导读:本文包含了糖基磷脂酰肌醇论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:磷脂,肌醇,蛋白,特异性,内质网,花粉管,细胞壁。
糖基磷脂酰肌醇论文文献综述
姚艳丽[1]（2019）在《多糖HH1-1抗胰腺癌和糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖GPC6促胰腺癌的功能及机制研究》一文中研究指出胰腺癌作为恶性程度极高的实体肿瘤,具有发病率逐年升高,预后差,致死率高的特点。胰腺癌易复发和转移,并易对化疗药物产生耐药性。胰腺癌的高发病率和死亡率主要由两方面的临床困境造成,一是缺乏有效的早期检测方法,二是由于对胰腺癌发生发展机理缺乏深入了解而缺乏有效的治疗手段。因此,揭示胰腺癌的发病机制,寻求有效的早期检测方法和治疗策略是治疗胰腺癌的核心任务。本课题主要研究天然多糖对胰腺癌的干预机制以及细胞膜糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖GPC6在胰腺癌中的功能及机制。细胞毒性的化疗一直是胰腺癌治疗的主要手段。目前临床上广泛使用的胰腺癌一线治疗是FOLFIRINOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂等几种化疗药物联合用药方案)和吉西他滨-白蛋白紫杉醇联合用药方案。但胰腺癌对这些化疗药物易产生高耐药性,且化疗药物毒副作用大,将大大降低患者的生活质量。此外,由于胰腺癌特殊的肿瘤微环境特征,将阻碍药物渗透至肿瘤细胞,使其克服化疗药物的毒性,而实现肿瘤持续性增长。因此,胰腺癌新的治疗策略亟待开发。但是到目前为止,无论是靶向治疗还是免疫治疗,这两种癌症治疗的最新举措,都没有在胰腺癌的治疗上取得突破性的积极成果。多糖是构成生命体的重要组成成分具有广泛的生物活性。例如免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、降血糖、抗氧化、抗病毒、神经保护、抗Aβ_(42)聚集以及缺血再灌注损伤保护等作用。此外,相对小分子化合物,大部分多糖几乎没有毒副作用。相比于细胞毒类药物,多糖类药物在临床上可改善患者生存质量,减轻毒副作用。基于此,我们从活血化瘀的中药红花中提取得到红花多糖,对其在胰腺癌中的作用进行深入研究。红花是最古老的作物之一,属于桔梗目、菊科、红花属植物,红花的入药部位是其干燥花。据《本草纲目》、《雷公炮制药性解》和《金匮要略》等书籍记载,红花广泛用于治疗血瘀,痛经和其他女性疾病。此外,红花的水提取物,羟基红花黄色素A(HSYA),被用于治疗心血管疾病,疗效显着。由于该植物的广泛生物活性,越来越多研究正致力于研究红花中有效的活性成分和作用机制。目前据文献统计,已经分离和鉴定了来自红花的种子,根茎和花中超过100种化合物,主要包括类黄酮、生物碱、有机酸和聚乙炔。但是红花中的多糖成分研究较少,尤其在抗肿瘤领域更是鲜有研究。我们从红花中分离出粗多糖HH,对HH进行抗胰腺癌、乳腺癌、脑星形胶质母细胞瘤、肝癌、结肠腺癌、慢性髓系白血病、宫颈癌、恶性黑色素瘤和非小细胞肺癌九种肿瘤的活性筛选,发现HH对胰腺癌BxPC-3细胞生长有良好的抑制活性,抑制率为89.50%。随后,通过进一步分离纯化和结构解析,我们发现粗多糖HH中的主要成分HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性。而该均一多糖对正常胰腺导管上皮细胞和肝细胞几乎没有毒性。克隆形成实验揭示HH1-1可显着抑制胰腺癌细胞形成的克隆数目和克隆大小。细胞周期检测发现,HH1-1处理后的胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞周期会阻滞于S期,细胞周期相关蛋白磷酸化AKT,磷酸化CDK2,Cyclin A_2表达下调,激酶抑制蛋白P21表达上调。Annexin V/PI双染色法、Hoechst 33258染色法和Caspase-3活性检测法的结果显示,HH1-1可诱导胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1凋亡。Bcl-2在HH1-1处理后表达下调;Bax和Cleaved Caspase-3在HH1-1处理后表达量上调。此外,HH1-1还可以抑制胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1的迁移和侵袭。通过HMEC-1细胞管腔形成实验和鸡胚尿囊膜实验发现,HH1-1可在体内和体外显着抑制血管新生。随后,我们通过体内实验,进一步证实了HH1-1的抗胰腺癌作用。通过胰腺癌细胞BxPC-3皮下移植瘤实验,我们发现0.5 mg/kg HH1-1可显着抑制肿瘤的体积和重量,其抑制作用与40 mg/kg阳性药吉西他滨的抑制作用相类似。我们使用人源性肿瘤组织异种移植模型(PDX),来模拟胰腺癌病人肿瘤的血运特点、基质特征和坏死状况等。实验结果显示,HH1-1能够浓度依赖性的抑制PDX肿瘤的体积和重量,高浓度50 mg/kg时其相对抑制率达58.78%。并且,在两项动物实验中,我们发现HH1-1对小鼠的体重和状态没有明显的影响,表明HH1-1具有很好的安全性。针对HH1-1的结构特征,我们对它的靶向性进行了探索。HH1-1作为一种阿拉伯半乳聚糖,可能会与半乳糖凝集素家族成员发生相互作用。我们发现在HH1-1处理BxPC-3和AsPC-1细胞后,Galectin-1、3、7在mRNA水平会发生显着下调。表面等离子共振实验(SPR)结果显示,HH1-1能够和Galectin-3结合,KD=4.158E~(-6)。但HH1-1不与Galectin-1和Galectin-7结合。且HH1-1不能与Galectin-3的配体EGFR结合,却能够抑制Galectin-3和EGFR的结合,从而阻断EGFR下游信号通路。EGFR作为肿瘤增殖、血管生成和肿瘤侵袭转移等过程的关键分子,阻断EGFR下游信号通路可显着抑制肿瘤进展。由于HH1-1可以抑制Galectin-3和EGFR的mRNA水平和蛋白水平,因此我们推测HH1-1可通过影响Galectin-3和EGFR的转录,进而影响两者的表达。通过分析和筛选Galectin-3和EGFR的转录因子,我们发现HH1-1处理胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1后,两者的共同转录因子FOXO3表达量显着上调。通过构建shRNA敲减Galectin-3和EGFR,以及外源性加入Galectin-3蛋白的回补实验,我们进一步在mRNA和蛋白水平研究,发现HH1-1可通过抑制Galectin-3/EGFR/AKT/FOXO3信号通路,发挥抗胰腺癌的活性。通过免疫组化和Western Blot,我们在两种移植瘤模型中验证了HH1-1在体内也是通过这一信号通路发挥作用。综上所述,我们从红花中分离纯化出一种结构明确的均一多糖HH1-1。HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性,且无明显毒副作用。HH1-1通过抑制胰腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制迁移和侵袭、抑制血管新生,发挥抗胰腺癌活性。靶向性研究发现HH1-1可结合Galectin-3。机制研究揭示,HH1-1结合Galectin-3,从而抑制Galectin-3与EGFR的结合,抑制EGFR下游信号通路:阻滞AKT的磷酸化水平,进一步导致FOXO3的磷酸化水平降低,FOXO3的表达量上升,转录因子FOXO3进入细胞核,影响关键分子的转录,最终呈现胰腺癌抑制表型。此外,FOXO3是Galectin-3与EGFR的转录负调控因子,当FOXO3表达量上升后,Galectin-3与EGFR的转录被抑制,最终导致Galectin-3与EGFR表达下调,进一步增加其抑制胰腺癌的作用。上述研究表明多糖HH1-1通过与Galectin-3结合,干预EGFR信号通路发挥抗胰腺癌活性。而在胰腺癌临床研究中的另一困境则揭露出,目前针对胰腺癌尚无有效的诊断标志物和药物靶点。因此,我们关注细胞膜表面的蛋白聚糖在胰腺癌发生发展中的功能和机制。前期已有研究表明糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在多种肿瘤中具有重要的生物学作用,我们将聚焦糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在胰腺癌发生发展过程中发挥什么生物活性呢?为了回答这一问题,我们首先利用5对胰腺癌病人样本的mRNA芯片,分析发现GPC6在胰腺癌肿瘤中表达量显着高于癌旁组织。随后我们采用111对胰腺癌病人样本的RT-qPCR和免疫组化进行验证,发现GPC6在79例胰腺癌患者肿瘤组织中高表达,提示GPC6有可能在胰腺癌中担任重要角色并可能成为胰腺癌的分子标志物或潜在药物作用靶点。将GPC6表达水平与临床样本信息整合,我们发现GPC6在恶性程度高的T3期表达显着升高,并且GPC6表达量高的患者存在总生存期短的特征。随后我们对GPC6在胰腺癌中的功能进行深入研究。首先通过构建GPC6敲减或过表达的胰腺癌稳转细胞株,我们发现GPC6可显着促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990增殖,敲减GPC6则抑制胰腺癌细胞生长。此外,显微镜下观察可发现,过表达GPC6会导致胰腺癌细胞形态发生改变,使其具有间质细胞形态特征。同时,划痕愈合实验和迁移侵袭实验证实,GPC6可促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990迁移和侵袭,而敲减GPC6则会抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭。体内实验运用BxPC-3和PANC-1细胞皮下移植瘤实验证实,敲减GPC6会显着抑制肿瘤的生长,导致肿瘤体积减小,重量减轻;反之,过表达GPC6则会显着促进皮下移植瘤的生长。重要的是,在胰腺癌PDX模型中敲减GPC6也能显着抑制肿瘤生长。通过尾静脉注射过表达GPC6的胰腺癌细胞SW1990及其对照细胞,发现过表达GPC6能显着促进胰腺癌细胞在肝脏和肺部肿瘤的形成。有趣的是,我们对皮下移植瘤的肿瘤组织进行HE染色和天狼猩红染色后发现,过表达GPC6可显着促进胰腺癌肿瘤组织的纤维化,而敲减GPC6后肿瘤组织纤维化程度降低。对转移性肝脏和肺部肿瘤组织进行天狼猩红染色后也可发现,过表达GPC6会显着促进肝脏组织纤维化,并轻微促进肺部肿瘤组织纤维化。此外,我们通过对纤维化相关蛋白的检测,发现敲减GPC6后,细胞胶原蛋白及其相关酶表达量均显着降低;转化生长因子家族蛋白TGFβI和TGFβ2表达量也显着降低;肌动蛋白和细胞骨架蛋白ACTN2,ABLIM1,LIMA1和ACTN4表达量均显着降低。基于此,我们推测,GPC6在促进肿瘤增殖、迁移侵袭和纤维化进程中担任关键角色。进一步的机制研究,我们发现GPC6可影响胰腺癌细胞PANC-1和BxPC-3EMT相关标志物的表达。敲减GPC6后,与细胞粘附和紧密连接相关的蛋白,如E-Cadherin、Claudin-1、ZO-1表达上调;反之,间质表型相关分子如N-Cadherin、Vimentin、?-Catenin、TCF8/ZEB1、Slug和Snail表达量则降低。因此,我们推测,GPC6可能通过影响EMT进程来影响胰腺癌肿瘤进展。上述研究表明,多糖HH1-1可能成为抗胰腺癌的候选药物,GPC6可能是抗胰腺癌的药物靶点。这些研究为我们理解胰腺癌的发生发展机理和基于多糖的创新药物研究奠定了坚实基础。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)》期刊2019-06-01）
柳艺石[2]（2018）在《糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成过程调控机制的研究》一文中研究指出糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化修饰是一种保守于真核生物中的蛋白质翻译后修饰方式。在哺乳动物细胞中有超过150种细胞膜蛋白都被GPI锚修饰。GPI在内质网中合成并与蛋白质结合,之后从内质网经由高尔基体转运到细胞膜表面。在GPI的合成过程中,一条酰基链会被加到GPI前体的肌醇环2号位置。当蛋白质转移到GPI上时,这条酰基链会被GPI肌醇脱酰酶(PGAP1)切除。该反应影响GPI锚定蛋白从内质网向高尔基体的转运效率,同时还影响GPI在内质网和高尔基体中的结构重组。成熟的GPI锚定蛋白可以被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)从细胞膜表面切割下来,而肌醇酰基化的GPI锚定蛋白不能够被PI-PLC切割,对PI-PLC处理呈现出抗性。本论文利用PI-PLC可以特异性切割GPI锚定蛋白的特点,在哺乳动物单倍体细胞中利用基因诱捕技术筛选调控GPI肌醇脱酰基反应的调控因子。经测序分析发现了8个参与GPI肌醇脱酰基过程的基因,其中包括编码GPI肌醇脱酰酶的基因PGAP1。大多数糖蛋白都在内质网中合成和解聚,很多分子伴侣参与了蛋白质的折迭。在蛋白质从内质网转运出去之前,需要经过内质网质量控制系统以确保蛋白质折迭完全。天冬酰胺(N)连接的糖基化修饰作为蛋白质翻译后修饰的另外一种重要方式,在新生糖蛋白的质量控制中发挥着关键作用。本研究通过对筛选到的MOGS,GANAB和CANX基因进行分析,发现GPI锚定蛋白上的N-糖基化修饰参与调控了GPI锚定蛋白的质量控制和GPI的结构重组,干扰钙连蛋白循环降低了GPI肌醇脱酰基反应的效率。主要研究结果总结如下:(1)本研究通过基因诱捕技术在人的单倍体细胞HAP1中筛选到除PGAP1之外7个对PI-PLC处理具有抗性的基因,包括SELT,CANX,C18orf32,CLPTM1,MOGS,SEC63和GANAB。利用CRISPR-Cas9系统在HEK293细胞中敲除PGAP1和这7个基因,与单倍体细胞筛选结果相符,PGAP1敲除细胞对PI-PLC处理完全具有抗性,其它7个基因的敲除细胞对PI-PLC处理具有部分抗性。过表达相关基因或PGAP1可以回补PI-PLC抗性的性状,说明这7个基因确实参与调控了PGAP1介导的GPI肌醇脱酰基反应。这7个基因敲除的细胞中PGAP1的的表达量,定位及蛋白质的稳定性没有发生变化。(2)在筛选到的7个基因中,有3个基因参与了蛋白质上N-糖链的加工和识别。其中MOGS和GANAB编码的α-葡萄糖苷酶Ⅰ和Ⅱ负责切除糖链末端的葡萄糖残基,CANX编码的钙连蛋白参与蛋白质质量控制。用葡萄糖苷酶抑制剂DNJ处理细胞,导致细胞中GPI锚定蛋白对PI-PLC的抗性增加,这与敲除MOGS和GANAB的性状一致;敲除葡萄糖基转移酶基因ALG6和ALG8回补了MOGS基因敲除的性状;说明蛋白质N-糖链上的葡萄糖基团影响GPI肌醇脱酰基的反应效率。钙连蛋白拥有一个凝集素结构域,钙连蛋白凝集素识别位点的突变(Y164A和E216A)不能回补CANX基因敲除导致的PI-PLC抗性,说明钙连蛋白通过识别蛋白质上的糖链参与调控了GPI肌醇脱酰基反应的过程。(3)敲除MOGS基因会导致内质网压力的产生。为了证明内质网压力与GPI肌醇脱酰基反应之间的关系,用内质网压力诱导剂毒胡萝卜素和衣霉素分别处理细胞,10天后细胞中的GPI锚定蛋白对PI-PLC处理的抗性增加。同时在细胞中敲除内质网钙离子通道蛋白基因SERCA2和糖基转移酶复合物OST催化亚基STT3A和STT3B,与内质网压力诱导剂处理结果一致,基因敲除的细胞中GPI锚定蛋白对PI-PLC的抗性增加。(4)通过在细胞中过量表达错误折迭的GPI锚定蛋白时,错误折迭的GPI锚定蛋白滞留在内质网中,导致内质网压力升高,细胞内源的GPI锚定蛋白的肌醇脱酰基效率下降,而在敲除CANX基因的细胞中则没有变化。当表达不含糖链的错误折迭GPI锚定蛋白或其它错误折迭膜蛋白时,细胞中GPI锚定蛋白的肌醇脱酰基效率没有改变,说明GPI锚定蛋白的质量控制和加工过程同时依赖于N-糖链和GPI锚。免疫共沉淀和免疫印迹结果显示钙连蛋白同时与GPI锚定蛋白和PGAP1相互作用,提高了PGAP1催化的GPI肌醇脱酰基反应效率。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
荣瑶[3]（2016）在《糖基磷脂酰肌醇肌醇脱酰化相关基因的鉴定和功能研究》一文中研究指出糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)对蛋白的锚定是一种在内质网中广泛存在于真核细胞中的高度保守的蛋白质翻译后修饰方式。目前,在哺乳动物细胞中已发现约150余种蛋白质通过GPI锚定于细胞表面,包括补体调节蛋白、细胞粘附分子、肿瘤标志物等,它们参与了重要的生命过程,如细胞识别、生长、分化和程序性死亡等。在GPI的生物合成途径中,一个酰基链被转运到GPI中间体的肌醇的2号位。在蛋白质与GPI锚结合后,此酰基键就被GPI肌醇脱酰酶PGAP1切除。近两年,不断有临床数据发现因PGAP1缺陷引起的智力残疾、脑病、肌张力过低症等常见疾病表型。但是,在内质网中哪些因子参与GPI肌醇脱酰化以及肌醇脱酰基化是如何被调控的,至今相关研究尚未取得突破性的进展。利用糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(phosphatidylinositol(PI)-specific phospholipase C,PI-PLC)可以剪切正常状态下的GPI锚,但是无法剪切酰基化的肌醇这一特性来检测GPI锚定蛋白的酰化状态。在PGAP1缺陷型细胞中,经PI-PLC处理后,GPI锚定蛋白CD59呈现阳性,表明几乎所有GPI的肌醇都维持酰基化状态,因此表现出了PI-PLC抗性。利用其对PI-PLC的敏感性差异,进行全基因组筛选来探究与GPI肌醇脱酰化相关的基因。将基因诱捕载体与人类单倍体HAP1细胞株的基因组整合在一起,对其基因组进行随机突变。通过筛选来富集对PI-PLC有抗性的突变细胞。利用新一代测序技术对富集的阳性细胞群和未选择的阴性细胞群分别进行测序从而确定基因诱捕插入位点。通过测序比对,除了PGAP1外,我们还发现了7个候选基因,其中包括参与蛋白折迭的编码基因,说明此筛选方法具有可行性和高效性。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在HEK293FF6细胞株中分别敲除这些候选基因,发现这些单克隆基因敲除细胞株中的GPI锚定蛋白对PI-PLC有部分抗性。分别在这些单克隆突变株中过表达hPGAP1后,PI-PLC抗性都得到了回补,说明这些基因都直接或间接地参与到GPI肌醇脱酰化的调控机制中。钙联蛋白CANX的凝集素活性是GPI锚定蛋白对PI-PLC产生抗性的必要条件。此外,α-葡萄糖苷酶的活性的降低会引起PGAP1的功能缺陷。以Cas9介导的MOGS-KO单克隆突变株为基础,进一步敲除了ALG6和ALG8基因,在双基因突变细胞群中,GPI锚定蛋白CD59对PI-PLC的敏感性得到了一定的回补。由此,提出了N-聚糖依赖途径的假说,初步建立模型来解释此途径中相关基因在GPI肌醇脱酰化中发挥的作用。本研究中,对筛选得到的内质网中GPI肌醇脱酰化相关基因与GPI肌醇脱酰酶PGAP1的关系进行了初步讨论。(本文来源于《江南大学》期刊2016-06-01）
刘秀华[4]（2015）在《糖基磷脂酰肌醇、药物分子和纳米粒子的跨膜机理研究》一文中研究指出很多细胞功能,如信号传导、跨膜运输以及细胞膜融合等都需要通过各种分子和物质的跨膜来实现。近年来,通过使用计算机模拟的方法,从生物分子的大小、形状和亲疏水性质等因素着手,人们对生物分子的穿膜机理和跨膜机理进行了广泛研究,其中磷脂膜大多是由纯的饱和双链磷脂分子构成。但在实际的人体中,磷脂膜上分布着大量的跨膜蛋白、糖类或者胆固醇。这些成分都会改变着磷脂膜的性质,尤其是硬度,而目前考察膜的硬度对生物分子穿膜和跨膜的研究甚少。为了能够更加接近真实的生物膜体系,我们采用了硬度不同的膜体系来研究生物小分子的跨膜机理。本篇论文利用全原子分子动力学程序包GROMACS,对生物小分子糖基磷脂酰肌醇(GPI)、药物分子阿霉素和纳米粒子C60与不同硬度的DPPC膜(包括软的纯DPPC膜和含胆固醇的相对较硬的DPPC膜)之间的相互作用进行了系统的研究,从微观的角度探究了不同形状的生物小分子在磷脂膜中的运动状态和跨膜机理。主要的研究内容以及结论如下(1)糖基磷脂酰肌醇(GPI)是一种连接锚定蛋白和细胞膜的中介体,其分子结构主要是由糖类分子和疏水烷基链组成,生物功能是使得生物信号由细胞膜的一侧传递到另一侧,实现信号的传递,由于当糖基磷脂酰肌醇无法正常地进入到膜内时,会阻碍了某些生物性状的正确表达,从而引发疾病。论文研究表明糖基磷脂酰肌醇具有和磷脂十分类似的疏水尾链,倾向处于膜中的疏水环境。模拟的动力学过程和自由能的计算显示,在纯DPPC膜中,糖基磷脂酰肌醇无法自发进入到磷脂膜中,需要克服一定的能垒,但是它可以在很短的模拟时间内自发进入到加有胆固醇的磷脂膜中。对于GPI这种锚类小分子更倾向处于硬的磷脂区域,以便其顺利地实现锚定作用。(2)药物分子阿霉素,一种被临床广泛应用的疏水抗癌药物,但是疗效不高,主要原因是受细胞膜截留的影响,较难到达生物体的癌化位置。论文在疏水药物分子阿霉素和磷脂膜的相互作用的模拟中发现,药物分子的方向对含胆固醇的磷脂膜有一定的敏感性,最终会以接近垂直于磷脂膜X-Y面的方式处于膜中。而对于软的不含固醇的磷脂膜,阿霉素在穿膜过程以及膜中稳定结构的方向分布随机性较大。模拟还表明硬的脂质会延迟药物分子的渗透时间,同时我们推测,硬的磷脂膜更加容易滞留药物分子于膜中,这一点与实验结果相吻合。(3)在第叁部分论文研究了纳米粒子C60与生物膜的相互作用。与纳米粒子C60在软的纯磷脂膜中的模拟结果类似,C60在硬的加有胆固醇的磷脂膜中也有一个“跳进”的过程,但是时间会有所延迟。由于胆固醇的硬度较大,空间的排开需要一定的模拟时间。同时纳米粒子C60在硬的磷脂膜X-Y面的运动轨迹呈现出笼状效应,即周围的磷脂和胆固醇对C60的运动有强的约束。(本文来源于《北京化工大学》期刊2015-05-29）
严蕾,唐建国[5]（2013）在《假丝酵母黏附相关糖基磷脂酰肌醇锚定细胞壁蛋白的研究进展》一文中研究指出假丝酵母(俗称念珠菌)是人类重要的条件致病性真菌,可导致人体浅表组织感染,甚至入侵血流引起念珠菌血症和播散性念珠菌病。黏附是念珠菌机会性感染的第1步,该过程受黏附蛋白的精确调控。糖基磷脂酰肌醇锚定细胞壁蛋白(GPI-CWP)家族中有许多成员参与调控念珠菌的黏附。本文就几种重要的念珠菌黏附相关GPI-CWP:凝集样序列(Als)、菌丝壁蛋白1(Hwp1)、上皮细胞黏附素(Epa)、聚苯乙烯黏附增强蛋白1(Eap1)等的致病机制展开综述。(本文来源于《微生物与感染》期刊2013年03期）
高健,郭忠武[6]（2013）在《糖基磷脂酰肌醇及其锚定蛋白的合成研究进展》一文中研究指出在真核生物中,蛋白质的C-末端以共价键形式与糖基磷脂酰肌醇(GPI)相连是一种常见的翻译后修饰,GPI修饰的蛋白质可以通过GPI锚定在细胞膜的外叶.GPI锚及其锚定蛋白的结构复杂、多样,在众多生物学过程中扮演着不可或缺的重要作用.化学合成结合酶催化反应是获得结构明确、纯度高的GPI锚及GPI锚定蛋白的重要方法,为在分子水平上深入探索此类化合物的结构和生物学功能奠定了基础.本文对此合成领域中所涉及的光学纯且差异性保护的肌-肌醇衍生物的制备、天然来源GPI的合成策略、以结构多样性为导向的GPI衍生物的合成,以及GPI锚定蛋白的合成策略进行综述.(本文来源于《中国科学:化学》期刊2013年08期）
李厦[7]（2013）在《糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白COBL10在花粉管生长和导向过程中的作用机理研究》一文中研究指出雄配子体花粉管的生长是完成被子植物授粉和受精等生殖发育过程的一个重要步骤。花粉管导管状的形态源于仅限于细胞表面一个小区域的细胞延伸,又称顶端生长。此外,在雌蕊体内生长的花粉管可以感受雌蕊所发出的信号而改变其生长轴,进行导向性生长。对这种极性及导向性生长的深入了解不但可以为作物的遗传改造奠定理论基础,而且还对于理解细胞信号传导及细胞间的通讯提供重要信息。我们研究的基因,COBL10,一个糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,可能是花粉管极性及导向性生长的关键基因。COBL10基因功能的丧失对于花粉管在体外的生长没有任何影响,但极大地破坏了花粉管在雌蕊体内的生长及导向,导致配子体雄性不育。本研究结合分子生物学、细胞生物学、遗传学和生物化学等方法,通过研究COBL10在授粉受精过程中的作用机理,揭示其在受精过程中所调控的信号通路。我们的研究发现：(1) COBL10突变后花粉管顶端果胶层的沉积受到了影响,此外花粉管侧翼细胞壁的纤维素沉积降低。(2) COBL10突变对于花粉管壁的影响仅表现在体内生长的花粉管中,暗示COBL10的功能仅表现在有雌蕊引导信号存在的情况下。(3)在体内观察到的突变体花粉管生长迟滞,COBL10定位在顶端质膜及胞内点状细胞器上,这些事实暗示,COBL10可能调控细胞壁的合成或细胞壁构建材料的分泌。(4)突变体花粉管体内生长迟滞暗示COBL10对于雌蕊子房隔膜中分泌的信号分子进行感受和响应。通过对COBL10亚细胞定位及功能域的精细分析,也为植物其他GPI-APs的功能研究提供更多的理论支持。(本文来源于《山东农业大学》期刊2013-06-01）
曹勤燕,薛艳凤,沈利[8]（2012）在《日本血吸虫糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白的鉴定》一文中研究指出目的鉴定日本血吸虫的糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-AP)。方法根据曼氏血吸虫的糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白Sm200的编码基因(GenBank登录号为XM_002569560.1),运用生物信息学方法寻找日本血吸虫的同源基因,分析后选取基因蛋白质编码区(CDS)的部分基因序列(SjGPIs,长约933 bp)进行PCR扩增,并克隆入原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用镍柱Ni-NTA亲和层析纯化重组肽段SjGPIs。用纯化的重组肽段SjGPIs免疫新西兰大耳兔,以制备的重组肽段抗血清检测日本血吸虫GPI锚定蛋白。用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)鉴定检测到的蛋白在日本血吸虫虫体上的锚定方式。检测日本血吸虫感染小鼠的白细胞,确定其是否吞噬GPI锚定蛋白。结果日本血吸虫的基因组中存在与曼氏血吸虫GPI锚定蛋白Sm200基因的同源基因序列,经比对拼接后获得3 495 bp含完整编码蛋白C末端的基因编码序列。以所选基因序列进行肽段原核表达,获得重组质粒pET-28a(+)-SjGPIs。通过对蛋白C末端序列分析、经蛋白质印迹(Wes-tern blotting)分析和PI-PLC酶切验证,发现日本血吸虫被膜存在以GPI形式锚定的蛋白,相对分子质量约为Mr200 000,命名为SjGPI200。感染日本血吸虫小鼠的白细胞中可检测到完整的SjGPI200蛋白。结论日本血吸虫存在锚定蛋白SjGPI200,并以GPI形式锚定于虫体被膜上。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2012年05期）
杨智英,谭超超,杨治平,黄河,唐建华[9]（2012）在《维甲酸对肝癌细胞HepG2糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D表达及细胞生物学特性的影响》一文中研究指出应用MTT、流式细胞仪、免疫印迹法检测全反式维甲酸(ATRA)单独或联合糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)特异性抑制剂1,10-二氮杂菲对肝癌细胞HepG2生物学特性的改变.ATRA使肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达及酶活性上调,并呈现剂量和时间依赖性.ATRA可抑制肝癌细胞HepG2增殖,使肝癌细胞Caspase-3表达水平显着增加,Bcl-2表达水平下调,促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).ATRA联合1,10-二氮杂菲诱导组细胞,Bcl-2、细胞增殖活性较ATRA单独诱导组显着增强,Caspase-3、凋亡率显着下降.维甲酸可促进肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达上调,高活性的GPI-PLD有助于维甲酸抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡.(本文来源于《生命科学研究》期刊2012年01期）
刘新,李建远[10]（2012）在《人类精子糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白研究进展》一文中研究指出在大多数真核生物中,糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚作为一种翻译后修饰定位蛋白质的C端而定位于细胞膜的外叶。GPI锚的结构上主要由叁部分组成:磷酸乙醇胺连接部分、聚糖部分和磷脂尾部分。因GPI锚定蛋白结构和功能的多样性(本文来源于《检验医学与临床》期刊2012年02期）
糖基磷脂酰肌醇论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化修饰是一种保守于真核生物中的蛋白质翻译后修饰方式。在哺乳动物细胞中有超过150种细胞膜蛋白都被GPI锚修饰。GPI在内质网中合成并与蛋白质结合,之后从内质网经由高尔基体转运到细胞膜表面。在GPI的合成过程中,一条酰基链会被加到GPI前体的肌醇环2号位置。当蛋白质转移到GPI上时,这条酰基链会被GPI肌醇脱酰酶(PGAP1)切除。该反应影响GPI锚定蛋白从内质网向高尔基体的转运效率,同时还影响GPI在内质网和高尔基体中的结构重组。成熟的GPI锚定蛋白可以被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)从细胞膜表面切割下来,而肌醇酰基化的GPI锚定蛋白不能够被PI-PLC切割,对PI-PLC处理呈现出抗性。本论文利用PI-PLC可以特异性切割GPI锚定蛋白的特点,在哺乳动物单倍体细胞中利用基因诱捕技术筛选调控GPI肌醇脱酰基反应的调控因子。经测序分析发现了8个参与GPI肌醇脱酰基过程的基因,其中包括编码GPI肌醇脱酰酶的基因PGAP1。大多数糖蛋白都在内质网中合成和解聚,很多分子伴侣参与了蛋白质的折迭。在蛋白质从内质网转运出去之前,需要经过内质网质量控制系统以确保蛋白质折迭完全。天冬酰胺(N)连接的糖基化修饰作为蛋白质翻译后修饰的另外一种重要方式,在新生糖蛋白的质量控制中发挥着关键作用。本研究通过对筛选到的MOGS,GANAB和CANX基因进行分析,发现GPI锚定蛋白上的N-糖基化修饰参与调控了GPI锚定蛋白的质量控制和GPI的结构重组,干扰钙连蛋白循环降低了GPI肌醇脱酰基反应的效率。主要研究结果总结如下:(1)本研究通过基因诱捕技术在人的单倍体细胞HAP1中筛选到除PGAP1之外7个对PI-PLC处理具有抗性的基因,包括SELT,CANX,C18orf32,CLPTM1,MOGS,SEC63和GANAB。利用CRISPR-Cas9系统在HEK293细胞中敲除PGAP1和这7个基因,与单倍体细胞筛选结果相符,PGAP1敲除细胞对PI-PLC处理完全具有抗性,其它7个基因的敲除细胞对PI-PLC处理具有部分抗性。过表达相关基因或PGAP1可以回补PI-PLC抗性的性状,说明这7个基因确实参与调控了PGAP1介导的GPI肌醇脱酰基反应。这7个基因敲除的细胞中PGAP1的的表达量,定位及蛋白质的稳定性没有发生变化。(2)在筛选到的7个基因中,有3个基因参与了蛋白质上N-糖链的加工和识别。其中MOGS和GANAB编码的α-葡萄糖苷酶Ⅰ和Ⅱ负责切除糖链末端的葡萄糖残基,CANX编码的钙连蛋白参与蛋白质质量控制。用葡萄糖苷酶抑制剂DNJ处理细胞,导致细胞中GPI锚定蛋白对PI-PLC的抗性增加,这与敲除MOGS和GANAB的性状一致;敲除葡萄糖基转移酶基因ALG6和ALG8回补了MOGS基因敲除的性状;说明蛋白质N-糖链上的葡萄糖基团影响GPI肌醇脱酰基的反应效率。钙连蛋白拥有一个凝集素结构域,钙连蛋白凝集素识别位点的突变(Y164A和E216A)不能回补CANX基因敲除导致的PI-PLC抗性,说明钙连蛋白通过识别蛋白质上的糖链参与调控了GPI肌醇脱酰基反应的过程。(3)敲除MOGS基因会导致内质网压力的产生。为了证明内质网压力与GPI肌醇脱酰基反应之间的关系,用内质网压力诱导剂毒胡萝卜素和衣霉素分别处理细胞,10天后细胞中的GPI锚定蛋白对PI-PLC处理的抗性增加。同时在细胞中敲除内质网钙离子通道蛋白基因SERCA2和糖基转移酶复合物OST催化亚基STT3A和STT3B,与内质网压力诱导剂处理结果一致,基因敲除的细胞中GPI锚定蛋白对PI-PLC的抗性增加。(4)通过在细胞中过量表达错误折迭的GPI锚定蛋白时,错误折迭的GPI锚定蛋白滞留在内质网中,导致内质网压力升高,细胞内源的GPI锚定蛋白的肌醇脱酰基效率下降,而在敲除CANX基因的细胞中则没有变化。当表达不含糖链的错误折迭GPI锚定蛋白或其它错误折迭膜蛋白时,细胞中GPI锚定蛋白的肌醇脱酰基效率没有改变,说明GPI锚定蛋白的质量控制和加工过程同时依赖于N-糖链和GPI锚。免疫共沉淀和免疫印迹结果显示钙连蛋白同时与GPI锚定蛋白和PGAP1相互作用,提高了PGAP1催化的GPI肌醇脱酰基反应效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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