导读:本文包含了绿荧光蛋白基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:黄绿荧光蛋白基因(EYFP),穿梭质粒,表达载体构建
绿荧光蛋白基因论文文献综述
于德水,高娃,沙长青,张淑梅,高继国[1]（2011）在《含黄绿荧光蛋白基因的穿梭质粒表达载体的构建》一文中研究指出质粒pHPS9为大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒表达载体,本项研究采用基因重组技术将黄绿荧光蛋白基因EYFP重组到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒表达载体pHPS9上,转化到感受态大肠杆菌中,获得含有pHPS9-EYFP质粒的阳性重组子。经双酶切和琼脂糖凝胶电泳验证,成功构建了能在枯草芽孢杆菌中表达的含有EYFP基因的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒表达载体,为生防菌株的基因标记提供了必要的材料。(本文来源于《黑龙江科学》期刊2011年05期）
徐引弟,郭爱珍,刘维红,贾爱卿,陈焕春[2]（2007）在《绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd~-缺失株平衡致死载体系统中的表达》一文中研究指出猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2007年04期）
苏涛[3]（2007）在《绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点》一文中研究指出目的:检测绿荧光蛋白基因(EGFP)质粒表达载体pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP对SACC-83的转染效率及瞬时表达,为应用这两种启动子诱导促凋亡基因转染SACC-83以发挥治疗作用提供依据。方法:实验于2004-07/2005-05在吉林大学口腔医学院口腔生物实验室完成。①在体外扩增并酶切鉴定pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP质粒。②以脂质体介导法转染pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP进入SACC-83细胞,根据质粒和脂质体比例不同分别转染6组,1组:1g/4L;2组:1g/8L;3组:1g/12L;4组:2g/4L;5组:2g/8L;6组:2g/12L。③应用荧光显微镜观察各组转染效率及瞬时表达情况,并进行统计学分析。结果:①质粒的检测及鉴定:质粒pACTERT-EGFP和pACCMV-EGFP经转化、酶切电泳证实,均出现约800bp的片段,与原作者提供的数据一致。②荧光显微镜观察:绿荧光蛋白在基因转染24h后开始表达,48～72h最高,1周后表达逐渐减弱。③荧光细胞数的统计学分析:对不同浓度质粒与脂质体转染72h的荧光细胞数进行方差分析,质粒与脂质体比例为1g/8L和2g/8L组荧光细胞数显着高于其余各组,其差异具有统计学意义,说明转染效率与脂质体和质粒的比例有关。结论:按照合适的质粒和脂质体比例,pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP转染SACC-83的效率可以达到30%,是转染SACC-83较为理想的瞬时表达载体。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2007年06期）
孙兆明,于士柱,张文治,康春生,周宏旭[4]（2006）在《生长抑制因子1基因核定位序列绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达》一文中研究指出目的构建p33ING1b核定位序列(nuclearlocatingsequence,NLS)绿荧光蛋白融合表达载体,将其转染到人胚肺纤维母细胞系MRC5,建立稳定表达该融合蛋白的细胞模型。方法应用逆转录PCR获得p33ING1b的NLS序列,然后将NLS序列插入绿荧光蛋白融合表达载体pEGFP C1的多克隆位点,构建pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,再用此载体转染MRC5细胞系,观察活细胞绿荧光蛋白的亚细胞定位。结果成功构建了pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,由该载体表达的绿荧光蛋白NLS肽段融合蛋白产生的绿色荧光信号全部定位于胞核部位,而空载体转染的细胞表达的绿色荧光蛋白,绿色荧光信号定位于细胞浆中。结论在活细胞内,生理情况下P33ING1b完全定位于细胞核,并且在其亚细胞定位的转运过程中,NLS肽段起着决定性作用。(本文来源于《中华医学遗传学杂志》期刊2006年03期）
李立[5]（2005）在《绿荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成内皮细胞的研究》一文中研究指出血管组织工程(vessel tissue engineering)研究的重点问题之一是种子细胞,种子细胞来源缺乏是组织工程中的一大难题。内皮细胞作为种子细胞在血管组织工程研究中具有重要作用,如何获取足量的内皮细胞是目前有待解决的问题。骨髓间充质干细胞因具有取材方便、对机体无害、自体移植不存在免疫排斥问题以及分化类型广泛等突出优势而有望成为血管组织工程中种子细胞的新来源。骨髓间充质干细胞的分化机制和诱导条件目前尚未阐明。多数观点认为,其与骨髓间充质干细胞所处的微环境密切相关,可能是微环境中所含的各种因子促成了骨髓间充质干细胞向该环境所需要的细胞或组织分化。已有研究表明高表达的内皮细胞生长因子和血流剪切力在骨髓间充质干细胞向内皮细胞的定向分化中均有显着作用,但如何采用合理有效的诱导方式有待于进一步的探讨。 目的 研究绿荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)体外分离培养及扩增能力,探讨其骨髓间充质干细胞在不同诱导条件和方式下向内皮细胞定向分化能力,为在体研究提供实验基础。 方法 (1)选用GFP小鼠作为研究对象,分离培养骨髓间充质干细胞,并在体外进行细胞的扩增和传代。(2)应用VEGF cDNA质粒转染和直接添加VEGF的方法对骨髓间充质干细胞进行诱导,并比较两者对GFP小鼠骨髓间充质干细胞分化为内皮细胞的作用,对其结果进行免疫荧光检测,计算阳性细胞比例,统计分析。选出高效的诱导方式。(3)分组诱导,实验分为3个实验组,即①切应力组:直接置于平行板流动腔内应用切应力(8dyn/cm~2)诱导24h;②转基因诱导静止组:将MSCs细胞行VEGF质粒转染诱导培养;③转基因诱导切应力组:将MSCs细胞行VEGF质粒转染诱导后置于平行板流动腔内在切应力条件下(8dyn/cm~2)诱导24h。之后再将各组细胞分别置于培养板培养1,3,5,7,10天,免疫荧光检测其分化效果。 结果 (1)MSCs每扩增一代,细胞数量增加4～8倍,7.0×10~3个原代MSCs体外扩增3代即获得1.4×10~8个细胞。连续传代10代后仍可保持旺盛的分裂能力,说明GFP小鼠MSCs具有良好的体外的培养扩增的能力。(2)直接添加浓度为25mg/l的VEGF(本文来源于《第叁军医大学》期刊2005-05-01）
孟和,陈学辉,王起山,崔芳岩,潘玉春[6]（2004）在《短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响》一文中研究指出RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显着水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显着 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显着。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA)特异性沉默基因表达的RNA干扰机制(本文来源于《动物学报》期刊2004年02期）
范立侨,张阳德,周少波,陈伟,刘勤[7]（2002）在《增强型绿荧光蛋白基因修饰永生化大鼠肝细胞的实验研究》一文中研究指出目的 :建立携带示踪标记的永生化大鼠肝细胞系。方法 :用脂质体转染法将增强型绿荧光蛋白 (EGFP)基因转入永生化大鼠肝细胞中。结果 :转染 3d后 ,在荧光显微镜下观察 ,对照组肝细胞不发荧光 ;实验组肝细胞发绿色荧光 ,转染率为 4 1% ,经G4 18筛选后得到稳定表达的肝细胞。结论 :应用基因转染技术将EGFP基因转入永生化大鼠肝细胞中并获得稳定表达。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2002年06期）
马立新,史巧娟,周俊初,陈华癸[8]（1999）在《以绿荧光蛋白基因为报告基因的广宿主启动子探针载体的构建和应用》一文中研究指出将以绿荧光蛋白基因（ ｇｆｐ） 的ｃＤＮＡ 为模板，用人工合成引物经ＰＣＲ 扩增获得的０－９ｋｂＤＮＡ 片段克隆到表达载体ｐＥＴ１１Ｃ 上构建成ｇｆｐ 表达载体ｐＨＮ１１５ 。从ｐＨＮ１１５ 上切下的不含启动子，但保留了ＳＤ 序列的ｇｆｐ 基因经克隆载体ＳＫ（ ＋ ） 和ｐＩＪ２９２５ 亚克隆后再克隆到广谱稳定性质粒ｐＴＲ１０２ 上构建成广谱、稳定、可视的启动子探针载体ｐＨＮ１２７ 。并用它从费氏中华根瘤菌ＨＮ０１ 的总ＤＮＡ 中成功地钓出组成型和诱导型表达的启动子。(本文来源于《微生物学报》期刊1999年05期）
刘建忠,李宁,熊远着,陈永福[9]（1998）在《绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用》一文中研究指出绿荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）是源于水母（Ｊｅｌｙｆｉｓｈ）、海笔（ＳｅａＰｅｎ，ＳｅａＰａｎｓｙ）等海洋无脊椎动物的一种蛋白质，这种蛋白质在体外经适当波长的光激发便可发出绿光，所发出的绿光用普通荧光显微镜或荧光激活细胞分拣器（ＦＡＣＳ）均可检测到。ＧＦＰ作为动、植物以及微生物基因工程研究上的一种选择标记具有检测灵敏度高，操作简便，对机体毒副作用小且不需要添加任何底物或辅助因子等优点，更重要的是检测ＧＦＰ无损于细胞或胚胎的完整性及活力。本文概括介绍ＧＦＰ的生化、发光光谱及遗传学特征及其在转基因动物研究上的应用。(本文来源于《生物工程进展》期刊1998年06期）
绿荧光蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
绿荧光蛋白基因论文参考文献
[1].于德水,高娃,沙长青,张淑梅,高继国.含黄绿荧光蛋白基因的穿梭质粒表达载体的构建[J].黑龙江科学.2011
[2].徐引弟,郭爱珍,刘维红,贾爱卿,陈焕春.绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd~-缺失株平衡致死载体系统中的表达[J].中国兽医学报.2007
[3].苏涛.绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点[J].中国组织工程研究与临床康复.2007
[4].孙兆明,于士柱,张文治,康春生,周宏旭.生长抑制因子1基因核定位序列绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达[J].中华医学遗传学杂志.2006
[5].李立.绿荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成内皮细胞的研究[D].第叁军医大学.2005
[6].孟和,陈学辉,王起山,崔芳岩,潘玉春.短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响[J].动物学报.2004
[7].范立侨,张阳德,周少波,陈伟,刘勤.增强型绿荧光蛋白基因修饰永生化大鼠肝细胞的实验研究[J].中国现代医学杂志.2002
[8].马立新,史巧娟,周俊初,陈华癸.以绿荧光蛋白基因为报告基因的广宿主启动子探针载体的构建和应用[J].微生物学报.1999
[9].刘建忠,李宁,熊远着,陈永福.绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用[J].生物工程进展.1998
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