羊口疮病毒ORF080基因的原核表达、纯化及鉴定

论文摘要

本试验旨在原核表达、纯化羊口疮病毒ORF080蛋白并鉴定其反应性.根据GenBank已发表的羊口疮病毒OV-GO株ORF080基因序列（登录号:KP010354）,将密码子优化后合成该序列并克隆至pET-32a（+）原核表达载体中,构建pET-32a（+）-ORF080重组质粒.经双酶切和测序鉴定后转化至大肠杆菌Rossetta感受态细胞中,用IPTG诱导,诱导产物经SDS-PAGE鉴定,重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式获得表达.采用镍柱对可溶性重组蛋白进行纯化,再经SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹双重鉴定.SDS-PAGE检测结果显示,在57 ku处出现单一重组蛋白条带;蛋白质免疫印迹鉴定证实该纯化的蛋白能与抗组氨酸标签的抗体和羊口疮阳性血清发生特异性反应,证明成功表达并纯化出具有良好反应性的ORF080蛋白.试验结果为进一步对ORF080蛋白结构、功能及基因工程疫苗的研究提供参考.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 载体、菌株与试剂
•   1.2 ORF080基因序列密码子的优化
•   1.3 pET-32a（+）-ORF080表达载体的构建
•   1.4 重组质粒的转化
•   1.5 重组表达菌的诱导表达及可溶性检测
•   1.6 重组蛋白的纯化
•   1.7 重组蛋白的免疫印迹鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 pET-32a（+）-ORF080重组原核表达载体的鉴定
•   2.2 重组表达菌的鉴定
•   2.3 重组表达菌的诱导表达及ORF080蛋白的可溶性检测
•   2.4 ORF080蛋白的纯化
•   2.5 ORF080蛋白的免疫印迹鉴定
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈珍珍,曾显成,池雪林,白丁平,刘云辉,胡可慧,罗树红,黄小红

关键词: 羊口疮病毒,蛋白,原核表达

来源: 福建农林大学学报(自然科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,佛山科学技术学院口腔医学院

基金: 福建农林大学科技创新专项基金项目(KFA17221A,KFA17222A)

分类号: S852.654

DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2019.06.015

页码: 776-780

总页数: 5

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