多重PCR检测耐除草剂转基因作物

论文摘要

为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR（MPCR）研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、灵敏度和特异性验证等,建立了能同时检测5种除草剂抗性基因的MPCR检测方法。结果表明,当dmo、pat、CP4EPSPS、bar、aad1基因的检测引物终浓度分别为0.2、0.2、0.3、0.4、0.2μmol·L-1,退火温度为63℃时5种靶标扩增效果较好,且特异性条带清晰且均一。此外,MPCR检测方法具有较好的特异性,对每种靶标的检测灵敏度均可达到0.1%。适用性测试结果显示,MPCR检测方法可对含有5种除草剂抗性基因的多种转基因作物的单个品系或多个品系混合物进行筛选检测。无假阳性和假阴性结果表明,MPCR检测方法对实际样品具有很好的适用性。本试验结果为筛选高效耐除草剂转基因作物检测技术提供了一定的理论依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 试验材料
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 样品基因组DNA的提取
•     1.2.2 阳性对照DNA样品的制备
•     1.2.3 引物的设计及筛选
•     1.2.4 单重PCR扩增体系
•     1.2.5 MPCR扩增体系
•     1.2.6 扩增程序及产物检测
• 2 结果与分析
•   2.1 引物筛选
•   2.2 MPCR引物适用性
•   2.3 MPCR反应体系及反应程序的优化结果
•   2.4 MPCR方法的灵敏度分析
•   2.5 MPCR检测方法对不同组分样品的适用性
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邢珍娟,董立明,刘娜,夏蔚,李葱葱,谢彦博,李飞武

关键词: 转基因作物,除草剂抗性基因,多重,筛选检测

来源: 核农学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农业基础科学

单位: 吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

基金: 吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2017JQ017)

分类号: S188

页码: 255-261

总页数: 7

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