导读:本文包含了微孔板杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:微孔,细胞体,多相,病毒,基因,放线菌,乙肝病毒。
微孔板杂交论文文献综述
王英[1]（2013）在《放线菌DNA-DNA微孔板杂交法优化及菌株HA11090和HA11110的鉴定》一文中研究指出放线菌是自然界分布最广泛的微生物类群之一,其丰富的物种多样性、复杂的形态分化和特异的代谢途径,成为人们关注的对象。DNA-DNA杂交是分析DNA同源性的一种有效手段,是在16S rRNA基因序列相似较高的情况下确定新种的必须步骤。本研究选用标准菌株Isoptericola chiayiensis06182M-1T和Isoptericola halotolerans YIM70177T对DNA-DNA微孔板杂交法进行优化。分别对基因组DNA提取方法、超声剪切条件、固定DNA的微孔板干燥时间以及用于标记DNA的光敏生物素浓度进行改进。确定最佳的实验条件是：利用SDS-CTAB法提取放线菌基因组DNA；超声剪切DNA的条件为振幅45μm,脉宽2s,持续1min；固定DNA的微孔板干燥时间为15min；0.5mg/mL光敏生物素标记500μg/mL的DNA。确定该方法的稳定性后,分别对菌株HA1021、HA11015、HA11090、HA11097、HA11110、HA11164和HA11166与其参考模式菌的DNA同源性进行了分析。按照多相分类原则,从培养特征、生理生化特征、化学特征和分子特征对菌株HA11090和HA11110进行了鉴定：菌株HA11090为革兰氏阳性菌,好氧,生长温度范围14-43℃,pH范围6-10,耐盐度1%-5%。淀粉酶活性测试为阳性,能使牛奶凝固与胨化,产黑色素但不产生H2S；在纤维素上不生长,不能使明胶液化,不能使硝酸盐还原。主要脂肪酸为iso-C16:0、iso-C17:0和C15：0；主要的磷酸类脂为DPG、PE、PG、PI和GL。DNA(G+C)mol%为74.5%;16S rRNA基因序列与标准菌株Saccharopolyspora jiangxiensis W12T和Saccharopolyspora hirsuta subsp. Kobensis CGMCC4.1319T的同源性均为99.3%,其DNA-DNA杂交结果分别为82.0%、33.5%。鉴定菌株HA11090为江西糖多孢菌(Saccharopolyspora jiangxiensis)。菌株HA11110为革兰氏阳性菌,好氧,生长温度范围28-43℃,pH范围6-9,耐盐度1%-5%。淀粉酶活性测试为阳性,硝酸还原阳性,在纤维素上生长；不产生黑色素和H2S,不能使明胶液化,不能使牛奶凝固与胨化。主要脂肪酸为iso-C16:0、anteiso-C15:0和C14：0；主要的磷酸类脂为DPG、PE、PG、PIM、PC和PI。DNA(G+C)mol%为76.0%,16S rRNA基因序列与标准菌株Streptomycessanyensis GIMN4.003T显示最高同源性99.1%,其次是Streptomyces nanhaiensis SCSIO01248T和Streptomyces radiopugnans R97T,同源性均为98.8%,DNA-DNA杂交结果分别为58.4%、49.7%和47.2%。确定菌株HA11110是链霉菌属(Streptomyces)的一个新种,命名为Streptomyces mangrovei sp.nov.。(本文来源于《海南大学》期刊2013-06-01）
张文娟[2]（2011）在《基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白》一文中研究指出转录因子,也被称为序列特异性DNA结合蛋白,含有一个或多个DNA结合结构域(DBDs)。它们定位于细胞质中,在正常细胞功能状态下或受到特定因子诱导后,从细胞质进入细胞核,与基因组中的顺式作用元件诸如启动子、增强子、衰减子等发生特异性识别结合,组成基因转录机器,进而实现其调控基因表达的功能。因此,检测分析转录因子的表达及活化程度对我们了解细胞功能具有至关重要的作用。目前常用的检测技术主要建立在DNA和蛋白质相互作用这一层次,即运用含有顺式作用元件的DNA为探针,来分析转录因子的DNA结合活性。本课题“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白”技术巧妙的利用在高严谨度洗脱条件下转录因子蛋白对与之特异性结合的双链核酸序列的保护作用,将对转录因子的检测转换为对相应的特异核酸序列的检测。该方法不需要复杂的仪器、繁琐的操作步骤和特异性抗体就可以对转录因子的表达及活化程度进行定量研究,而且可在较短时间内完成对转录因子的检测。我们以检测转录因子c-Jun的活性为模型来对该检测方法进行评价,在较短的时间内该方法可以准确的检测到3.5ng的转录因子c-Jun纯蛋白和0.625ug的Hela细胞核粗提取物,具有较高的灵敏度。而且该检测方法可以用于任何一种转录因子的检测。鉴于“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法”的快速、简便、高灵敏度和选择性,该检测方法可以应用到需要对转录因子的DNA结合活性进行定量,有效,大规模检测的领域和科学研究中,诸如细胞分子生物学中对多种处理的刺激应答筛选方面,进化生物学研究方面,环境监测方面和药物筛选方面等等。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2011-10-01）
沈中阳,宋红丽,王建,张成德,郑虹[3]（2008）在《微孔板固相杂交法检测乙型肝炎病毒YMDD变异》一文中研究指出目的:建立一种快速、准确、简便的检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的方法。方法:对132份HBVDNA阳性血清标本进行基因测序检测,选取有YMDD变异和无YMDD变异血清标本各20份进行巢式聚合酶链反应,并采用微孔板固相杂交法检测,结果判定阴性和阳性,设直接测序方法为对照进行比较。结果:微孔板固相杂交法检测结果显示,入选的40份标本中19份有变异,21份无变异,其灵敏度为94.74%,特异度为90.48%。结论:微孔板固相杂交法检测乙型肝炎病毒快速、准确、简便,并且可同时检测野生株和变异株类型,尤其适用于大批量标本的检测,便于基层推广。(本文来源于《天津医药》期刊2008年03期）
韩霞[4]（2008）在《微孔板杂交法对肾综合征出血热早期诊断的应用研究》一文中研究指出目的:探索建立一种敏感特异的早期诊断肾综合征出血热的检测方法。方法:1从河北省各医院采集临床诊断为肾综合征出血热病人的急性期血清,用间接免疫荧光法(IFA)检测血清中IgG抗体;2用间接免疫荧光法检测到的阳性鼠肺标本经漂洗、研磨、过滤后制成病毒上清;3从病毒上清或IFA检测HFRS阳性的病人血清中提取汉坦病毒的总RNA,以RNA为模板,参考汉坦病毒的保守序列设计引物并进行逆转录获得相应的cDNA;4采用标记有生物素的上游引物经套式PCR进行扩增;5扩增结果通过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定或用标记地高辛的探针进行液相杂交,将杂交产物固定于包埋链酶亲和素的微孔板中,经酶标抗地高辛抗体结合,底物显色,对杂交结果进行鉴定。结果:1实验方法的建立1.1最佳反应浓度的确定参照有关文献,用方阵法来确定最佳反应条件。以病毒上清为标本,测定不同物质、不同浓度的OD值,计算出病毒上清OD值与空白对照OD值平均值的比值,取比值最大值时的条件作为最佳反应条件。最终确定的最佳反应条件是:链霉亲和素浓度为10 mg/L,探针浓度为1.5μmol/L,抗地高辛碱性磷酸酶稀释度为1:2500。1.2最佳反应时间的确定随温育时间不同,实验最后目测颜色也不同,在一定时间内随温育时间延长,目测颜色加深(由无色变为黄色),OD值增大。实验结果取值时,以阳性数值在0.8～2.0之间,空白对照OD值小于0.2,且阳性标本的OD值和空白对照的OD值的平均值的差较大为标准来确定温育时间的长短。此次实验温育时间是1小时。1.3酶联免疫吸附试验阴阳性界限的判定设置3孔空白对照作参照,计算空白对照OD值的平均值和标准差,截断值(Cut-off)是空白孔的平均值加3倍的标准差。标本的OD值大于截断值,则判为阳性;如标本的OD值小于截断值,可判为阴性;如标本的OD值在截断值附近,则重复做3孔,取3孔OD值的平均值最后确定结果。2方法学评价2.1敏感性当扩增产物稀释1000倍时,微孔板杂交法仍能判为阳性;而用凝胶电泳法检测,当扩增产物稀释10倍时,目的条带变得很弱,表明微孔板杂交法的敏感性为琼脂糖凝胶电泳法的100倍。2.2特异性取健康人血清20份,非HFRS的发热病人血清16份,乙肝病人血清2份进行同步扩增,凝胶电泳分析未见目的片断,扩增产物继续进行液相杂交,将杂交产物固定于包埋链酶亲和素的微孔板中,经酶标抗地高辛抗体结合,底物显色,对杂交结果进行鉴定,测定的OD值均小于Cut-off值,可判为阴性。结果表明,微孔板杂交法具有较高的特异性。2.3重复性同一份病毒上清,在同一时间进行4管的微孔板杂交实验,批内实验均值为1.214,标准差为0.076,变异系数为0.063;同一份病毒上清,在不同时间1天,2天,7天,1个月,3个月,6个月分别进行微孔板杂交实验,测定6次,批间实验均值1.484,标准差0.311,变异系数为0.210。OD值均大于Cut-off值,结果均可判为阳性,表明该方法具有较好的重复性。3检测方法的应用3.1血清标本IFA的检测2007年共收集河北省各医院临床诊断HFRS病例血清标本89份,经IFA检测血清中IgG抗体,其中阳性31份。3.2不同病程的HFRS患者血清标本琼脂糖凝胶电泳法检测取HFRS阳性血清31份,进行RNA的提取,分别用Ⅰ型、Ⅱ型特异型引物进行套式PCR。扩增产物用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测,结果有5份血清用Ⅱ型引物扩增出目的条带,阳性率为16.13%,用Ⅰ型特异型引物均未出现目的条带。3.3不同病程的HFRS患者血清标本微孔板杂交法检测对扩增产物用标记地高辛的探针进行液相杂交,然后将杂交产物固定于包埋链酶亲和素的微孔板中,经酶标抗地高辛抗体结合,底物显色,对杂交结果进行鉴定。共11份血清的OD值大于Cut-off值可判断为阳性,阳性率为38.71%。3.4不同病程的HFRS患者血清标本琼脂糖凝胶电泳法与微孔板杂交法检测结果比较微孔板杂交法检测阳性的11份血清均为用Ⅱ型引物扩增出的产物,其中电泳出现目的条带的5份血清均判为阳性,说明两种方法具有很好的一致性。且微孔板杂交法的阳性检出率高于琼脂糖电泳法。结论:1成功建立了用于HFRS患者早期诊断的敏感性的方法:微孔板杂交法。2微孔板杂交法检测HFRS病毒上清的敏感性是琼脂糖凝胶电泳法的100倍,该方法特异性高、重复性好。3应用微孔板杂交法检测HFRS患者的阳性率高于琼脂糖凝胶电泳法,特别是早期患者。4微孔板杂交法可用于HFRS的早期诊断,但需进一步完善。(本文来源于《河北医科大学》期刊2008-03-01）
雍刚,张燕飞,廖巫山,喻林冲,杨曦[5]（2007）在《多重聚合酶链反应微孔板杂交法在性病病原体检测中的应用》一文中研究指出目的探讨敏感、特异的同时能检测3种性病病原体的方法。方法采用3种不同的特异性引物与梅毒螺旋体(TP)、单纯疱疹病毒(HSV)和杜克雷杆菌(HD)DNA模板进行单一和多重聚合酶链反应(M-PCR)、微孔板杂交,用不同梯度的DNA模板及其它常见16种泌尿生殖道微生物标本验证其敏感性和特异性。结果3种不同的特异性引物在单一和M-PCR反应中均能特异地扩增,其扩增产物均能与相对应的特异探针杂交;单一和M-PCR微孔板杂交法均能检测出单个和3种病原体靶基因10个拷贝,而其它常见泌尿生殖道病原微生物交结果均为阴性。结论M-PCR微孔板杂交法能同时敏感、特异地检测TP、HSV和TP性病病原体。(本文来源于《实用医院临床杂志》期刊2007年05期）
王洪生,李晓杰,吴勤学,崔盘根,刘训荃[6]（2007）在《皮肤分枝杆菌感染微孔板反向杂交检测法的研究》一文中研究指出目的探讨微孔板反向分子杂交技术与PCR-ELISA相结合的"拟芯片"法检测和鉴定几种常见的皮肤分枝杆菌感染的方法。方法首先对5种分枝杆菌标准菌株(结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和偶遇分枝杆菌)16s rRNA DNA进行PCR扩增获得其PCR产物:其次对"拟芯片"法反应条件进行优化;并对其敏感性、特异性进行检测;再用建立的方法对9例临床分离株进行检测和鉴定。结果"拟芯片"法反应条件优化结果为:探针包被浓度为100 nmol/mL,探针包被时间为15 min,杂交的温度为55℃,杂交时间为45 min,辣根过氧化物酶标记的亲和素的稀释度为1:800;"拟芯片"法敏感性为1×10~1～1×10~2个菌细胞/mL;特异性较好,各菌探针与其他分枝杆菌间无交叉。结论"拟芯片"法是快速、敏感及特异的皮肤分枝杆菌感染诊断方法之一。(本文来源于《中华皮肤科杂志》期刊2007年06期）
张浩吉,谢明权,张健騑,蒲文珺,覃宗华[7]（2007）在《猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究》一文中研究指出以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5′端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5′端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×logx,其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E.wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。用建立的方法对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2007年02期）
宋玉国,张吉林,黄建文,毕胜利[8]（2006）在《微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因及其临床应用价值》一文中研究指出目的建立微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因的方法,研究其临床应用价值.方法在微孔板上包被HBV X基因片段的捕获探针;PCR扩增被检标本中目的片段,其引物用Bio-Ⅱ-dUTP修饰,在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色.结果该方法检测HBV X基因灵敏,特异;乙肝后肝细胞癌患者X基因阳性率明显高于急、慢性乙肝和肝纤维化组.结论检测HBV X基因对HCC具有辅助诊断价值.(本文来源于《北华大学学报(自然科学版)》期刊2006年06期）
宋玉国,张吉林,黄建文,熊英,毕胜利[9]（2006）在《微孔板杂交检测乙肝病毒X基因及其对肝细胞癌诊断价值的研究》一文中研究指出目的建立微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因的方法,研究其在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法在微孔板上包被HBV X基因片段的捕获探针;应用Bio-11-dUTP修饰的HBV X基因扩增引物,对待测标本进行PCR扩增,在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果成功建立了微孔板杂交技术检测HBV X基因的方法;乙肝病毒感染后肝细胞癌患者X基因阳性检出率明显高于慢性乙肝患者和肝纤维化患者(P<0.01)。结论检测HBV X基因对肝细胞癌具有辅助诊断价值。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2006年11期）
张浩吉,谢明权,张健騑,蒲文珺,覃宗华[10]（2006）在《猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究》一文中研究指出以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f／HM-r,在反向引物5’端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区设计种特异性寡核苷酸探针,探针5’端用地高辛标记,通过扩增产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合．然后与地高辛标记的E．suis种特异性探针杂交,再与辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体反应和相应的底物进行检测,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫法检测方法．通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值, 用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2．1012-0．4492×log(x),其相关系效R为0．977．显示对未知样品可进行定量检测．该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和牛的温氏附红细胞体无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍．应用实验建立的方法,对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性．(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集》期刊2006-08-01）
微孔板杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
转录因子,也被称为序列特异性DNA结合蛋白,含有一个或多个DNA结合结构域(DBDs)。它们定位于细胞质中,在正常细胞功能状态下或受到特定因子诱导后,从细胞质进入细胞核,与基因组中的顺式作用元件诸如启动子、增强子、衰减子等发生特异性识别结合,组成基因转录机器,进而实现其调控基因表达的功能。因此,检测分析转录因子的表达及活化程度对我们了解细胞功能具有至关重要的作用。目前常用的检测技术主要建立在DNA和蛋白质相互作用这一层次,即运用含有顺式作用元件的DNA为探针,来分析转录因子的DNA结合活性。本课题“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白”技术巧妙的利用在高严谨度洗脱条件下转录因子蛋白对与之特异性结合的双链核酸序列的保护作用,将对转录因子的检测转换为对相应的特异核酸序列的检测。该方法不需要复杂的仪器、繁琐的操作步骤和特异性抗体就可以对转录因子的表达及活化程度进行定量研究,而且可在较短时间内完成对转录因子的检测。我们以检测转录因子c-Jun的活性为模型来对该检测方法进行评价,在较短的时间内该方法可以准确的检测到3.5ng的转录因子c-Jun纯蛋白和0.625ug的Hela细胞核粗提取物,具有较高的灵敏度。而且该检测方法可以用于任何一种转录因子的检测。鉴于“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法”的快速、简便、高灵敏度和选择性,该检测方法可以应用到需要对转录因子的DNA结合活性进行定量,有效,大规模检测的领域和科学研究中,诸如细胞分子生物学中对多种处理的刺激应答筛选方面,进化生物学研究方面,环境监测方面和药物筛选方面等等。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
微孔板杂交论文参考文献
[1].王英.放线菌DNA-DNA微孔板杂交法优化及菌株HA11090和HA11110的鉴定[D].海南大学.2013
[2].张文娟.基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白[D].中国科学技术大学.2011
[3].沈中阳,宋红丽,王建,张成德,郑虹.微孔板固相杂交法检测乙型肝炎病毒YMDD变异[J].天津医药.2008
[4].韩霞.微孔板杂交法对肾综合征出血热早期诊断的应用研究[D].河北医科大学.2008
[5].雍刚,张燕飞,廖巫山,喻林冲,杨曦.多重聚合酶链反应微孔板杂交法在性病病原体检测中的应用[J].实用医院临床杂志.2007
[6].王洪生,李晓杰,吴勤学,崔盘根,刘训荃.皮肤分枝杆菌感染微孔板反向杂交检测法的研究[J].中华皮肤科杂志.2007
[7].张浩吉,谢明权,张健騑,蒲文珺,覃宗华.猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究[J].畜牧兽医学报.2007
[8].宋玉国,张吉林,黄建文,毕胜利.微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因及其临床应用价值[J].北华大学学报(自然科学版).2006
[9].宋玉国,张吉林,黄建文,熊英,毕胜利.微孔板杂交检测乙肝病毒X基因及其对肝细胞癌诊断价值的研究[J].中国实验诊断学.2006
[10].张浩吉,谢明权,张健騑,蒲文珺,覃宗华.猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集.2006
论文知识图
