导读:本文包含了猪肝细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,内皮,细胞,猪肝,肝细胞,干扰,层析。
猪肝细胞论文文献综述
王权成,陶开山,李霄,张玄,白鸽[1]（2018）在《原代猪肝细胞及主动脉内皮细胞的提取和培养》一文中研究指出目的建立有效高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞提取和培养的方法。为异种移植排斥反应的靶细胞——血管内皮细胞和肝细胞的研究提供基础。方法从野生巴马猪分离肝脏和主动脉血管,通过蠕动泵灌注Ⅱ型胶原酶消化的方法提取猪肝细胞,低速离心和差速贴壁法纯化肝细胞,过碘酸雪夫(PAS)染色、白蛋白与肝细胞核因子4α免疫荧光染色对原代肝细胞进行鉴定;利用Ⅰ型胶原酶血管管腔灌注消化法提取猪主动脉内皮细胞,并通过检测因子Ⅷ相关抗原vWF及内皮细胞吞噬乙酰化低密度脂蛋白的方法进行鉴定。结果通过本文方法提取到了大量高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞,猪肝细胞可以连续培养一周,内皮细胞可进行传代培养和冻存。两种细胞分别表达肝细胞和内皮细胞标志性蛋白。结论本研究提供的原代猪内皮细胞和肝细胞提取方法是制备大量高活力的原代内皮细胞及肝细胞的可靠方案。(本文来源于《实用器官移植电子杂志》期刊2018年05期）
吴光松,李平,顾丽菊,林鹏飞,任丽群[2]（2018）在《RNA干扰DGAT1和DGAT2基因在猪肝细胞中的表达》一文中研究指出为了探索DGAT1和DGAT2基因对宗地花猪脂肪沉积效率的影响,以宗地花猪为试验动物,针对基因DGAT1和DGAT2 mRNA序列设计6对shRNA序列,构建RNA干扰表达载体,将DGAT1和DGAT2的shRNA干扰载体分别转染至肝细胞中,采用荧光定量PCR筛选出最佳shRNA干扰载体,并测定最佳干扰组细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇含量变化。结果显示,所构建的6个shRNA干扰载体均能抑制肝细胞中目的基因的表达,肝细胞中DGAT1和DGAT2基因的最高抑制效率分别为78.45%和87.52%。转染干扰效率最佳的载体p GPU6/GFP/Neo-DGAT1-1和p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1后,肝细胞培养液中甘油叁酯和总胆固醇含量均降低,两者差异不显着(P>0.05)。转染p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1的肝细胞培养液中甘油叁酯含量显着低于空白组(P<0.05),DGAT1干扰载体的干扰效率略低于DGAT2干扰载体(P>0.05)。综上,抑制DGAT1和DGAT2基因的表达,可降低肝细胞培养液中甘油叁酯和总胆固醇含量。(本文来源于《河南农业科学》期刊2018年08期）
吴光松,燕志宏,林鹏飞,顾丽菊,李平[3]（2018）在《RNA干扰DGAT1和DGAT2在猪肝细胞和肌内前体脂肪细胞中表达的研究》一文中研究指出本研究旨在探索DGAT1和DGAT2基因表达对猪脂肪沉积效率的影响。以3日龄宗地花猪为实验动物,针对DGAT1和DGAT2基因m RNA序列设计6对sh RNA序列,构建RNA干扰表达载体,将DGAT1和DGAT2的sh RNA干扰载体分别转染至猪的肝细胞和肌内前体脂肪细胞中,采用RT-q PCR筛选出肝细胞和肌内前体脂肪细胞中的最佳sh RNA干扰载体,将最佳干扰载体再次转染肝细胞和肌内前体脂肪细胞,测定细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇含量变化。结果表明:所构建的干扰载体对肝细胞中DGAT1和DGAT2基因的最高抑制效率分别为78.45%和87.52%,对肌内前体脂肪细胞中DGAT1和DGAT2基因的最高抑制效率分别为82.24%和89.82%;肝细胞和肌内前体脂肪细胞培养液中甘油叁酯和总胆固醇的含量均降低,其中转染p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1实验组的肝细胞培养液中甘油叁酯含量显着低于空白组(P<0.05)。结果提示,抑制DGAT1和DGAT2基因的表达,可降低猪肝细胞和肌内前体脂肪细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇的含量。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年07期）
张萍[4]（2017）在《PGC-1α通过SIRT3和SIRT5调控猪肝细胞尿素循环的作用研究》一文中研究指出仔猪应激或饥饿状态下肝脏氨基酸分解产生的碳架进入糖异生途径,生成葡萄糖用于供能,而产生的氨氮进入尿素循环生成尿素。本试验旨在探究过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅助激活因子-1α(Peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)通过SIRT3和SIRT5对猪肝细胞尿素循环的调控作用。通过分离与培养猪原代肝细胞,研究胰高血糖素(Glucagon,Glu)对猪肝细胞PGC-1α和尿素循环的影响;建立PGC-1α过表达细胞模型,研究PGC-1α对SIRT3、SIRT5表达,以及鸟氨酸氨甲酰基转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OTC)、氨甲酰磷酸合成酶(Carbamoyl phosphate synthase I,CPS1)活性的作用。主要研究结果如下:(1)胰高血糖素对猪肝细胞PGC-1α和尿素循环的作用。利用两步胶原酶灌注法分离猪原代肝细胞。与无胰高血糖素组相比,胰高血糖素组的精氨酸琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase,ASS)、精氨酸裂解酶(Argininosuccinatelyase lyase,ASL)和精氨酸酶(Arginase,ARG)mRNA和蛋白水平显着升高(P<0.01);同时,CPS1和OTC的mRNA升高(P<0.05),但其蛋白水平没有显着(P>0.05)的变化;此外,糖异生作用的催化酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase,G6Pase)的mRNA和蛋白水平显着增高(P<0.01),以及显着诱导肝细胞中PGC-1α、SIRT3和SIRT5的表达(P<0.01)。与Ala组相比,Ala+Glu组葡糖糖和尿素浓度都显着增加(P<0.05)。与NH4Cl组相比,NH4Cl+Glu组葡萄糖浓度没有显着变化,但尿素浓度显着升高(P<0.05)。结果表明,胰高血糖素不仅促进丙氨酸碳架走向糖异生,还刺激尿素生成途径关键基因表达,促进丙氨酸氮源进入尿素循环生成尿素。(2)PGC-1α对肝细胞SIRT3、SIRT5表达及OTC、CPS1酶活的作用。PGC-1α表达质粒转染HepG2细胞,利用qPCR和western blot检测PGC-1α的表达,验证了过表达质粒显着提高PGC-1αmRNA水平和蛋白表达量(P<0.01)。与过表达对照组相比,PGC-1α过表达组SIRT3、SIRT5 mRNA和蛋白水平显着增加(P<0.01),但OTC和CPS1 mRNA和蛋白表达没有显着的变化(P>0.05);有趣的是,OTC和CPS1乙酰化水平显着降低,酶活性显着升高(P<0.01)。与Ala组相比,Ala+PGC-1α过表达组显著提高葡萄糖和尿素的浓度(P<0.05)。与NH4Cl组相比,NH4Cl+PGC-1α过表达组对葡萄糖浓度没有显著影响(P>0.05),但尿素浓度显着升高(P<0.05)。以上结果表明:PGC-1α调控丙氨酸碳架走向糖异生同时,通过SIRT3、SIRT5分别去乙酰化OTC和CPS1并激活其活性,诱导丙氨酸氮源进入尿素循环。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
顾丽菊[5]（2017）在《RNA干扰DGAT1和DGAT2基因在猪肝细胞中的表达研究》一文中研究指出二酰基甘油酰基转移酶(Diacylglycerol Acyltrabsferase,DGAT)是控制甘油叁酯合成的关键酶,分为两种亚型,编码这两种酶的基因分别是DGAT1和DGAT2。宗地花猪属于肉脂兼用型猪种,其脂肪沉积速率较快,皮脂率较高。本研究以宗地花猪为试验动物,针对DGAT1和DGAT2基因mRNA序列设计shRNA序列,构建RNA干扰表达载体,并体外分离培养原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞,将DGAT1和DGAT2的shRNA干扰载体分别转染至肝细胞和肌内前体脂肪细胞中,采用RT-qPCR分别检测shRNA干扰载体对原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞中DGAT1和DGAT2 mRNA表达的下调作用,研究DGAT1和DGAT2基因的功能以及其对脂肪沉积的影响作用,为宗地花猪选育过程中控制脂肪沉积提供一定的理论基础。主要研究结果如下:1.根据猪DGAT1和DGAT2基因的mRNA序列,分别设计3条shRNA序列和1条阴性对照序列,将shRNA转化为DNA双链序列后插入空载体pGPU6/GFP/Neo上,获得重组载体pGPU6/GFP/Neo-DGAT1-1、pGPU6/GFP/Neo-DGAT1-2、pGPU6/GFP/Neo-DGAT1-3、pGPU6/GFP/Neo-DGAT2-1、pGPU6/GFP/Neo-DGAT2-2、pGPU6/GFP/Neo-DGAT2-3和pGPU6/GFP/NeoNC。2.以3日龄宗地花猪为试验动物,分离其肝脏和背最长肌,利用Ⅳ胶原酶消化肝脏组织获得原代肝细胞;利用Ⅱ型胶原酶消化背最长肌,并结合差速贴壁法获得肌内前体脂肪细胞。分离出的肝细胞形态完整、密度大、活性高、贴壁良好,肌内前体脂肪细胞纯度较高,经IBMX、地塞米松、胰岛素诱导后可分化为成熟脂肪细胞,但其生长速度缓慢。3.将成功构建的pGPU6/GFP/Neo-DGAT1和pGPU6/GFP/Neo-DGAT2表达载体转染至猪的原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞中,利用qRT-PCR进行干扰效率检测。结果表明,所构建的6个shRNA干扰载体均能抑制肝细胞和肌内前体脂肪细胞中目的基因的表达,肝细胞中DGAT1和DGAT2基因的抑制效率最高分别为78.45%和87.52%,肌内前体脂肪细胞中DGAT1和DGAT2基因的抑制效率最高分别为82.24%和89.82%。4.利用干扰效率最高的shRNA载体分别转染肝细胞和肌内前体脂肪细胞,测定转染前后细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇含量变化,结果表明,抑制DGAT1和DGAT2基因的表达,可降低肝细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇的含量。(本文来源于《贵州大学》期刊2017-06-01）
蔡磊[6]（2017）在《基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝治疗食蟹猴急性肝衰竭的实验研究》一文中研究指出第一章食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立及评价目的:稳定的、重复性好的大动物急性肝衰竭(ALF)模型是人工肝研究不可或缺的平台。本章研究旨在建立一种药物和外科食蟹猴ALF模型。方法:1、16只食蟹猴随机分为4组(A,B,C,D),分别经外周静脉注射0.30,0.25,0.20 + 0.05(间隔 24 h),0.20 g/kg 的 D-氨基半乳糖(D-gal);给药后观察受试猴的临床表现,生存时间,生化、凝血、颅内压(ICP)和肝脏的病理变化;2、6只食蟹猴行袖套式插管门静脉-右肾静脉转流联合胆总管结扎、切断术(PRRS+CBDLT),术后观察动物的临床表现,生化、凝血和肝脏的病理和组织学变化。结果:1、给药后受试猴均出现不同程度的精神萎靡,进食减少、黄疽等表现,生存时间ABC叁组分别为56±8.7h、95±5.5h和99±2.2h,D组除1只136h死亡外,其余猴全部存活。血清肝酶、TBiL、Cr、BUN、血Amm等明显升高,ALB水平降低,PT明显延长,ICP增高等,病理学鉴定有明显肝细胞片状坏死、伴出血。2、术后实验猴血清AST、ALT、CK、LDH、ALP、TBiL、DBiL等明显升高,PT明显延长,ALB水平降低,术后第10天肝标本病理学和组织学检测出明显的肝细胞坏死、变性、凋亡等炎症反应。结论:成功构建了 D-gal诱导的药物性食蟹猴ALF模型和PRRS + CBDLT诱导的简化外科食蟹猴ALF模型。第二章基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝安全性及有效性的评估目的:以具有自主知识产权的往返翻转灌注型生物反应器为核心,装载微囊化的猪肝细胞,组建生物人工肝(BAL),通过对食蟹猴ALF模型的救治实验对其安全性和有效性进行评价,为其进一步临床试验奠定基础。方法:采用D-gal分次诱导建立食蟹猴药物性ALF模型,离体胶原酶两步灌流法分离西藏小型猪原代肝细胞,制备海藻酸钠-聚赖氨酸(APA)裹肝细胞微囊,装入往返翻转灌注型生物反应器中,构建BAL,用于ALF食蟹猴的治疗。15只ALF食蟹猴随机分为叁组:(1)ALF组(空白对照):模型猴仅观察不治疗;(2)BAL组:模型猴接受装载微囊化猪肝细胞的BAL治疗;(3)Sham组(设备对照):模型猴接入BAL系统体外循环6小时,反应器内装载不含细胞的APA空微囊。比较叁组实验猴治疗前后的生存时间、生化指标、PT及ICP等变化。结果:治疗过程中实验猴均耐受良好。与两个对照组相比,BAL组受试猴生存时间分别延长14小时、16小时。BAL可以显着降低受试猴血清肝酶、TBiL、血Amm等浓度和ICP,具有明显的肝支持作用。结论:基于微囊化猪肝细胞的生物人工肝系统能够改善ALF食蟹猴的血生化指标和ICP,延长生存时间。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-03-01）
魏静,石宁宁,冯冲,曾国敏,李西睿[7]（2016）在《CD31可作为分离纯化猪肝窦内皮细胞的标记分子》一文中研究指出血小板-内皮细胞粘附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)是内皮细胞表面一种重要的膜分子,常作为特异性标记鉴定内皮细胞。然而,CD31是否可作为纯化猪(Sus scrofa)肝窦内皮细胞(porcine liver sinusoidal endothelial cell,p LSEC)的特异性标记还有待验证。本实验通过CD31流式分选分离纯化p LSEC,观察分离后的p LSEC是否具有标志性的窗孔结构。以α-1,3-半乳糖苷转移酶基因敲除(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的五指山小型猪为研究材料,采用胶原酶原位肝脏灌注、离体消化,Percoll梯度离心,异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-CD31标记p LSEC进行流式分选。结果表明,分离得到的p LSEC在倒置显微镜下细胞呈典型的内皮细胞形态,铺路石样排列;通过透射电镜观察到细胞具有窗孔结构,通过环境扫描电镜观察到p LSEC与猪主动脉内皮细胞(porcine arterial endothelial cell,p AEC)细胞表面结构具有明显区别,p LSEC具有特殊的窗孔结构。利用实时荧光定量PCR检测p LSEC、p AEC和猪耳成纤维细胞(porcine ear fibroblast cell,p EFC)的CD31、细胞粘附因子(cell adhesion molecules,CD146)、血友病因子Ⅷ基因(hemophilia factorⅧ,Ⅷ-F)、血管性血友病因子基因(von willebrand factor,v WF)的表达。结果表明,p LSEC的CD31、CD146、Ⅷ-F和v WF表达量显着高于p AEC和p EFC。利用免疫荧光法检测到p LSEC具有摄取细胞膜红色荧光探针(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,Di I)标记的乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein,Ac-LDL)的内吞功能。总之,利用CD31分离纯化的p LSEC,具有典型窗孔结构和内吞功能,同时高表达CD146、Ⅷ-F和v WF等肝窦内皮细胞的标记分子,为进一步研究异种肝移植的血小板减少症的问题提供了良好的细胞材料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2016年08期）
肖启玲,李朋辉,闫秉芳,杨路,王喜亮[8]（2015）在《猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达》一文中研究指出为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,IPTG诱导6h后,PLE1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年04期）
陈奕明[9]（2015）在《异种脱细胞动脉基质修复胆道上皮及滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究》一文中研究指出第一部分人源脱细胞动脉基质的制备及其组织学特点目的：通过制备人源脱细胞动脉基质及胆道基质,观察其组织学特点并比较差异,筛选合适的组织工程胆道修复材料。方法：利用昆明医科大学附属甘美医院公民心脏死亡后器官捐献获得的脾动脉组织、部分腹主动脉和肝外胆道组织,使用1%十二烷基磺酸钠、1%聚乙二醇辛基苯基醚、0.25%胰酶进行脱细胞处理,使用苏木精—伊红染色观察人源动脉及肝外胆道组织脱细胞前、后组织学特点,使用扫描电子显微镜观察脱细胞后的动脉组织及肝外胆道组织的组织学特点。提取脱细胞前、后的动脉及肝外胆道组织的总DNA,分光光度计定量测定DNA含量,比较差异。结果：脱细胞后的动脉组织与肝外胆道组织苏木精—伊红染色未见明显的细胞残留,与未脱细胞的组织相比具有明显的组织学差异。扫描电子显微镜下,脱细胞后的动脉组织细胞外胶原纤维完整,分层清晰,具有较好的孔隙率,脱细胞后的脾动脉内膜厚度为114.83±21.67μm,脱细胞后的肝外胆道组织内膜厚度为19.87±4.52μm,二者比较差别具有统计学意义(P=0.000)。脱细胞后脾动脉及肝外胆道组织DNA含量明显降低,与未脱细胞处理的相应组织相比,差异均具有统计学意义(P=0.000,P=0.000)。结论：1%十二烷基磺酸钠、1%聚乙二醇辛基苯基醚、0.25%胰酶能够有效脱去人源动脉及肝外胆道组织中的细胞成分,并且保持了完好的细胞外结构,与脱细胞肝外胆道组织相比,脱细胞后的动脉组织具有更厚的内膜、更好的孔隙率,并且与未脱细胞的处理的组织相比,其DNA含量明显减少。由于动脉组织更易获取,且单一捐献者能获取的动脉组织较肝外胆道更为丰富,因此人源脱细胞动脉基质是理想的组织工程胆道的生物支架。第二部分大鼠肝卵圆细胞的分离、培养、鉴定及定向诱导分化为胆管上皮细胞目的：通过体外分离、培养并定向诱导大鼠肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞,获取用于组织工程研究的种子细胞。方法：使用2-乙酰氨基芴喂食+肝部分切除术方法建立大鼠卵圆细胞活化模型,利用蛋白酶E、胶原酶Ⅳ对活化后的大鼠肝脏进行消化,提取原代肝卵圆细胞,使用表皮生长因子、白血病抑制因子以及干细胞生长因子联合方案诱导大鼠肝卵圆细胞,在体外传代过程中,观察细胞形态变化,使用流式细胞检测不同代次细胞标志OV-6、CK-19,应用免疫荧光显微镜观察不同代次细胞OV-6、CK-19表达,应用实时荧光定量PCR检测不同代次细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA表达情况。结果：从大鼠肝脏中提取的原代细胞,形态符合肝卵圆细胞特点,OV-6阳性细胞比例为94.30±1.40%, CK-19阳性细胞比例为3.16±1.87%,通过体外诱导,细胞传至第6代时,OV-6阳性细胞比例为4.97±0.21%,CK-19阳性细胞比例为96.17±1.21%,与原代细胞相比,差异具有统计学意义。免疫荧光显微镜观察提示随着细胞代次的增加,OV-6阳性细胞表达逐渐减少,CK-19阳性表达细胞逐渐增多,并且CK-19阳性细胞形态变化符合肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化过程；QRT-PCR检测第2、8、10、12代细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA相对表达量,与第2代细胞相比,第12代细胞中CK-19、γ-GT、AFP、ALB mRNA相对表达量(RQ值)分别为5.3471±0.1057、3.4820±0.2393、0.1980±0.0131、0.6724±0.1700,差异具有统计学意义。结论：利用体外培养及表皮生长因子、干细胞生长因子、白血病抑制因子联合诱导方案,成功将OV-6阳性的大鼠肝卵圆细胞诱导分化为CK-19阳性的胆管上皮细胞,细胞形态及表面标志变化及相关基因表达符合肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化的特点。第叁部分胆管上皮细胞在体外培养条件下与脱细胞动脉基质的复合生长目的：通过将诱导后的胆管上皮细胞种植于制备的人源脱细胞动脉基质,在体外培养条件下,观察胆管上皮细胞与脱细胞动脉基质的相容性及胆管上皮细胞的生长情况。方法：将制备的脱细胞动脉基质修剪成大小1×1cm大小,培养基浸泡24小时后,将诱导后的胆管上皮细胞调整浓度为5×106/ml,将0.2ml细胞悬液接种于脱细胞动脉基质,37℃培养箱中静置4小时后加入培养基浸没脱细胞动脉基质。种植后4、6、8周,利用免疫荧光显微镜和扫描电子显微镜,观察胆管上皮细胞在脱细胞动脉基质上的生长情况。结果：种植后的第4周,可观察到胆管上皮细胞在脱细胞动脉基质上生长良好,CK-19阳性细胞尚未完全覆盖脱细胞动脉基质,种植后第8周,可见CK-19阳性胆管上皮细胞已完全覆盖1×1cm的脱细胞动脉基质,扫描电子显微镜下,生长良好的胆管上皮细胞已形成上皮样结构。结论：人源脱细胞动脉基质与大鼠来源的诱导胆管上皮细胞在体外培养条件下具有良好的相容性,脱细胞动脉基质能够为作为胆管上皮细胞体外生长的生物支架,胆管上皮细胞在体外培养条件下覆盖1×1cm的脱细胞动脉基质约需要8周的时间。第四部分异种脱细胞动脉基质修复滇南小耳猪肝外胆道缺损的实验研究目的：通过使用人源脱细胞动脉基质对滇南小耳猪肝外胆道缺损模型进行修复,观察异种脱细胞动脉基质对肝外胆道缺损的修复效果,并对修复的机制进行探讨。方法：10只封闭群滇南小耳猪随机分为A、B、C组,A组(n=4)利用异种脱细胞动脉基质对肝外胆道缺损进行修复,B组(n=4)进行胆道横断后端端吻合,C组(n=2)作为空白对照组。术后不同时点抽取静脉血检测血清碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、总胆红素水平并比较组间差异。术后12周处死实验动物,对修补后的肝外胆道进行取材,HE染色观察肝外胆道组织学特点,并应用免疫组化技术,观察修补后的肝外胆道中CK-19、TGF-β1、CTGF、VEGF表达,利用Image Pro Plus软件包,比较组间免疫组化切片累积光密度值差异,并利用扫描电子显微镜,观察修补肝外胆道缺损后脱细胞动脉基质黏膜面细胞生长情况。结果：A组实验动物中,1只实验动物于术后61天死亡,其余实验动物在12周内无死亡。A组实验动物血清总胆红素、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶与B、C组比较,差别有统计学意义。免疫组化提示A组肝外胆道中CK-19、TGF-β1、 CTGF、VEGF表达差别有统计学意义。修补肝外胆道12周后的脱细胞动脉基质中,有大量受体细胞长入,并且有少量新生血管,扫描电镜观察到脱细胞动脉基质内膜面有类似胆管上皮细胞生长,但结构不完整。结论：人源脱细胞动脉基质在修补滇南小耳猪肝外胆道缺损12周后,能够部分重建缺失的肝外胆道结构,并能部分重建血供,受体与异种脱细胞动脉基质相容性良好,胆管上皮细胞能够在脱细胞动脉基质表面部分再生。但脱细胞动脉基质修复后的肝外胆道与正常胆道仍有较大差异,仅能实现结构重建,若期望达到功能重建的目的,尚需进一步研究。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2015-01-01）
朱越,高万荣[10]（2014）在《基于全场光学相干层析术的猪肝组织亚细胞成像》一文中研究指出建立全场光学相干层析系统(OCT),可对生物细胞进行高分辨率层析成像。该系统基于Linnik干涉结构,采用低相干白光光源卤钨灯照明和大数值孔径的显微物镜,理论分辨率可达0.7μm×0.7μm(横向×轴向)。系统采用电荷耦合元件(CCD)采集数张样品和参考镜的干涉图,通过叁步移相算法获取层析图,最后合成叁维图像。与荧光标记细胞等其他生物组织成像的方法相比,全场OCT成本低廉、对细胞无损伤、分辨率高。该系统能够完成对洋葱表皮细胞和猪肝组织切片细胞等生物组织实现层析成像,且分辨率高、成本低、结构简单便于调节,为实现高分辨率光学相干层析成像提供了简单易行的方法。(本文来源于《科技导报》期刊2014年34期）
猪肝细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探索DGAT1和DGAT2基因对宗地花猪脂肪沉积效率的影响,以宗地花猪为试验动物,针对基因DGAT1和DGAT2 mRNA序列设计6对shRNA序列,构建RNA干扰表达载体,将DGAT1和DGAT2的shRNA干扰载体分别转染至肝细胞中,采用荧光定量PCR筛选出最佳shRNA干扰载体,并测定最佳干扰组细胞代谢液中甘油叁酯和总胆固醇含量变化。结果显示,所构建的6个shRNA干扰载体均能抑制肝细胞中目的基因的表达,肝细胞中DGAT1和DGAT2基因的最高抑制效率分别为78.45%和87.52%。转染干扰效率最佳的载体p GPU6/GFP/Neo-DGAT1-1和p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1后,肝细胞培养液中甘油叁酯和总胆固醇含量均降低,两者差异不显着(P>0.05)。转染p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1的肝细胞培养液中甘油叁酯含量显着低于空白组(P<0.05),DGAT1干扰载体的干扰效率略低于DGAT2干扰载体(P>0.05)。综上,抑制DGAT1和DGAT2基因的表达,可降低肝细胞培养液中甘油叁酯和总胆固醇含量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪肝细胞论文参考文献
[1].王权成,陶开山,李霄,张玄,白鸽.原代猪肝细胞及主动脉内皮细胞的提取和培养[J].实用器官移植电子杂志.2018
[2].吴光松,李平,顾丽菊,林鹏飞,任丽群.RNA干扰DGAT1和DGAT2基因在猪肝细胞中的表达[J].河南农业科学.2018
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