Loop EF区嵌合猪细小病毒B细胞表位对猪圆环病毒2型病毒样颗粒组装的影响

论文摘要

Loop EF是猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的重要Loop结构,然而它在PCV2组装过程中的作用仍不清楚。本研究通过模拟PCV2病毒样颗粒（VLPs）3D结构,比较分析PCV2和PCV1、PCV3的氨基酸序列以及预测Loop EF的突变位点,筛选出PCV2 Loop EF中可供外源表位替换或插入的capsid表面位点,即第133位丙氨酸。探索性地针对该位点设计3个突变体,分别为猪细小病毒1型（PPV1）B细胞线性表位（228QQITDA233）插入PCV2 Cap第132和133位氨基酸、第133和134位氨基酸之间及替换第133位氨基酸。利用over-lap PCR等技术构建上述3个突变体的重组质粒,在大肠杆菌（BL21/DE3）中表达,并利用镍柱亲和层析纯化3个突变体蛋白,最后在体外进行VLPs组装,电镜结果显示3个突变体蛋白均可体外组装成完整的VLPs。结果表明,Loop EF中第133位丙氨酸的替换或插入外源表位突变不影响VLPs组装,提示PCV2 VLPs Loop EF展示外源抗原表位具有可行性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与主要试剂
•   1.2 Loop EF可突变位点的筛选和预测
•   1.3 引物设计
•   1.4 over-lap PCR扩增目的片段
•   1.5 重组质粒的构建
•   1.6 重组质粒的表达、纯化
•   1.7 重组蛋白SDS-PAGE及Western-blot鉴定
•   1.8 PCV2 VLPs突变体的组装与电镜观察
• 2 结果
•   2.1 Loop EF突变位点的筛选和预测
•   2.2 PCR扩增目的片段
•   2.3 重组突变体蛋白的纯化与鉴定
•   2.4 VLPs突变体的组装和电镜鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张素姣,王东亮,李萌,蒋一凡,湛洋,王乃东

关键词: 猪圆环病毒型,病毒样颗粒,外源表位,突变体蛋白

来源: 中国兽医科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心

基金: 国家自然科学基金项目(31372406),湖南省教育厅重点项目(15A086),湖南省自然科学基金面上项目(2018JJ-2177),湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目(SCX1836),湖南农业大学校科学基金项目(17QN10)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0024

页码: 176-182

总页数: 7

文件大小: 1902K

下载量: 133