人源化AGR2单抗在不同宿主细胞中表达的比较

论文摘要

Anterior gradient-2（AGR2）基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞与CHO细胞这两种最常用的表达系统表达rhAGR2-mAb,获得了纯度为95%的抗体蛋白,同时比较了不同宿主细胞生产的蛋白在分子量、等电点、糖型等方面的差异,发现在分子量、等电点和糖基化的糖型种类方面,两种宿主细胞表达的rhAGR2-mAb并无明显差异,但两者表达的产物在糖型比例上有较大不同,这也导致了两种表达系统所表达的蛋白与抗原AGR2的亲和力略有不同,为rhAGR2-mAb将来选择合适的蛋白瞬时表达系统和稳定生产系统提供依据.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 瞬时转染[23-24]
•     1.2.2 rhAGR2-mAb的纯化[23-24]
•     1.2.3 rhAGR2-mAb的SEC-HPLC纯度测定
•     1.2.4 rhAGR2-mAb的等电点测定
•     1.2.5 rhAGR2-mAb的糖基化测定
•     1.2.6 rhAGR2-mAb的亲和力比较
• 2 结果
•   2.1 质粒的抽提与鉴定
•   2.2 rhAGR2-mAb的表达和纯化
•   2.3 不同表达系统表达rhAGR2-mAb的分子量比较
•   2.4 不同表达系统表达rhAGR2-mAb的等电点比较
•   2.5 不同表达系统表达rhAGR2-mAb的糖基化比较
•   2.6 rhAGR2-mAb的亲和力比较
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢秋玲,汤杰,黄嘉慧,卢加,刘晨雪璇

关键词: 人源化,单克隆抗体,瞬时基因表达,细胞

来源: 华南理工大学学报(自然科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,药学

单位: 暨南大学生命科学技术学院,基因工程药物国家工程研究中心,韶关学院英东生命科学学院

基金: 广东省重大科技专项(2012A080202014),广东省科技计划项目(2015A020211016)~~

分类号: Q78;R91

页码: 142-148

总页数: 7

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