导读:本文包含了乳腺上皮细胞表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乳腺,上皮细胞,奶牛,葡萄球菌,蛋白,乳脂,金黄色。
乳腺上皮细胞表达论文文献综述
库西塔别克·买买提依不拉音,武开乐,马静,肖凡,沈菲[1]（2019）在《IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白表达的影响》一文中研究指出为了研究外源添加不同浓度的胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳脂和乳蛋白含量的影响,试验选取生长状态良好的第叁代乳腺上皮细胞进行培养,试验组添加浓度分别为25,50,75μg/m L的IGF-Ⅰ,对照组仅添加与试验组等体积的完全培养基,用高效液相色谱法检测乳用叁酰甘油的表达量,用Western-blot法测定培养12,24,48,72小时时的细胞乳蛋白中α-酪蛋白和κ-酪蛋白的表达量。结果表明:添加25μg/m L IGF-Ⅰ的试验Ⅰ组,细胞乳脂表达极显着高于对照组及其他试验组(P<0. 01);试验组乳蛋白的表达均显着或极显着高于对照组(P<0. 05或P<0. 01)。说明IGF-Ⅰ对BMECs乳脂和乳蛋白的表达具有一定促进作用。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年21期）
马维武,周学章[2]（2019）在《金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素的表达及其对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用》一文中研究指出研究产PV-杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775、pvl缺陷株△pvl 49775和相应的回补株C-△pvl 49775以及体外重组的PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用,为系统研究金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞的机制提供依据。采用原核表达的方法构建金黄色葡萄球菌LukS-PV和LukF-PV重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21,诱导表达纯化后对其进行Western blot鉴定;用Live/Dead细胞荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测ATCC49775、△pvl 49775、C-△pvl 49775和rPVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。成功构建pET28a-LukS-PV、pET28a-LukF-PV重组表达载体,经诱导表达纯化后获得的LukS-PV浓度为0.6 mg·mL~(-1),LukF-PV浓度为1.15 mg·mL~(-1)。rPVL主要诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡(P<0.01),金黄色葡萄球菌ATCC49775、△pvl 49775和C-△pvl 49775均能诱导奶牛乳腺上皮细胞明显凋亡和坏死,但pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡率和坏死率明显高于△pvl 49775(P<0.05)。结果表明原核表达的rPVL对奶牛乳腺上皮细胞表现出较强的毒性;pvl缺陷株△pvl 49775诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡和坏死的能力比pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775低,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞过程中有重要作用。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年10期）
邢媛媛,李大彪,李子南,金亚亚[3]（2019）在《不同浓度亚油酸对二维和叁维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及乳蛋白合成相关基因表达的影响》一文中研究指出本试验旨在研究不同浓度亚油酸(LA)对二维(2D)和叁维(3D)培养模式下奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)形态及乳蛋白合成相关基因表达的影响。试验采用单因子完全随机试验设计,将P3代的BMECs接种在铺有基质胶(Matrigel)的6孔板中,培养至第3天时,然后在培养基中添加不同浓度(0、40和80μmol/L)的LA作用48 h。在2D和3D培养模型的BMECs中添加相同浓度的LA,比较2D和3D培养模型中BMECs的细胞形态,并采用实时荧光定量法测定乳蛋白合成相关基因的表达。结果表明:1) BMECs在2D培养模型中呈现鹅卵石的形态,而在3D培养模型中呈现腺泡样结构。2) BMECs中乳蛋白合成相关基因在3D培养模型中的表达量显着高于其在2D培养模型中的表达量(P<0.05)。3)α-酪蛋白(CSN1S1)、信号转导转录激活因子5(STAT5A)、真核翻译启始因子4E结合蛋白1 (EIF4EBP1)和核糖体p70s6激酶(RPS6K1)的基因表达量在2D和3D培养模型中的变化趋势一致,而κ-酪蛋白(CSN3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)的基因表达量在2D和3D培养模型中却呈现相反的趋势。综上,对于CSN3、mTOR和AKT1的基因表达量的研究,3D培养模型为更适宜的模型。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年10期）
毕崇亮,刘俊俊,王亨,王娟,韩照清[4]（2019）在《硒对S.aureus诱导的奶牛乳腺上皮细胞Nod2/MAPK/mTORs信号通路关键蛋白表达的影响》一文中研究指出【目的】硒(Se)能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌(S. aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表达的影响,从而为阐明硒的免疫调控机制提供理论依据。【方法】首先将bMECs以106细胞/孔接种于6孔板中,当细胞超过80%的汇合度时,用含2、4和8μmol·L~(-1)浓度硒的培养基替换原来的培养基,继续孵育12 h,然后用PBS洗涤每孔3次,将S. aureus按MOI=1:1的比例加入6孔板中,继续培养0.5 h,然后收集bMECs细胞进行相关蛋白的检测。本试验共分3大组,即对照(Con)组(bMECs)、模型(Mod)组(bMECs+S. aureus)和试验组。其中试验组又分3个亚剂量组,即Low组(bMECs+2μmol·L~(-1) Se+S. aureus)、Mid组(bMECs+4μmol·L~(-1) Se+S. aureus)和Hig组(bMECs+8μmol·L~(-1) Se+S. aureus),每组设3个重复。利用BCA蛋白测定试剂盒对收集的bMECs细胞进行总蛋白提取。应用Western blotting技术检测bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。将蛋白样品加到10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,上样量为20μg/孔,之后将蛋白转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。将PVDF膜用5 mL 5%脱脂乳阻断2 h,脱脂乳脱脂后用TBST清洗后,分别用5 mL的Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR和β-actin的一抗孵育过夜,回收一抗。之后在PVDF膜中分别加入5 mL上述蛋白的二抗,室温孵育2 h,回收二抗。PVDF用TBST洗涤5次,最后在暗室条件下进行化学显影。【结果】S. aureus能显着提高bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平(P<0.01)。S. aureus感染0.5 h后,Nod2蛋白水平显着升高(P<0.01)。在培养基里添加2μmol·L~(-1)的硒可极显着抑制Nod2蛋白的表达(P<0.01),在培养基里添加8μmol·L~(-1)的硒可显着抑制Nod2的表达(P<0.05);S. aureus感染0.5 h后,RIP2蛋白水平显着升高(P<0.05),而在培养基里添加8μmol·L~(-1)硒可显着抑制RIP2蛋白的表达(P<0.05);S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组JNK蛋白磷酸化水平显着升高(P<0.01)。在培养基里添加4μmol·L~(-1)的硒能显着抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.05),在培养基里添加8μmol·L~(-1)的硒能显着抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.01); S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组AKT蛋白磷酸化水平显着升高(P<0.01)。在培养基里添加4μmol·L~(-1)硒可极显着抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.01),在培养基里添加8μmol·L~(-1)硒可显着抑制AKT蛋白的磷酸化水平(P<0.05);S. aureus感染0.5 h后,模型组mTOR蛋白磷酸化水平显着升高(P<0.01)。在培养基里分别添加4μmol·L~(-1)和8μmol·L~(-1)硒均能显着抑制mTOR蛋白磷酸化水平(P<0.05)。【结论】硒可通过抑制bMECs Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键因子蛋白的表达而减轻S. aureus诱导的bMECs炎症反应。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年16期）
武开乐,库西塔别克·买买提依不拉音,马静,邵伟,余雄[5]（2019）在《雌激素对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白和甘油叁酯表达的影响》一文中研究指出为探讨雌激素对乳腺上皮细胞中酪蛋白及甘油叁酯表达的影响,试验于2018年2月至2018年4月在新疆肉乳用草食动物营养实验室进行,实验选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/l雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在12、24、48、72 h后检测各组细胞酪蛋白及甘油叁酯表达的情况。结果显示,在12 h时,添加50μmol/l雌激素组CSN1的表达量极显着高于对照组(P<0.01),添加50μmol/l雌激素组TG表达量极显着高于对照组(P<0.01);50μmol/l雌激素添加组CSN1表达量显着高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),且极显着高于100μmol/l雌激素添加组(P<0.01),100μmol/l雌激素添加组CSN2表达量显着高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),50μmol/l雌激素添加组TG表达量极显着高于100、200μmol/l雌激素添加组(P<0.01);添加50μmol/l雌激素时,12、48、72 h的CSN1表达量显着高于24 h(P<0.05),在72 hCSN2表达量显着高于其他各时间点(P<0.05),24、72 h时TG表达量显着高于12、48 h(P<0.05)。结果发现,添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞中CSN1、CSN2及TG的表达。200μmol/l在一定条件下促进CSN1的表达效果最好;100、200μmol/l雌激素添加组均能够促进CSN2的表达,且100μmol/l促进CSN2的表达效果最好,尤其是在12、24 h;50、200μmol/l雌激素添加组可以促进TG的表达,但100μmol/l雌激素添加组能够抑制TG的表达。(本文来源于《饲料工业》期刊2019年11期）
王鑫[6]（2019）在《丁酸钠对牛乳腺上皮细胞内源性抗菌肽诱导表达及抗金黄色葡萄球菌感染的研究》一文中研究指出金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要致病菌之一,引起的抗生素耐药性和慢性炎症问题日益突出。作为疾病控制的新策略,抗菌肽通常是由动物细胞天然产生的,几乎对所有类别的病原体有效且极难产生抗性。丁酸钠不仅是一种短链脂肪酸类营养化合物,还是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)。有研究报道称丁酸钠能通过HDACi作用诱导动物内源性抗菌肽表达,同时还能发挥抑菌抗炎的作用效果,但其确切分子机制尚不清楚。因此,本研究通过全面了解丁酸钠对动物内源性抗菌肽诱导表达的影响以及明确丁酸钠对炎症相关信号通路的调控机制,为有效预防和控制金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎提供了分子领域的理论依据。本研究以牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为细胞模型。首先,观察丁酸钠对细胞内源性抗菌肽基因表达的诱导效果。接着,利用基因转录组学查找并验证关键转录因子、细胞信号转导通路及microRNA对丁酸钠调控细胞内源性抗菌肽基因表达的影响。然后,观察丁酸钠在金黄色葡萄球菌感染细胞中的抑菌效果。最后,阐明丁酸钠缓解金黄色葡萄球菌外毒素脂磷壁酸(LTA)引起细胞炎症反应的信号转导机制。主要试验结果如下:(1)研究结果表明丁酸钠能上调MAC-T细胞内源性抗菌肽的表达,包括β-defensin类抗菌肽DEFB1、DEFB3、DEFB4、DEFB5、DEFB6、DEFB8、DEFB9、DEFB10、DEFB11、DEFB12、DEFB13、LAP、TAP、BPTI和EBD,以及cathelicidin类抗菌肽Bac1、Bac5、Indolicidin、BMAP-28、BMAP-27和BMAP-34。抗菌肽基因以剂量和时间依赖性方式被丁酸钠诱导,其中以DEFB1和BMAP-34的表现最为显着。丁酸钠以剂量依赖性方式上调了MAC-T细胞组蛋白乙酰化水平,并对DEFB5、Indolicidin和BMAP-34基因的诱导表达能力均高于曲古霉素(TSA)。MAC-T细胞各表达了GPR41和GPR43的牛同源受体蛋白和mRNA,丁酸钠处理后其表达量均上调。利用特异性siRNA分别沉默GPR41和GPR43均不同程度地减弱了丁酸钠诱导DEFB5、DEFB10和BMAP-34基因上调表达,以DEFB10的减弱效果最为显着。(2)基因转录组测序结果表明EBD、TAP、DEFB5、DEFB1、DEFB4、LAP和BMAP-34基因均出现了上调差异表达,实时定量PCR验证了该结果。所评估的抗菌肽基因启动子上游区域均预测出了AP-1和DBP两个转录因子的转录结合位点。抑制p38和NF-κB途径分别下调了丁酸钠诱导的BMAP-34和DEFB1基因表达水平。抑制ERK途径下调了丁酸钠诱导的BMAP-34表达,但却上调了DEFB1表达,与之相反,抑制JNK途径上调了丁酸钠诱导的BMAP-34表达,同时下调了DEFB1表达。Western blot结果表明bta-miR-677对MAC-T细胞组蛋白乙酰化有显着的正调节作用,而bta-miR-2440对其没有显着影响。bta-miR-677对MAC-T细胞BMAP-34和DEFB1基因起上调表达作用,bta-miR-2440只在丁酸钠诱导BMAP-34基因表达中起抑制作用。(3)丁酸钠以浓度和时间依赖性方式抑制金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞。透射电镜观察结果表明丁酸钠降低了金黄色葡萄球菌感染MAC-T亚细胞结构的破坏程度。金黄色葡萄球菌感染增加了MAC-T细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR2、NOD1和NOD2基因表达,而预处理丁酸钠减弱了这些增加。随着金黄色葡萄球菌感染MAC-T细胞时间增加,BMAP-34和TAP基因表达也随之增加,预处理丁酸钠后,BMAP-34和TAP基因表达随细菌感染时间增加而出现进一步地上调。丁酸钠显着地减轻了金黄色葡萄球菌感染小鼠乳腺组织所引起的病理性损伤和炎症反应。(4)丁酸钠显着上调了MAC-T细胞组蛋白H3乙酰化水平和BMAP-34、TAP、DEFB1、DEFB5抗菌肽基因表达量,LTA单独刺激MAC-T细胞没有显着上调组蛋白乙酰化水平,预处理丁酸钠后LTA刺激MAC-T细胞进一步上调了组蛋白乙酰化水平和抗菌肽基因表达量。预处理丁酸钠抑制了LTA诱导的MAC-T细胞TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达,增强了IL-10基因表达。LTA显着诱导了NF-κB p65亚基的活化和IκBα的降解,预处理丁酸钠降低了LTA所诱导的NF-κB p65和IκBα磷酸化水平并减少了NF-κB p65的核易位。丁酸钠显着增强了LTA诱导的MAC-T细胞中p38和ERK磷酸化蛋白表达水平,同时减弱了JNK、AMPKα和ACCα磷酸化蛋白表达水平。LTA刺激MAC-T细胞后TLR2、NLRP3、ASC和caspase-1、IL-1β的蛋白表达水平均显著增加,这种增加通过MAC-T细胞预处理丁酸钠而被减弱。总之,本研究证实了丁酸钠能诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)内源性抗菌肽基因上调表达,HDACi、短链脂肪酸受体GPR41/GPR43、NF-κB途径、MAPKs途径和microRNA参与了抗菌肽基因表达的调控。同时,丁酸钠在金黄色葡萄球菌感染和LTA刺激的MAC-T细胞中发挥了抑菌抗炎作用,其作用与抑制TLR2/NF-κB/NLRP3途径和增强内源性抗菌肽基因表达有关。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-06-01）
吕贺[7]（2019）在《CIDEC对奶牛乳腺上皮细胞中FASN表达的调控研究》一文中研究指出乳脂是一种高质量的天然脂肪,是牛乳的主要营养成分。乳脂率是衡量牛奶品质优劣的关键指标,也是制约中国奶业发展的重要因素。近年来,奶牛的产奶量日益提高,但乳脂率却未见增长。通常情况下牛奶的乳脂率为3%~4%,产奶量与乳脂率之间呈相互制约关系,如何提高乳脂率一直是学者们研究的热点。研究表明日粮营养素可以通过调节基因的表达参与乳脂合成的调节。乙酸(acetate)和β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate,BHBA)是泌乳奶牛乳腺中脂肪酸从头合成的前体物质,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞中添加乙酸和BHBA可以提高细胞内甘油叁脂的合成。但乙酸和BHBA调控乳脂合成分子机制的研究还不十分明确。诱导细胞调亡的DFF45样因子C(Cell-death-inducing DNA-fragmentation-factor-like effector c,CIDEC)是一种脂滴表面蛋白,可促进脂肪的储存和脂滴的发育,进而维持机体平衡和能量代谢。实验室前期结果表明CIDEC可以调节奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)中乳脂的合成,但具体调节途径还不明确。脂肪酸从头合成过程主要由脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)催化。为探讨在乙酸和BHBA作用下,CIDEC与FASN表达以及乳脂合成之间的关系,本研究首先利用消化法获取纯化的BMECs,在8 mmol/L乙酸钠和1 mmol/L BHBA作用下,采用Western blot方法研究了乳脂合成前体物调节CIDEC表达的信号通路,结果显示添加8 mmol/L乙酸钠和1mmol/L BHBA能明显上调mTOR信号通路下游分子p-4EBP1和p-P70S6K的表达;降低pAMPKα的表达,提示在奶牛乳腺上皮细胞中,乳脂合成前体物可通过激活mTOR信号通路和AMPK信号通路调节CIDEC的表达。随后我们采用基因干扰和过表达的方法研究在乳脂合成前体物刺激下,CIDEC对FASN表达及乳脂合成的影响,结果显示CIDEC基因过表达后,奶牛乳腺上皮细胞中FASN蛋白水平和mRNA水平的表达显着升高(p<0.01),细胞内TAG含量和脂滴数目增加。CIDEC基因干扰后,FASN蛋白水平和mRNA水平表达显着降低(p<0.05),细胞内TAG含量降低,脂滴数目减少。这些结果表明CIDEC能够正向调节FASN的表达,进而影响乳腺上皮细胞中乳脂合成。为研究CIDEC基因对FASN转录水平的调节,我们首先对FASN启动子区转录因子结合位点预测,发现在FASN启动子区存在潜在的C/EBPβ结合位点。采用基因干扰和过表达技术研究C/EBPβ对FASN表达及乳脂合成的影响,结果显示C/EBPβ基因过表达后,奶牛乳腺上皮细胞中FASN mRNA和蛋白水平的表达显着升高(p<0.01),细胞内TAG含量增加。C/EBPβ基因干扰后,细胞内FASN mRNA和蛋白水平表达显着降低(p<0.01),细胞内TAG含量降低。这些结果进一步证明C/EBPβ对FASN的转录具有正向调节作用,进而影响乳脂合成。随后我们采用双荧光素酶报告基因系统和点突变的方法对FASN启动子区C/EBPβ的结合位点进行验证,结果显示C/EBPβ结合的FASN启动子区域在-110 bp~-50 bp区段。最后为研究CIDEC是否通过C/EBPβ调节FASN的转录,我们采用转染技术在奶牛乳腺上皮细胞中过表达CIDEC,同时干扰C/EBPβ的表达。TAG含量测定显示奶牛乳腺上皮细胞中干扰C/EBPβ的表达可以降低由CIDEC过表达诱导的乳脂合成;qPCR结果也显示干扰C/EBPβ的表达会降低由CIDEC过表达诱导的FASN mRNA的表达水平。综合以上结果,在奶牛乳腺上皮细胞中,CIDEC可以通过与C/EBPβ作用,调节FASN的转录,进而影响乳脂的合成过程。该研究结果可以丰富泌乳奶牛乳腺中乳脂合成的分子机理,为通过分子手段提高奶牛养殖的经济效益提供有价值的实验基础和理论依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
张梦璐,樊晓娜,邢智洋,王月影,王江[8]（2019）在《奶牛BTN1A1基因超表达促进乳腺上皮细胞脂滴合成》一文中研究指出嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位。结果显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1慢病毒载体,用5μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P<0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显着增加了细胞脂滴含量(P<0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上。结果表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年05期）
张金友,黄鹤,李伟,韩欢胜,甘文平[9]（2019）在《低水平葡萄糖对奶牛乳腺上皮细胞促炎症因子表达的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6 (IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上皮细胞分离纯化后,分别在含有0.25、1.00和4.50 mg/mL葡萄糖的完全培养液中培养24 h,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞中相关基因的表达。结果表明,上述基因的mRNA相对表达量在各葡萄糖浓度之间没有明显差异(P>0.05)。其中TNF-α和LYZ在各浓度葡萄糖中的表达量均非常少,iNOS的表达量居中,而IL-6、LF和CXCL8在各浓度组中的表达量相对较高。试验结果提示,葡萄糖浓度的减少并没有直接影响乳腺上皮细胞中TNF-α、LYZ、iNOS、IL-6、LF和CXCL8 mRNA的基础性表达;乳腺上皮细胞在未受到感染的情况下,能够表达一定数量的iNOS、IL-6、LF和CXCL8,这些因子可以作为先天性免疫防御的储备,在受到感染的情况下能迅速应对病菌的入侵。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年05期）
李媛[10]（2019）在《腺病毒介导人卵泡刺激素基因在山羊乳腺上皮细胞的表达》一文中研究指出卵泡刺激素(FSH)是动物体内最重要的性激素之一,主要作用于生殖细胞,在个体的发育、成熟以及生殖生理方面发挥着关键作用。市场上的FSH主要分为尿源FSH和细胞工程制备的FSH,前者的产量低、来源不均一,后者生产成本高、价格昂贵,不能满足市场需求。目前,动物乳腺制备蛋白药物具有产量高、价格低的特点,但利用大动物乳腺制备FSH的研究还未见报导,主要是因为动物体内的FSH过多会导致动物体的正常生理紊乱,最终导致动物死亡。由于FSH是通过FSHα与FSHβ亚基蛋白非共价键结合形成的异源二聚体糖蛋白,单独的FSHα和FSHβ亚基在动物体内都不具备生物学活性。因此本研究利用腺病毒将人FSHα与FSHβ亚基蛋白分别在山羊乳腺上皮细胞(GMEC)单独表达,然后将单独表达的FSHα和FSHβ亚基蛋白进行体外重组、纯化得到完整的重组人卵泡刺激素(rhFSH),并利用体外活性试验验证rhFSH具备生物活性。本研究针对山羊乳腺泌乳细胞在体外表达人FSH蛋白进行了探究,为将来利用大动物乳腺制备重组人卵泡刺激素提供技术依据。试验获得如下结果:1.以pIRES-FSH-neo3载体为模板,利用PCR技术,亚克隆得到了FSHα和FSHβ亚基基因。一步克隆法将目的基因分别连接在穿梭载体pAdTrack-CMV上构建了pAdTrack-CMV-FSHα和pAdTrack-CMV-FSHβ腺病毒穿梭载体。穿梭载体经鉴定后,用PmeI酶切使其线性化,与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得了pAdEasy-FSHα和pAdEasy-FSHβ重组腺病毒载体。2.将鉴定正确的重组腺病毒载体pAdEasy-FSHα和pAdEasy-FSHβ用PacI酶切线性化,用异丙醇沉淀法纯化之后,利用Lipofectamine 2000转染到HEK293A细胞中包装获得第一代重组腺病毒,经扩繁后得到高浓度的重组腺病毒。LaSRT法测得Ad-FSHα和Ad-FSHβ重组腺病毒浓度滴度均为1×10~9 pfu/mL。3.用重组腺病毒Ad-FSHα和Ad-FSHβ分别感染GMEC细胞,测得重组腺病毒Ad-FSHα的感染复数(MOI)为160,重组腺病毒Ad-FSHβ的MOI值为200。裂解细胞获取蛋白,经Western Blot检测表明,利用重组腺病毒可以在GMEC细胞中有效表达FSHα和FSHβ亚基蛋白。4.将GMEC细胞表达的FSHα与FSHβ亚基蛋白进行体外重组、纯化,利用双抗夹心ELISA法及Western Blot证明FSHα与FSHβ亚基蛋白成功在体外重组成完整的rhFSH。通过观察FSH靶向结合特异性受体(FSHR)及测定HKE-293-FSHR细胞cAMP值,表明体外重组的rhFSH和阳性对照药物Gonal-F同样具备生物活性。综上所述,本研究利用腺病毒介导人卵泡刺激素基因FSHα和FSHβ在山羊乳腺上皮细胞进行表达,产生的FSHα和FSHβ亚基蛋白,经体外重组、纯化得到rhFSH,且验证得出本研究制备的rhFSH具备生物学活性。这就为下一步利用大动物乳腺以及制备转基因动物生产重组人卵泡刺激素奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
乳腺上皮细胞表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究产PV-杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775、pvl缺陷株△pvl 49775和相应的回补株C-△pvl 49775以及体外重组的PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用,为系统研究金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞的机制提供依据。采用原核表达的方法构建金黄色葡萄球菌LukS-PV和LukF-PV重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21,诱导表达纯化后对其进行Western blot鉴定;用Live/Dead细胞荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测ATCC49775、△pvl 49775、C-△pvl 49775和rPVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。成功构建pET28a-LukS-PV、pET28a-LukF-PV重组表达载体,经诱导表达纯化后获得的LukS-PV浓度为0.6 mg·mL~(-1),LukF-PV浓度为1.15 mg·mL~(-1)。rPVL主要诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡(P<0.01),金黄色葡萄球菌ATCC49775、△pvl 49775和C-△pvl 49775均能诱导奶牛乳腺上皮细胞明显凋亡和坏死,但pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡率和坏死率明显高于△pvl 49775(P<0.05)。结果表明原核表达的rPVL对奶牛乳腺上皮细胞表现出较强的毒性;pvl缺陷株△pvl 49775诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡和坏死的能力比pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775低,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞过程中有重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乳腺上皮细胞表达论文参考文献
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