山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化

论文摘要

山葡萄苯丙胺酸解氨酶（PAL）是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到p MD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显著（P<0.05）,诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显著（P=0.015<0.05）,且IPTG浓度为0.6mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 重组质粒pET28a-PAL的构建
•     1.2.1 DNA样品提取、检测
•     1.2.2 原核表达载体的构建
•   1.3 诱导重组蛋白pET28a-PAL的单因素筛选
•   1.4 正交试验L9（34）对重组蛋白诱导及纯化
•   1.5 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 原核表达载体的构建与鉴定
•   2.2 原核表达条件的优化及重组蛋白的纯化
•   2.3 目的蛋白正交试验的优化及纯化
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰

关键词: 山葡萄,基因,正交设计,原核表达

来源: 安徽农业大学学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 园艺

单位: 延边大学农学院

基金: 国家自然科学基金(31260067),延边大学大学生创新创业训练资助项目共同资助

分类号: S663.1

DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20191122.023

页码: 888-893

总页数: 6

文件大小: 1021K

下载量: 442