核孔蛋白Seh1调控少突胶质细胞发育的机理研究

论文摘要

近来,大量研究表明核孔复合体在核质运输、DNA损伤修复、基因转录调控、神经系统发育调控等过程中扮演重要的角色。核孔复合体由30多种核孔蛋白组成,而且核孔蛋白参与细胞类型特异性基因的转录调控。研究表明跨膜核蛋白Nup153与转录因子Sox2相互作用,对成体的神经前体细胞（neural progenitor cells,NeuPCs）的干性维持以及调控神经元的分化具有重要的作用。而核孔蛋白在其他神经细胞,尤其是胶质细胞中发挥何种功能以及其作用机制还研究得不清楚。同时除了跨膜核孔蛋白,其他的核孔蛋白是否参与基因表达调控也是未知数。之前表型研究发现核孔蛋白Seh1条件型敲除小鼠与对照组小鼠相比:敲除小鼠在出生后十天左右开始出现体重减轻、个体瘦小、后肢瘫痪、癫痫、抽搐等异常现象,通过免疫组化证实髓鞘形成发生障碍。以上前期数据促使我们探究Seh1参与少突胶质细胞发育过程的机理。我们检测了原代少突胶质细胞中核孔蛋白的表达量,发现Seh1表达量特异性的随着少突胶质细胞的发育而上调。RNA水平证实Seh1敲除小鼠的髓鞘发育相关基因表达明显减少。通过免疫共沉淀发现Seh1与Olig2和Brd7发生相互作用,并且这种相互作用依赖于Seh1的完整性。双分子荧光互补实验表明,Seh1与Olig2的互作发生在核周附近。同时发现Olig2和Brd7也会发生相互作用,我们在Oli-neu细胞里敲低Sehl后检测到Olig2和Brd7的相互作用减弱,表明Olig2和Brd7的相互作用依赖于Seh1。接下来的功能研究表明Seh1对髓鞘相关基因表达的促进作用依赖于Olig2与Brd7。同时,荧光素酶活性检测实验表明Seh1的敲低破坏了Olig2对Cnp报告基因的转录活性。以上研究表明Sehl通过在核周与Olig2和Brd7组装成转录复合体,从而促进少突胶质细胞的发育。

论文目录

• 常用缩写词中英文对照表
• 摘要
• Abstract
• 1. 前言
•   1.1 少突胶质细胞的概述
•     1.1.1 少突胶质细胞的发育
•     1.1.2 少突胶质细胞的发育调控
•     1.1.3 少突胶质细胞功能
•       1.1.3.1 形成神经髓鞘
•       1.1.3.2 代谢支持
•     1.1.4 少突胶质细胞与神经退行性疾病
•   1.2 核孔复合体概述
•     1.2.1 核孔复合体的结构
•     1.2.2 核孔蛋白
•     1.2.3 核孔复合体的功能
•       1.2.3.1 核质运输
•       1.2.3.2 基因调控
•       1.2.3.3 染色质组装与DNA修复
•     1.2.4 核孔复合体与系统发育
• 2. 实验材料与方法
•   2.1 实验材料
•     2.1.1 实验动物
•     2.1.2 主要仪器
•     2.1.3 常用试剂
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 分子克隆相关实验
•       2.2.1.1 大肠杆菌感受态的制备
•       2.2.1.2 普通的PCR
•       2.2.1.3 DNA琼脂糖凝胶电泳
•       2.2.1.4 目的片段的回收
•       2.2.1.5 目的片段与载体的酶切
•       2.2.1.6 酶连以及转化
•       2.2.1.7 酶切验证
•       2.2.1.8 质粒大提
•     2.2.2 蛋白质相关实验
•       2.2.2.1 细胞蛋白样品的制备
•       2.2.2.2 蛋白浓度的标定
•       2.2.2.3 蛋白免疫印迹
•       2.2.2.4 免疫共沉淀实验
•     2.2.3 RNA相关实验
•       2.2.3.1 RNA的提取
•       2.2.3.2 RNA逆转录
•       2.2.3.3 实时荧光定量PCR （qRT-PCR）
•       2.2.3.4 shRNA表达载体的构建
•     2.2.4 细胞相关实验
•       2.2.4.1 培养基的配制
•       2.2.4.2 细胞的传代
•       2.2.4.3 细胞转染与病毒包装
•       2.2.4.4 病毒感染以及稳转株的获得
•       2.2.4.5 细胞染色
•       2.2.4.6 原代细胞的培养
•       2.2.4.7 荧光素酶活性检测
•       2.2.4.8 双分子荧光互补实验
• 3. 实验结果与分析
•   3.1 Seh1参与少突胶质细胞的发育调控
•   3.2 Seh1与Olig2和Brd7存在相互作用
•   3.3 Seh1与Olig2和Brd7的相互作用依赖Seh1的完整性
•   3.4 Seh1促进Olig2和Brd7的相互作用
•   3.5 Seh1促进髓鞘相关基因的表达依赖于Olig2与Brd7
•   3.6 Olig2促进髓鞘相关基因的表达依赖于Seh1
• 4. 讨论
• 5. 参考文献
• 6. 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 邵丹丹

导师: 张亮

关键词: 少突胶质细胞

来源: 厦门大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 厦门大学

分类号: Q421

总页数: 75

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