基于Ⅱ型毒素–抗毒素系统构建ε–聚赖氨酸合成酶的链霉菌稳定表达载体

论文摘要

鉴于ε–聚赖氨酸収酵过程对抗生素压力条件的依赖,尝试基于Ⅱ型毒素–抗毒素系统(relBE2sca)构建无选择压力下稳定表达ε–聚赖氨酸的淀粉酶产色链霉菌表达系统:将抗毒素基因relB2sca与ε–聚赖氨酸合成酶基因pls克隆至表达载体,幵导入淀粉酶产色链霉菌pls缺失突变株,将毒素基因relE2sca整合至淀粉酶产色链霉菌的染色体(突变株YY3),获得包含ε–聚赖氨酸稳定表达的突变株YY1。经过多次传代,相比对照组,在不含抗生素压力条件下,突变株YY1依然能够稳定地合成ε–聚赖氨酸。毒素蛋白RelE2sca的表达会导致变铅青链霉菌、阿维链霉菌和链霉菌FR–008等常用链霉菌异源表达宿主的死亡,提示基于Ⅱ型毒素–抗毒素系统(relBE2sca)可作为一种通用的遗传标记。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 构建仅包含pls表达载体的突变株YY2
•     1.2.2 构建含有pls和抗毒素基因relB2sca表达载体的突变株YY3
•     1.2.3 构建含有pls和抗毒素基因relB2sca表达载体同时整合毒素基因relE2sca的突变株YY1
• 2 结果与分析
•   2.1 突变株YY1、YY2和YY3的PCR验证结果
•   2.2 relBE2sca增强质粒在大肠杆菌中的稳定遗传性
•   2.3 毒性蛋白RelE2sca在链霉菌异源表达宿主中的功能
•   2.4 ε–聚赖氨酸合成酶表达质粒的遗传稳定性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周奕阳,李鹏,谭之磊,邓子新,贾士儒,欧竑宇

关键词: 链霉菌,表达载体,型毒素抗毒素系统,聚赖氨酸合成酶,质粒稳定性

来源: 湖南农业大学学报(自然科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院,江西省科学院微生物研究所,天津科技大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基釐项目(31371261)

分类号: Q78

DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2019.02.007

页码: 149-153

总页数: 5

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