导读:本文包含了溶菌酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:溶菌酶,基因,线虫,奶牛,乳腺,密码子,大鲵。
溶菌酶基因论文文献综述
张振娟,齐小浪,李尚伟,喻廷君,杜娟[1]（2019）在《九香虫溶菌酶基因CcLys的克隆与特征分析》一文中研究指出九香虫Coridius chinensis是我国一种重要的药食两用昆虫,溶菌酶是一种具有抗菌作用的糖苷水解酶。该研究从九香虫中克隆了一种溶菌酶基因CcLys,其cDNA长883 bp,包含一个669 bp的开放阅读框,编码222个氨基酸。九香虫溶菌酶CcLys的N-端包含一段由18个氨基酸组成的信号肽,成熟CcLys形成7个α-螺旋,8个β-折迭片的叁维结构。同源性和聚类分析显示CcLys与茶翅蝽Halyomorpha halys溶菌酶的亲缘关系最近。基因表达谱分析表明,CcLys在九香虫的整个发育阶段都有表达,在3龄若虫中表达水平最高;该基因在所检测的成虫组织中都有表达,在脂肪体中表达水平最高。成虫被细菌诱导后,CcLys的表达水平在12 h达到峰值。该研究为进一步明确CcLys基因的功能及开发新型抗菌药物奠定基础。(本文来源于《山地农业生物学报》期刊2019年04期）
岳志远,张仪,郭云海,秦志强,黄芸[2]（2019）在《福寿螺感染广州管圆线虫后G型溶菌酶基因差异表达分析》一文中研究指出目的分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征。方法根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物, PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、 signalP 4.1、 TMHMM2.0、Smart、 MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析,并构建系统进化树。取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,感染后24 h统一饲养,分别于感染后1、 10、 20、 30 d各取3～5只福寿螺采集肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,未感染的福寿螺为阴性对照组。提取各个感染时期福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA,荧光定量PCR分析福寿螺G型溶菌酶mRNA的组织表达特征,设定对照组福寿螺各组织的G型溶菌酶m RNA的相对表达量为1.0±0.0。结果PCR扩增福寿螺G型溶菌酶基因片段,长度约为800 bp。测序结果显示,为一段828 bp的完整开放读码框,编码275个氨基酸。生物信息学分析结果显示, G型溶菌酶基因编码产物为稳定的疏水性蛋白,在1～19位存在1个信号肽,主要在细胞外包括细胞壁发挥作用,在18～85位氨基酸处存在1个SH3b结构域。系统进化树分析显示,福寿螺G型溶菌酶与尖膀胱螺的亲缘关系最近,序列一致性达79%;其次与海湾扇贝等其他软体动物较近,并聚类在一个大的分支上。荧光定量PCR结果显示,对照组雌性成年螺肝胰腺组织中, G型溶菌酶mRNA的拷贝数为2 238±158,高于雄性的685±27 (P <0.05)。福寿螺感染广州管圆线虫后,肝胰腺、肾脏、肠道、鳃和头足部的G型溶菌酶基因相对表达量,与对照组相比均有不同程度的下降(P <0.01)。感染后1、 10、 20、 30 d鳃中G型溶菌酶mRNA的相对表达量分别为0.002±0.002、 0.012±0.050、 0.001±0.000、 0.004±0.003,均低于对照组(P <0.01);肾脏组织中10 d和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);肝胰腺组织中1、 10和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);感染后1、 10、 20、 30 d肠道组织中的相对表达量分别为0.280±0.040、 0.070±0.030、 0.039±0.002、 0.120±0.050,均低于对照组(P <0.05),头足部组织中的相对表达量分别为0.280±0.150、 0.150±0.008、 0.031±0.011、 0.120±0.030,均低于对照组(P <0.05)。结论福寿螺感染广州管圆线虫后, G型溶菌酶基因在鳃、肠、头足组织中各个感染时期表达均下调,肝胰腺组织中感染后1、 10、 20 d表达下调,肾脏组织中感染后10 d、 20 d表达下调。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年03期）
张志鹏,江静宜,夏海磊,冀德君,李明勋[3]（2019）在《奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定》一文中研究指出研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料。根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳腺上皮细胞中RT-PCR扩增Lyz基因编码序列,将其克隆到携带增强型绿色荧光蛋白通用型表达载体pEGFP-N1中测序。重组质粒pEGFP-N1-Lyz经Ase I+Hind III双酶切除CMV启动子,将奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因(BLG)启动子同源重组替换到Ase I和Hind III酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)、人肾脏上皮细胞(HEK293T),荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明,重组表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz测序结果与目的片段长度相符,转染至BMEC细胞和HEK293T细胞,在奶牛乳腺上皮细胞观察到绿色荧光, HEK293T细胞未观察到绿色荧光,奶牛Lyz基因乳腺特异性表达质粒构建成功。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年05期）
张元臣,蔡新,张国强,董丽丽,王景顺[4]（2019）在《黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达》一文中研究指出为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制,以黏虫为试验材料,利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因Mswly的全长序列,同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达。克隆、测序后分析表明,Mswly基因的cDNA全长为652 bp(GenBank登录号为MG692501),开放阅读框序列长度为426 bp,编码141个氨基酸。其编码蛋白质分子质量为16.26 ku,理论等电点为6.57;含有信号肽,剪切位点在第20个和21个氨基酸之间;含有溶菌酶活性所需要的谷氨酸和天冬氨酸活性位点。系统进化树分析表明,Mswly与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起,说明Mswly为C型溶菌酶。Western blotting结果显示,Mswly重组蛋白大小约17 ku,与预期分子质量大小一致,说明Mswly基因在昆虫Sf9细胞系能够高效表达。综上,从黏虫脂肪体中克隆得到了1个C型溶菌酶基因Mswly的完整cDNA序列,并将其在草地贪夜蛾细胞系Sf9中进行了高效表达。(本文来源于《河南农业科学》期刊2019年05期）
王宁[5]（2019）在《大豆抱囊线虫（Heterodera glycines）溶菌酶基因克隆及功能初步分析》一文中研究指出大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)是大豆上最重要的土传病原物之一。线虫在发育过程中经常会受到病原菌的威胁。为了抵御病原菌的危害,线虫往往会表达抗菌蛋白质,如溶菌酶,但是线虫对病原菌的具体防卫机制至今还不明确。溶菌酶是线虫中重要的防御酶,对植物线虫溶菌酶基因的功能研究,有助于解释线虫的具体防御机制,为植物线虫的防控提供理论基础。本研究通过筛选转录组文库,从大豆孢囊线虫中分离了3个溶菌酶基因;采用原位杂交技术确定溶菌酶基因在大豆孢囊线虫中的表达部位;采用qPCR方法检测溶菌酶基因在参与线虫防御作用中的转录特性,分析细菌感染线虫后线虫叁个溶菌酶基因的表达模式;通过对溶菌酶基因RNA干扰后的大豆孢囊线虫放置叁种细菌中1-7天存活率的测定来对溶菌酶的防御功能进行初步研究;采用计算菌落数、浊度测定法两种方法测定体外表达的溶菌酶蛋白对细菌的抑制作用。原位杂交结果表明Hg23324、Hg21698和Hg17337这3个溶菌酶基因均在肠细胞中表达。基因表达量变化分析结果表明,在枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌诱导下,Hg23324基因表达显着上调。在金黄色葡萄球菌诱导下Hg21698和Hg17337基因表达显着上调。由此推测溶菌酶参与了线虫的防御作用。采用RNA干扰技术对溶菌酶的功能进行了初步的分析,经过dsRNA浸泡后,通过qPCR技术检测溶菌酶基因转录水平明显下降。线虫存活率的检测实验表明线虫溶菌酶基因Hg23324干扰后,线虫在枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低;溶菌酶基因Hg17337干扰后,线虫在金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低;溶菌酶基因Hg21698干扰后,线虫在金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌中的存活率均降低。推测是溶菌酶基因的干扰使得线虫免疫系统受到影响,对细菌感染变得敏感,存活率下降,以上表明溶菌酶可以发挥特定的作用来帮助线虫抵抗细菌。烟草瞬时表达溶菌酶基因后提取烟草蛋白,通过计算菌落数、浊度测定法两种方法测定粗提蛋白对细菌的抑制作用,结果表明:Hg23324重组蛋白可以抑制枯草芽孢杆菌;Hg17337重组蛋白可以抑制金黄色葡萄球菌;Hg23324和Hg21698重组蛋白可以抑制苏云金芽孢杆菌。从这些结果可知溶菌酶可在体外发挥作用。本研究首次分离了大豆孢囊线虫的溶菌酶基因,详细研究了其在线虫抵抗细菌中的表达水平和抑菌功能,为线虫防御机理的研究提供参考,为线虫生物防治机理的研究提供更好的方向。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
李云龙,高峰,张海涛,顾开朗[6]（2018）在《奶牛溶菌酶基因的构建、表达及活性研究》一文中研究指出为在体外获得奶牛溶菌酶(lysozyme,LYZ),人工设计并合成LYZ基因CDS序列,将其克隆至表达载体pET32T并转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性菌株,经IPTG诱导,初步纯化表达产物,并对其进行SDS-PAGE分析。结果表明,重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定结果正确,表达产物经SDS-PAGE检测,分子量约为33kd,与目标蛋白质一致,且主要以包涵体的形式存在。用比浊法测得的溶菌酶活力为2 139U/mL。研究结果成功构建原核表达载体LYZ-pET32T并表达得到奶牛溶菌酶蛋白,为后续研究与应用奠定了基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2018年09期）
刘然然[7]（2018）在《大鲵c-型和g-型溶菌酶基因的生物信息学分析和表达研究》一文中研究指出中国大鲵(Andrias davidianus)是我国特有的大型两栖动物,现已成为名贵珍稀水产养殖种类,具有重要的经济价值。然而随着大鲵养殖规模的扩大,养殖数量和密度激增,加之生长环境的恶化,导致大鲵病害频发。因此,研究大鲵病理学和免疫学具有重要的意义。溶菌酶是一种碱性蛋白酶,能够破坏细菌细胞壁肽聚糖中连接N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖的β酰氨基葡糖苷键,分解粘多糖,使之成为可溶性的糖肽,从而裂解细菌。溶菌酶作为机体的免疫防御因子,能够抵御外来病原菌的感染,在大鲵非特异性免疫过程中起到非常重要的作用。为此,本研究从大鲵转录组数据库中筛选出了c-型和g-型溶菌酶基因片段,鉴定了两种类型溶菌酶基因的cDNA片段,进行了结构特征、表达特性、病原刺激后表达变化分析,以及体外原核表达和产物活性等方面的研究,得到如下结果:(1)AdlysC的cDNA序列长873 bp,其中开放阅读框ORF456 bp,5’-UTR65 bp,3’-UTR352 bp,编码152个氨基酸,蛋白分子量是16.86 kDa,等电点是8.66;AdlysG的cDNA序列长948 bp,其中开放阅读框558 bp,5’-UTR 270 bp,3’-UTR为120 bp,编码185个氨基酸,蛋白分子量是20.48 kDa,等电点是8.41。(2)实时荧光定量结果显示,AdlysC在被检测的各个组织中广泛表达,其中在胃和肝脏中的表达量最高,在肠道、脾脏、血液以及肺中的表达较高,在肌肉、肾脏、心脏和脑中表达量较低。AdlysG表达较为集中,主要在肝脏、脾脏、肺中表达,而在肌肉、肾脏、肠道和皮肤中表达量较低。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)侵染大鲵后,肝脏和脾脏中AdlysC和AdlysG的表达水平均显着上调,预示着其在大鲵免疫防御中的重要作用。(3)构建了pET32a/AdlysC和pET32a/AdlysG重组表达载体,采用大肠杆菌BL21原核表达系统,重组表达rAdlysC和rAdlysG蛋白。通过IPTG诱导表达,Ni~(2+)亲和纯化,包涵体复性等手段,获得了较高纯度的rAdlysC和rAdlysG蛋白。在体外不同pH梯度和温度梯度下,检测了重组蛋白酶的活性,发现rAdlysC和rAdlysG在pH 6.0,30℃下溶菌酶活性最高。通过最小抑菌浓度MIC试验,表明rAdlysC和rAdlysG蛋白对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌有一定的抑菌活性,且rAdlysC抗菌活性高于rAdlysG。研究结果不仅对大鲵溶菌酶基因的功能作用和活性特点有了一定的认知,而且为进一步了解大鲵免疫系统中的功能基因奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
杨雪珍,叶亚琼,何兰花,张绮琼,王晔[8]（2018）在《人溶菌酶基因密码子优化及其在小鼠乳腺中的表达》一文中研究指出人溶菌酶是人体内的一种非特异性免疫物质,具有杀菌消炎、免疫调节、改善胃肠道菌群等作用,在抗生素替代方面具有广阔的应用前景。已报道人溶菌酶基因c DNA在内源的αS2酪蛋白基因启动子调控下的表达量不高(23~31μg/m L),特尝试密码子优化策略以改善表达量。优化了人溶菌酶基因c DNA的密码子,连入以小鼠乳清酸蛋白(m WAP)基因座序列为调控元件的乳腺表达载体,验证其表达效率。通过原核注射制备转基因小鼠,PCR检测发现,出生的21只小鼠中有4只为转基因阳性,且能按孟德尔遗传规律传递给下一代;Western blot检测表明,小鼠乳汁中有微量的重组人溶菌酶表达。因此,密码子优化后的人溶菌酶基因可以在小鼠乳腺中获得有效表达,这可为外源基因定点整合的人溶菌酶转基因动物的高效表达研究奠定基础。(本文来源于《佛山科学技术学院学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
李云龙,高峰,张海涛,顾开朗[9]（2018）在《奶牛溶菌酶基因原核表达载体的构建》一文中研究指出为了构建奶牛溶菌酶(lysozyme,LYZ)原核表达载体,试验人工设计并合成LYZ基因CDS序列,将其克隆至表达载体p ET32T,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定。结果表明:PCR扩增和双酶切产物的分子质量分别为1 000 bp和400 bp,与预期大小一致;扩增产物经测序鉴定,也与目的片段完全一致。说明原核表达载体LYZp ET32T构建成功。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年05期）
陈珊珊,丁健,李鑫,刘军,贾禄强[10]（2018）在《整体优化的信号肽和人溶菌酶基因在毕赤酵母的高效表达》一文中研究指出人源溶菌酶作为一种天然的抑菌活力物质,在畜牧、医药及食品等行业具有潜在的应用价值。本研究将信号肽序列和人源溶菌酶基因碱基序列作为一个整体进行密码子优化。并在优化的信号肽序列2处位置,共新插入39个碱基,构成增长的优化信号肽+溶菌酶优化基因。将2种优化的信号肽+溶菌酶基因碱基序列分别插入pPICZαA载体上,并整合到毕赤酵母KM71的基因组上,获得重组子K1(整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因)和K4(整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因又整合了增长信号肽)。摇瓶诱导表达72 h后,离心取上清液,通过Bradford法和比浊法测定发现,K4的蛋白质表达量和酶活力均高于K1。5 L发酵罐下,采用高密度诱导表达策略,诱导54 h后K4的总蛋白质表达量可达3.02 g/L,所表达的人源溶菌酶活力达到324 072.0 U/ml。表明整体优化的α信号肽+人源溶菌酶基因又整合了增长信号肽有利于提高溶菌酶的分泌效率,实现高效表达。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2018年01期）
溶菌酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征。方法根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物, PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、 signalP 4.1、 TMHMM2.0、Smart、 MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析,并构建系统进化树。取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,感染后24 h统一饲养,分别于感染后1、 10、 20、 30 d各取3～5只福寿螺采集肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,未感染的福寿螺为阴性对照组。提取各个感染时期福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA,荧光定量PCR分析福寿螺G型溶菌酶mRNA的组织表达特征,设定对照组福寿螺各组织的G型溶菌酶m RNA的相对表达量为1.0±0.0。结果PCR扩增福寿螺G型溶菌酶基因片段,长度约为800 bp。测序结果显示,为一段828 bp的完整开放读码框,编码275个氨基酸。生物信息学分析结果显示, G型溶菌酶基因编码产物为稳定的疏水性蛋白,在1～19位存在1个信号肽,主要在细胞外包括细胞壁发挥作用,在18～85位氨基酸处存在1个SH3b结构域。系统进化树分析显示,福寿螺G型溶菌酶与尖膀胱螺的亲缘关系最近,序列一致性达79%;其次与海湾扇贝等其他软体动物较近,并聚类在一个大的分支上。荧光定量PCR结果显示,对照组雌性成年螺肝胰腺组织中, G型溶菌酶mRNA的拷贝数为2 238±158,高于雄性的685±27 (P <0.05)。福寿螺感染广州管圆线虫后,肝胰腺、肾脏、肠道、鳃和头足部的G型溶菌酶基因相对表达量,与对照组相比均有不同程度的下降(P <0.01)。感染后1、 10、 20、 30 d鳃中G型溶菌酶mRNA的相对表达量分别为0.002±0.002、 0.012±0.050、 0.001±0.000、 0.004±0.003,均低于对照组(P <0.01);肾脏组织中10 d和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);肝胰腺组织中1、 10和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);感染后1、 10、 20、 30 d肠道组织中的相对表达量分别为0.280±0.040、 0.070±0.030、 0.039±0.002、 0.120±0.050,均低于对照组(P <0.05),头足部组织中的相对表达量分别为0.280±0.150、 0.150±0.008、 0.031±0.011、 0.120±0.030,均低于对照组(P <0.05)。结论福寿螺感染广州管圆线虫后, G型溶菌酶基因在鳃、肠、头足组织中各个感染时期表达均下调,肝胰腺组织中感染后1、 10、 20 d表达下调,肾脏组织中感染后10 d、 20 d表达下调。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
溶菌酶基因论文参考文献
[1].张振娟,齐小浪,李尚伟,喻廷君,杜娟.九香虫溶菌酶基因CcLys的克隆与特征分析[J].山地农业生物学报.2019
[2].岳志远,张仪,郭云海,秦志强,黄芸.福寿螺感染广州管圆线虫后G型溶菌酶基因差异表达分析[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2019
[3].张志鹏,江静宜,夏海磊,冀德君,李明勋.奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定[J].家畜生态学报.2019
[4].张元臣,蔡新,张国强,董丽丽,王景顺.黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达[J].河南农业科学.2019
[5].王宁.大豆抱囊线虫（Heteroderaglycines）溶菌酶基因克隆及功能初步分析[D].中国农业科学院.2019
[6].李云龙,高峰,张海涛,顾开朗.奶牛溶菌酶基因的构建、表达及活性研究[J].家畜生态学报.2018
[7].刘然然.大鲵c-型和g-型溶菌酶基因的生物信息学分析和表达研究[D].西北农林科技大学.2018
[8].杨雪珍,叶亚琼,何兰花,张绮琼,王晔.人溶菌酶基因密码子优化及其在小鼠乳腺中的表达[J].佛山科学技术学院学报(自然科学版).2018
[9].李云龙,高峰,张海涛,顾开朗.奶牛溶菌酶基因原核表达载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[10].陈珊珊,丁健,李鑫,刘军,贾禄强.整体优化的信号肽和人溶菌酶基因在毕赤酵母的高效表达[J].江苏农业学报.2018
论文知识图
