特异性;在此基础上,利用RBD特异性中和抗体、RBD特异性非中和抗体、MERS-CoV RBD免疫小鼠血清和无关抗体建立能够检测中和抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,并与实毒中和试验进行比较,评价方法的一致性;应用建立的中和抗体检测方法进行血清学检测。结果成功表达了rRBD-Fc蛋白,rRBD-Fc蛋白能够与Huh-7细胞特异性结合,并确定了rRBD-Fc与Huh-7细胞结合的最佳剂量;在此基础上建立了通过流式细胞术检测抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,结果表明,检测方法能够区分具有中和活性的RBD特异性中和抗体、rRBD-Fc免疫小鼠血清和其他抗体,具有特异性,且能够反映中和活性的强弱。该方法在检测12株中和抗体时,与传统的实毒中和试验检测结果具有很好的一致性,能够有效应用于血清学检测。结论成功建立了一种不依赖活病毒和高等级生物安全条件,即可快速检测MERS-CoV RBD特异性中和抗体的方法,为针对MERS-CoV疫苗设计和抗体效果快速评价、血清学调查和免疫保护机制研究提供了一种更加简便、安全的技术手段。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2018年05期）
唐雨博,徐文章,孙艺学,王杨,石立北[3]（2017）在《H9N2亚型流感病毒血凝素受体结合区定点突变株拯救及其受体亲和性鉴定》一文中研究指出引言我国自1992年首次分离到H9N2亚型流感病毒后,该亚型病毒一直在禽群中广泛流行,其分离率居于各亚型流感病毒之首~([1-2])。A型流感病毒血凝素受体结合区与细胞表面唾液酸受体结合,是病毒感染宿主的第一步,也是决定病毒宿主感染谱的重要因素。HA受体结合区(RBD)主要由130-1(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集》期刊2017-08-20）
邓颖琦[4]（2017）在《H9N2亚型流感病毒受体结合区位点对病毒受体亲和性影响研究》一文中研究指出本研究利用重迭PCR技术,对H9N2亚型Y280亚系流感病毒A/Chicken/Jilin/DH102/2012(H9N2)(DH102)的HA受体结合区220-loop中的226位和227位进行了氨基酸置换,应用反向遗传技术拯救出野生型未突变病毒Re DH102以及3株定点突变病毒—Re DH102/L226Q、Re DH102/L226M、Re DH102/Q227M。固相酶联受体结合实验结果显示,HA226L使病毒偏嗜结合人型受体;HA226Q使病毒偏嗜结合禽型受体;HA226M使病毒与受体的结合能力介于HA226L和HA226Q之间,且与人型受体结合能力高于禽型受体;HAQ227M突变不会改变病毒的受体偏嗜性,但可影响病毒与某些种类人型受体的结合能力。无论是HA226位和227位突变病毒,还是未突变病毒,均能与鸡、BALB/c小鼠以及人的肺组织结合,但组内无显着差异。细胞间接免疫荧光和流式检测结果表明,与未突变株Re DH102相比,Re DH102/226Q、Re DH102/227M与高表达禽型受体的CEF细胞、A549细胞的结合能力显着提高(p<0.05);Re DH102/226M与A549细胞的结合能力显着提高(p<0.05);但突变与未突变病毒与人型和禽型受体含量相当的MDCK细胞的结合能力无显着差异。病毒复制动力学实验结果表明,HA226位为L和M的病毒在MDCK细胞上的增殖能力差异不显着;HA226位为Q的病毒增殖能力显着降低(p<0.01),且空斑形态变小;HA226位为L、227位为M的病毒增殖能力显着降低(p<0.05),但空斑形态未发生改变。以上研究结果表明,H9N2亚型流感病毒HA受体结合位点226位氨基酸显着影响病毒的受体亲和能力,而HA227位对病毒的受体偏嗜性无影响,但对病毒的受体结合能力有一定影响。HA226位和227位突变可以影响病毒的细胞嗜性和增殖能力。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-06-01）
陈伟,刘文恩[5]（2015）在《抗艰难梭菌毒素B受体结合区单克隆抗体制备及初步应用研究》一文中研究指出目的(1)探讨CDB3融合蛋白诱导表达最佳条件,分析其表达形式,并对其进行纯化。(2)制备抗CDB3单克隆抗体,纯化抗体并检测其特性。(3)建立一种双抗夹心ELISA,并用于临床腹泻患者粪便标本的艰难梭菌毒素B的检测。研究方法(1)采用正交试验确定优化的融合蛋白表达条件,通过SDS-PAGE分析其表达形式,通过Western blot鉴定,并用GST SefinoseTM Kit对融合蛋白进行纯化。(2)通过杂交瘤技术制备抗(本文来源于《中华医学会第十二次全国临床微生物学术年会暨第十一次全球华人临床微生物学与感染症学术年会论文汇编》期刊2015-08-06）
潘婷[6]（2015）在《中东呼吸综合征冠状病毒受体结合区蛋白在昆虫细胞中的重组表达与免疫保护作用研究》一文中研究指出目的:利用昆虫杆状病毒表达系统重组表达MERS-Co V S1和RBD蛋白,明确其作为重组疫苗靶抗原的免疫原性和诱导中和抗体的能力;利用制备的S1重组蛋白筛选制备具有中和活性的抗MERS-Co V单克隆抗体。方法:(1)构建含有MERS-Co V S1基因的重组杆状病毒质粒,转染SF9细胞包装杆状病毒。重组病毒传代3次获得种子病毒,感染Sf9细胞,收获感染上清,通过镍离子亲和层析纯化获得S1重组蛋白。利用纯化的S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠血清抗原特异性的抗体水平;通过假病毒以及活病毒中和试验检测血清中抗体的中和活性。同时利用重组表达S1蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-Co V假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。(2)利用生物信息学方法对MERS-Co V S1基因序列、二级结构、柔性分析;同时对MERS-Co V RBD、MERS-Co V单克隆抗体及MERS-Co V RBD与细胞受体DPP4结合的晶体结构进行分析预测在S1内部具有免疫保护功能区段355-590aa;针对预测的免疫功能保护区设计添加foldon序列,构建含有MERS-Co V RBD、MERS-Co V RBD Fd基因的重组杆状病毒质粒,转染SF9细胞包装杆状病毒。重组病毒传代3次获得种子病毒进而感染Sf9细胞,收获感染上清,通过镍离子亲和层析纯化获得RBD、RBDFd重组蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠血清抗原特异性的抗体水平;通过假病毒以及活病毒中和试验检测血清中抗体的中和活性。结果:(1)获得了表达MERS-Co V S1蛋白的重组病毒株,并在昆虫细胞中成功表达和纯化了分子量约140k D S1重组蛋白。利用重组表达的S1蛋白免疫小鼠叁次,血清S1特异性Ig G抗体滴度可达1:102400;免疫小鼠血清稀释5120倍后中和百分比仍能达到50%以上,且具有良好的活病毒中和活性。(2)利用重组的MERS-Co V S1蛋白筛选获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类为6株为Ig G1型,2株为Ig G2a型,2株为Ig M型;10株单抗抗体ELISA效价达到10000以上,并获得1株单抗对MERS-Co V具有良好的中和活性。(3)获得了表达MERS-Co V RBD、MERS-Co V RBD Fd蛋白的重组病毒株,在昆虫细胞中成功表达并纯化了分子量约40k D MERS-Co V RBD单体重组蛋白以及分子量约100k D MERS-Co V RBDFd寡聚体蛋白。利用重组表达的RBD单体蛋白免疫小鼠叁次,血清MERS-Co V RBD特异性Ig G抗体滴度可达1:6400;免疫小鼠血清稀释3200倍后中和百分比低于50%,对MERS-Co V假病毒的中和活性较弱。而利用形成寡聚体的RBD蛋白在一次加强免疫后,血清中MERS-Co V RBDFd特异性Ig G抗体滴度可达1:102400;免疫小鼠血清稀释12800倍后中和百分比仍高于50%。结论:利用昆虫细胞重组表达的MERS-Co V S1蛋白具有良好的免疫原性,并能够有效诱导产生高滴度保护性中和抗体,筛选制备出一株具有良好中和活性的MERS-Co V单克隆抗体。重组表达的MERS-Co V RBD单体蛋白免疫原性以及对假病毒中和活性都较弱;利用昆虫细胞重组表达的MERS-Co V RBDFd寡聚体重组蛋白具有很强的免疫原性,能够有效诱导产生高滴度中和抗体,对MERS-Co V假病毒以及活病毒都具有很好的中和活性。该研究为发展一种安全有效的针对MERS-Co V的预防疫苗奠定了坚实基础。图35幅,表4个。参考文献57篇。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2015-05-15）
钟雪,齐广勋,杨静,邢国杰,刘剑锋[7]（2014）在《SARS亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD在烟草叶绿体中的高效表达》一文中研究指出叶绿体表达系统为植物源重组药用蛋白和亚基疫苗的生产提供了一个有效的途径。为验证SARS亚基疫苗在叶绿体中表达的可行性,以及为植物源SARS亚基疫苗的生产提供一套高效、低成本的技术平台,本研究将人工优化合成的SARS-CoV突刺蛋白(S蛋白)受体结合区序列RBD与载体分子CTB融合基因导入烟草叶绿体基因组中。PCR和Southern杂交分析表明,外源融合基因已整合到烟草叶绿体基因组中,并获得同质化。Western杂交分析表明,重组融合蛋白CTB-RBD在叶绿体转基因烟草中获得表达,且主要以可溶性单体形式存在。ELISA分析表明,在不同生长阶段、不同生长部位和不同时间点烟草叶片中,重组融合蛋白CTB-RBD的表达水平呈现明显的变化。重组蛋白在成熟叶片中的表达水平最高可以达到10.2%TSP。本研究通过SARS亚基疫苗RBD在烟草叶绿体中的高效表达,有望为植物源SARS亚基疫苗的生产以及SARS血清抗体的检测提供一个有效的技术平台。(本文来源于《生物工程学报》期刊2014年06期）
王德慧[8]（2014）在《艰难梭菌毒素受体结合区的免疫效应研究》一文中研究指出艰难梭菌（Clostridium difficile，C. difficile）是25%以上抗生素相关性腹泻（Antibiotic-associated diarrhea，AAD）的病因。自1978年首次发现该菌与伪膜性肠炎（pseudomembranous colitis，PMC）有关以后引起重视。2003年起核糖体027型（简称RT027）新菌株在多个国家暴发流行，造成大量死亡案例。中国也报道了散发病例。RT027因发生变异，传染性和耐药性增强，造成的死亡率、发病率也高于以往。很多国家包括中国将艰难梭菌作为法定传染病必报的监测病原。疫苗被认为是控制CDI（C.difficile infection）最根本有效的措施。艰难梭菌最主要的毒力因子是毒素A和毒素B，抑制毒素的作用就能够有效防止感染造成的严重损伤，起到免疫防御的效果。毒素A和毒素B的C-端都由多个重复序列构成，是毒素识别和结合细胞受体的功能区，称为受体结合区（receptor-binding domain，RBD），重复序列的多少直接影响毒素与细胞表面受体的结合力强弱。艰难梭菌共有24个毒素型（toxinotype），150个核糖型，毒素的变异广泛存在。为最大程度覆盖保护性抗原表位，提供最大限度保护，本文针对标准产毒型菌株（toxinotype0）ATCC43255毒素A和B的全长RBD设计了候选抗原，进行了重组制备（命名为TcdA和TcdB），考察单一或组合免疫后在小鼠中的免疫原性以及对标准株和RT027代表株ATCC BAA1870毒素的保护效应。第一部分艰难梭菌天然毒素的提取、纯化与鉴定为验证ATCC43255和ATCC BAA1870的毒素差异，对两株菌毒素A和毒素B的编码基因进行测序分析，表明ATCC BAA1870菌的毒素A和毒素B基因与Genbank公布的两株027型菌（R20291，CD196）同源性均为100%。ATCC BAA1870与ATCC43255的毒素A氨基酸同源性98.15%，与毒素B氨基酸同源性92.18%，两种毒素最保守的是酶活区，受体结合区变异最大。为获得ATCC43255和ATCC BAA1870的天然毒素A和毒素B，首先用硫酸铵盐析法将培养菌液中的毒素沉淀和浓缩，获得ATCC43255粗毒素80mg/L，ATCCBAA1870粗毒素86.5mg/L。用抗毒素A和抗毒素B鼠单抗经Western blot鉴定能被特异抗毒素抗体识别，毒素相对分子量与文献报道一致。以ATCC43255和ATCCBAA1870粗毒素腹腔注射BALB/C小鼠的MLD分别为360ng和540ng，对Vero细胞的CD50分别为70pg，90pg，与文献报道接近。为获得纯化和精制的毒素A和毒素B，将鉴定正确的粗毒素进行DEAE Sepharose离子交换层析，最终分离得到电泳单一条带的毒素A和毒素B，经Western blot和VIDAS-mini系统鉴定证实能被抗毒素抗体识别和结合。本文建立的艰难梭菌毒素纯化工艺相比文献中报道的凝胶过滤后多步离子交换等方法，过程简化、纯化效率较高。第二部分毒素受体结合区的制备及其在小鼠模型上的免疫效应研究艰难梭菌毒素的RBD与受体的结合是毒素发挥毒性的前提条件，抑制RBD的结合就能保护宿主免受毒素损伤。第二部分研究首先针对毒素A和毒素B的全长RBD作为候选抗原进行重组制备，纯化获得纯度90%以上TcdA和TcdB。Western blot结果表明蛋白分子量大小正确，具有抗原性。以TcdA和/或TcdB为免疫原，以氢氧化铝为免疫佐剂，肌肉途径免疫BALB/C小鼠，基础免疫7d后即产生1：102以上效价水平的抗TcdA和/或TcdB IgG特异抗体，一次加强免疫7d后血清效价最高至1：105。加强免疫后两个月达到高峰，叁个月后仍具有1：103以上水平，说明TcdA和TcdB均具有良好的免疫原性。以1μg和10μg两种免疫剂量免疫C57BL/6小鼠，研究不同免疫剂量对小鼠抗体产生数量的影响，发现除TcdA10μg+TcdB10μg与TcdA1μg+TcdB1μg刺激小鼠产生的anti-TcdB抗体有统计学意义的差异外，其他高低剂量抗原诱导产生的抗体水平没有统计学差异。C57BL/6小鼠免疫血清中和抗体效价ED50，1μg免疫组，TcdA、TcdB、TcdA+TcdB中和ATCC43255毒素的效价为：1：4960，1：1196，1：7510，中和ATCC BAA1870毒素的效价为：1：529，1：1223，1：2310；10μg免疫组，TcdA、TcdB、TcdA+TcdB中和ATCC43255毒素的效价为：1：5987，1：1190，1：10643，中和ATCC BAA1870毒素的效价为：1：1563，1：933，1：6410。在评价TcdA和TcdB的免疫效应时，仍设计TcdA、TcdB、TcdA+TcdB叁组免疫原，分两批受试动物（BALB/C、C57BL/6），基础免疫和一次加强免疫后，利用获得的ATCC43255和ATCC BAA1870天然毒素攻毒。实验结果表明：（1）BALB/C小鼠模型中，1MLD剂量攻毒时，对ATCC43255毒素各免疫组保护率100%，对ATCC BAA1870毒素只有TcdA+TcdB组能提供保护率100%，其他组不能提供保护；5MLD剂量攻毒时，对ATCC43255毒素，除TcdB组不能提供保护，其余组保护率均100%，对ATCC BAA1870毒素，各免疫组均不能提供保护；20MLD剂量攻毒时，对ATCC43255毒素，TcdA组和TcdA+TcdB组的保护率分别为60%和80%。（2）C57BL/6模型中，考察免疫剂量（1μg和10μg）与保护效应的关系。1μg免疫剂量，1MLD攻毒时，TcdA，TcdB，TcdA+TcdB对ATCC43255毒素保护率分别均为100%；对ATCC BAA1870保护率分别为：0，100%，100%；3MLD攻毒时，对ATCC43255保护率分别为：100%，40%，100%；对ATCC BAA1870保护率均为0；对5MLD ATCC43255毒素保护率分别为：87.5%，0，75%；对2MLDATCC BAA1870毒素保护率分别为：0，50%，80%。10μg免疫剂量，1MLD攻毒时，TcdA，TcdB，TcdA+TcdB对ATCC43255毒素保护率分别均为100%，对ATCC BAA1870保护率分别为：100%，20%，100%；3MLD攻毒时，对ATCC43255保护率分别为：100%，20%，100%；对ATCC BAA1870保护率均为0，0，60%；对5MLDATCC43255毒素保护率分别为：75%，0，87.5%；对2MLD ATCC BAA1870毒素保护率分别为：0，0，100%。以相同免疫剂量组比较在两种动物模型中的保护率，C57BL/6的保护效果弱于BALB/C，原因不明确。综上结果可知，重组制备的TcdA和TcdB均具有良好的免疫原性，可诱导机体产生高滴度抗体IgG，可有效中和毒素A和/或B，两次免疫可为受试动物提供免疫保护作用，TcdA和TcdB同时免疫动物保护效果最好，对RT027代表株ATCC BAA1870攻毒保护水平低于标准株ATCC43255。提示覆盖变异毒素有效抗原表位的疫苗组合抗原设计，可以为不同产毒株的艰难梭菌感染提供更全面的免疫防护。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-05-09）
陈伟[9]（2014）在《抗艰难梭菌毒素B受体结合区单克隆抗体制备及初步应用研究》一文中研究指出摘要目的：(1)探讨艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)融合蛋白诱导表达最佳条件,分析其表达形式,并对其进行纯化。(2)制备抗CDB3单克隆抗体,纯化抗体并检测其特性。(3)建立一种双抗夹心ELISA,并用于临床腹泻患者粪便标本的艰难梭菌毒素B的检测。研究方法：(1)以诱导前菌液浓度(OD600)、诱导温度、诱导剂IPTG浓度和诱导时间为单变量分别诱导融合蛋白表达,采用正交试验确定优化的融合蛋白表达条件,通过SDS-PAGE分析其表达形式,通过Western blot鉴定,并用GSTSefinoseTMKit对融合蛋白进行纯化。(2)用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗CDB3单克隆抗体,筛选阳性杂交瘤细胞,采用腹腔注射法大量制备抗体,鉴定其亚型并采用Protein G琼脂糖凝胶对其进行纯化,检测其浓度、分子量、效价、特异性、相对亲和力,并对其进行表位分析。(3)用改良过碘酸钠氧化法对4A4G2单克隆抗体标记辣根过氧化物酶(HRP),通过棋盘滴定法建立并优化双抗夹心ELISA检测体系,并用该体系检测已经厌氧产毒培养确定的临床腹泻艰难梭菌感染患者的粪便标本。结果：(1)CDB3融合蛋白诱导表达最佳条件是诱导前菌液浓度OD600为0.8、IPTG浓度为0.6mmol/L、诱导时间为12h及诱导温度为30℃,经SDS-PAGE确定融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主,纯化后纯度可达90%以上,经Western blot证实为目的蛋白。(2)经传统的杂交瘤技术,共获得5株克隆化阳性杂交瘤细胞株,亚型鉴定结果为1E7B2IgG1(λ)、1F8D3IgM (κ)、2F8A6IgG2a (κ)、3B6F1IgM(λ)和4A4G2IgG1(κ),采用辛酸-硫酸铵粗提和ProteinG琼脂糖凝胶亲和层析法对1E7B2、2F8A6和4A4G2单克隆抗体进行纯化,纯化效果90%以上,其分子量约160KD,检测其浓度分别为21.43μg/ml、53.32μg/mL和30.08μg/mL,相对亲和力4A4G2>2F8A6>1E7B2,经Western blot验证均为抗CDB3特异性抗体,其中2F8A6与4A4G2作用于CDB3不同表位。(3)成功制得酶标抗体HRP-4A4G2,用棋盘滴定法建立并优化了双抗夹心ELISA检测体系,厌氧产毒培养鉴定的15株A+B+型阳性标本用双抗夹心ELISA检测7株阳性(46.67%),15株A'B+型标本检测8株阳性(53.33%),15份CD阴性标本检测全为阴性。结论：(1)成功诱导CDB3融合蛋白表达并对其进行纯化,其表达形式以可溶性蛋白为主。(2)成功建立了5株阳性杂交瘤细胞株,其中2F8A6与4A4G2为IgG型,具有较高的浓度和效价,且两者作用于CDB3不同表位。(3)双抗夹心ELISA检测体系特异度较高,但灵敏度较低,其检测体系还有待进一步改进。(本文来源于《中南大学》期刊2014-05-01）
陈伟,刘文恩,李艳华,简子娟,罗姗[10]（2014）在《艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化》一文中研究指出目的优化艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件,在获得高表达融合蛋白后对其进行纯化,为艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3单克隆抗体的制备奠定基础。方法以诱导前菌液600nm处的光密度值(OD600)、诱导温度、诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导时间为单变量,分别诱导融合蛋白的表达,在此基础上采用正交试验对融合蛋白的诱导表达条件进行优化,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量分析融合蛋白的表达量及表达形式,以Western blot对融合蛋白进行鉴定,以GST亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果融合蛋白诱导表达的最佳条件为诱导前菌液OD600 0.8、IPTG浓度0.6mmol/L、诱导时间12h、诱导温度30℃,融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主,经纯化后,融合蛋白纯度超过90%。结论本研究成功优化了艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白的诱导表达条件,获得大量表达,并成功对其进行了纯化,为后续单克隆抗体的制备奠定了基础。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2014年06期）
膜受体结合区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的拟建立一种不依赖于活病毒和高等级生物安全条件,快速简便检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERSCoV)受体结合区(RBD)特异性的中和抗体。方法利用哺乳动物表达系统表达重组rRBD-Fc蛋白;应用流式细胞术检测rRBD-Fc蛋白与Huh-7细胞结合的最佳浓度,建立通过流式细胞术检测rRBD-Fc与Huh-7结合活性的方法,并利用无关蛋白验证结合的特异性;在此基础上,利用RBD特异性中和抗体、RBD特异性非中和抗体、MERS-CoV RBD免疫小鼠血清和无关抗体建立能够检测中和抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,并与实毒中和试验进行比较,评价方法的一致性;应用建立的中和抗体检测方法进行血清学检测。结果成功表达了rRBD-Fc蛋白,rRBD-Fc蛋白能够与Huh-7细胞特异性结合,并确定了rRBD-Fc与Huh-7细胞结合的最佳剂量;在此基础上建立了通过流式细胞术检测抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,结果表明,检测方法能够区分具有中和活性的RBD特异性中和抗体、rRBD-Fc免疫小鼠血清和其他抗体,具有特异性,且能够反映中和活性的强弱。该方法在检测12株中和抗体时,与传统的实毒中和试验检测结果具有很好的一致性,能够有效应用于血清学检测。结论成功建立了一种不依赖活病毒和高等级生物安全条件,即可快速检测MERS-CoV RBD特异性中和抗体的方法,为针对MERS-CoV疫苗设计和抗体效果快速评价、血清学调查和免疫保护机制研究提供了一种更加简便、安全的技术手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
膜受体结合区论文参考文献
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[2].周旋,寇志华,郭彦,李江凡,何雷.一种不依赖于活病毒的中东呼吸综合征冠状病毒受体结合区特异性中和抗体检测方法的建立[J].中国人兽共患病学报.2018
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