导读:本文包含了随机引物论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:引物,特异性,杆菌,结核,分支,黄热病,片段。
随机引物论文文献综述
王利静[1]（2016）在《基于随机引物PCR的出血热病毒高通量检测方法的初步研究》一文中研究指出病毒性出血热(Viral hemorrhagic fevers, VHFs)是一组临床症状以发热常伴出血为主要特征的急性病毒性传染病,早期临床表现无特异性,出血可发生在皮下、内脏、体腔等部位,可出现休克,多器官衰竭,临床过程凶险,病死率高,最高可达90%。随着经济全球化进程的不断深入,人员和物资交流日渐频繁,媒介分布的地理界限被不断打破,输入引发的疫情暴发的风险显着增加。且随着全球变暖,生态环境遭到不同程度的破坏,新发传染病和新病毒也不断被发现。建立快速、灵敏特异、高通量的出血热病毒实验室检测方法并及时对毒株进行测序对临床诊治及流行病学疫情调查具有重要意义。本研究就快速准确高通量检测出血热病毒展开初步研究。一、基于磁珠法的出血热病毒核酸纯化富集方法的研究在对样本进行基于随机扩增等非特异扩增的检测或是测序的过程中,常常会因为样本中非目的核酸即背景核酸含量过高而影响检测及测序效果。非特异扩增前对样本进行纯化富集,会降低样本中背景噪音,使检测结果更为灵敏准确。出于此目的,对样本进行前期处理,即基于磁珠法的出血热病毒核酸纯化富集方法的研究。本研究分别以黄病毒属,汉坦病毒属,白蛉病毒属中的毒株为研究对象,比对各属基因组保守区,并设计出特异性杂交探针,进行5’端生物素修饰,将其与链霉亲和素修饰磁珠共价结合,以纯化样本中各属内出血热病毒核酸。并通过比较特异性纯化前后样本中有效核酸成分所占比例的大小及二代测序中有效reads数来比较纯化富集效果。结果显示叁个属的特异性杂交探针能够很好捕获各属中出血热病毒。毒株模拟样本结果显示黄病毒属中登革病毒四个亚型纯化后相较于纯化前样本中有效核酸质量比例的比值分别为2.3,2.6,2.4,8.3；黄病毒纯化后相较于纯化前有效成分比例的比值为8.5；汉坦病毒属汉滩病毒,汉城病毒,普马拉病毒纯化后相较于纯化前有效核酸成分比例的比值分别为1.5,4.0,1.9；同理白蛉病毒属中SFTSV纯化后相较于纯化前有效成分比例的比值为1.5。故纯化后的有效核酸成分相较于纯化前的核酸有效成分比例的比值均大于1。且二代测序中,cDNA文库制备时有效数据比例全转录组扩增(WTA)前或后进行特异性富集纯化均较不开展富集纯化有显着改善,有效数据比例分别为5.57%,6.39%,2.71%,差别具有显着性(χ2=9799.8,P<0.001)。对WTA前或后进行特异性富集纯化对测序结果有效数据影响进行比较分析时发现,扩增后进行纯化优于扩增前(P<0.001)。在叁个病毒含量不等的SFTSV临床血清样本的测量中,病毒含量较高的17号样本(CT值=20),特异性探针纯化的样本相较于不纯化样本有效数据的比例高达74.42%,50.9%,且WTA前纯化处理效果更好一些。而在病毒含量相对较低的27,36号临床样本中,纯化处理的样本虽较不纯化样本有效数据的比例有一定的提高,但是由于本身样本中目的核酸含量比较低,故纯化处理过程中在降低背景核酸的同时,目的核酸也会遭到不同程度的损失,故效果不是很明显。且含量相对较低的样本WTA后对其进行纯化富集效果较好。综上可知基于核酸杂交的病毒基因组特异性富集纯化方法可成功捕捉到属内病毒,提高核酸有效成分的含量,降低无义核酸成分即样本背景,有效降低二代测序中背景值,提高测序效率,进而起到纯化富集的作用。二、随机PCR扩增与液相悬浮芯片技术相结合的出血热病毒高通量检测技术研究为更好的应对突发疫情病原体的检测,快速准确高通量对病原体进行检测筛查显得尤为重要。本研究将随机PCR与tem-PCR相结合对样本进行非特异扩增,进而应用悬浮芯片技术对产物进行高通量的检测。该方法打破依赖特异性引物扩增特异性核酸片段的局限,其对模板核酸进行随机扩增,进而在扩增出的大量的大小不等,浓度不等的核酸片段中应用特异性检测探针去捕捉检测扩增出的片段。进而提高一次性检测病毒的数量,理论上一次能够同时对100种不同的病原体进行检测,大大减少筛查时间,提高检测效率。为缩短应对突发病例及疫情的处置时间提供实验室检测技术。结果显示在扩增中存在较强非特异交叉反应,仍需进一步优化研究。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2016-06-30）
田茵,刘翌,王飞,孙福军,张绍福[2]（2016）在《随机引物在黄热病毒核酸检测中的应用》一文中研究指出目的将随机引物应用于黄热病毒核酸检测,为口岸快速准确地检测黄热病毒提供技术支持。方法采用随机引物和特异性引物进行逆转录,分别用自行设计的引物、探针和参考文献的引物、探针,用实时荧光PCR方法对6份黄热病毒阳性尿液样本进行黄热病毒核酸检测,并对检测结果进行比较。结果与特异性引物逆转录相比,随机引物逆转录的实时荧光PCR Ct值差别不显着(F值=0.11,P>0.05)。结论随机引物可直接应用于黄热病毒检测,也可在口岸传染病监测中发挥其他作用。(本文来源于《中国国境卫生检疫杂志》期刊2016年03期）
王昱,叶自霞,聂福平,肖进文,杨俊[3]（2014）在《应用随机引物法鉴定伪劣羊肉卷中的肉种成分》一文中研究指出为鉴定市场抽检的来源不明的伪劣"羊肉卷"中的肉种成分,采用随机引物法,PCR扩增肉制品DNA,将阳性产物回收、克隆并测序,然后根据序列信息设计特异性的荧光定量引物进行再次鉴定。结果表明,获得了针对伪劣"羊肉卷"的阳性克隆,序列比对表明样品中含有北极狐或火狐肉成分,经特异性的荧光定量PCR确认样品为火狐肉。结果表明,可以应用随机引物PCR鉴定伪劣"羊肉卷"中的肉种成分。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2014年10期）
沈学怀,张丹俊,潘孝成,赵瑞宏,胡小苗[4]（2014）在《随机引物PCR技术及其在动物医学中应用的研究进展》一文中研究指出随机引物PCR技术(AP-PCR)是一种建立在PCR基础上的新的DNA多态性检测技术,其特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组DNA片段,在无需预知研究对象的情况下对其进行基因特征的分析,具有简便、高效、实用等优点,现已广泛应用于分子生物学的多个领域。文章主要对AP-PCR技术的原理、优缺点、研究近况及其在动物医学中的应用等作一综述。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年10期）
黄威,邢益平,严有德,严玉娟,艾月梅[5]（2014）在《一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法》一文中研究指出目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物。用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱。并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较。结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99%)。随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100%、90%和80%。常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA。结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100%,且灵敏度优于常规real-time PCR法。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2014年29期）
施云燕,黄海飞,朱振洪[6]（2014）在《贝母类药材随机引物扩增多态性分析研究》一文中研究指出目的探讨贝母类药材不同居群间遗传变异大小,为贝母的种质鉴定及遗传多样性分析提供依据。方法运用随机扩增多态性DNA技术,对浙江象山、浙江磐安、吉林通化、新疆伊犁四个不同居群贝母的基因组DNA进行随机扩增,利用NTsys2.10e软件计算遗传相似性,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图。结果共筛选了70个随机引物,从中挑选出13条多态性强、重复性好的引物,总共检测出152个位点,多态性位点96个,多态位点比率为63.2%,UPGMA聚类可以将不同来源的贝母很好地区分开来。结论不同居群间的贝母遗传差异与地域差异有明显关系,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的贝母。(本文来源于《现代中药研究与实践》期刊2014年04期）
黄威,邢益平,严友德,严玉娟,艾月梅[7]（2014）在《一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法》一文中研究指出目的针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证(本文来源于《中华医学会第十叁次全国感染病学术会议论文汇编》期刊2014-06-13）
黄威[8]（2014）在《随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌》一文中研究指出背景：近年来全球结核病(TB)的发病率呈逐年上升与蔓延趋势,我国大部分结核病的实验室诊断仍采用的是细菌学涂片、培养,该方法敏感性低,耗时长。血清学抗体检测被用作一项常规的辅助诊断,但在大样本的研究显示结核病患者体内的血清学抗体检测存在着较多的假阳性和假阴性。分子生物学检测中尤其是近几十年来如巢式PCR, real-time PCR,环介导的恒温扩增及Xpert MTB/RIF等新技术的运用,从很大程度上提高了结核病的诊断效率,但仍然不能完全令人满意,尤其是在小儿结核,痰涂阴性的结核,肺外结核以及HIV共感染的结核,其敏感性较低,约为34.9%-85.7%。目的：鉴于结核性疾病当前实验室诊断的局限性,本文探索一种灵敏度更高、且特异性强的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法：选取10株江苏地区流行的结核分枝杆菌(MTB)的菌株(2×105-2×106个/m1)提取DNA,并按1：10进行梯度稀释,稀释成不同倍数的DNA作为随机引物的模板评价新方法的灵敏性,选取其他常见菌株及部分分枝杆菌菌株作为对照组评价该方法的特异性。先从国内、外的文献中找出12条用于研究MTB DNA多态性的随机引物,并进行单个引物的RAPD(随机扩增多态性DNA技术)扩增,RAPD产物用2%的琼脂糖凝胶电泳进行分离。在紫外光下,将重复性好、亮度高且清晰可辨条带进行割胶纯化,并分别通过TA克隆到载体质粒pEASYTM-T5Zero,测序,通过BLAST-nr验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的序列在其内部设计、合成一对特异性引物(随机引物与相应特异性引物合称为该引物组)。用特异性引物扩增对应的RAPD产物(RAPD产物做10倍稀释),获得MTB特异性条带。同时用本方法与普通PCR(单用引物组中的特异性引物进行MTB DNA扩增)和市售的TBDNA检测试剂盒(Real-Time PCR法)进行灵敏度的比较。结果：1.经BLAST-nr比对,随机引物IS986F, S535所扩增出的条带及IS986R扩增的第2条条带与MTB DNA具有高度的同源性(99%)。2.随机引物IS986F联合其特异性引物(简称引物IS986F组)可以检测到105倍稀释的MTB DNA,其特异度为100%；引物S535组也可以检测到105倍稀释的MTB DNA,但特异度为90.0%；引物IS986R组只能检测到103倍稀释的MTB DNA,特异度为80.0%。3.普通PCR仅能检测出10-100倍稀释的MTB DNA。4.市售的TB DNA检测试剂盒(Real-Time PCR法)检测下限为104倍稀释的MTB DNA。结论：本研究通过RAPD联合特异性DNA片段检测MTB,发现引物IS986F组在灵敏度和特异度上均优于其它两组,且灵敏度优于普通PCR(103-104倍)、Real-Time PCR的检测(约10倍),故可以用于结核疾病的病原学检测。(本文来源于《南京医科大学》期刊2014-03-01）
刘奇才,欧启水,刘爱林,翁少煌,郜峰[9]（2012）在《随机引物PCR与纳米电化学传感器联用技术用于绘制胰腺癌基因指纹图谱》一文中研究指出目的考察随机引物PCR与基于碳纳米管修饰电极/鸟嘌呤(dGTP)电化学的传感器联用技术用于绘制胰腺癌基因指纹图谱以及筛查差异基因的可行性。方法研究dGTP在碳纳米管修饰玻碳电极上的电化学行为,并建立检测dGTP的新方法。在相同条件下,应用随机引物PCR法扩增正常对照和胰腺癌患者外周血DNA样本,利用检测dGTP新方法检测PCR反应体系中剩余的(本文来源于《中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编》期刊2012-05-03）
邓紫宇,张照远,项东云,唐庆兰,陈健波[10]（2012）在《桉树随机引物PCR反应体系优化研究》一文中研究指出以桉树DNA为模板,采用单因素试验方法研究dNTP浓度、Mg2+浓度及退火温度对桉树随机引物PCR反应结果的影响。试验结果表明,最优的反应体系为:20μL的PCR反应体积中,10×Buffer2.0μL,Mg2+(25 mmol/L)1.28μL,dNTP(10 mmol/L)0.4μL,Primer(10μmol/L)2.0μL,Taq(5 U/μL)0.2μL,DNA2.0μL;最优扩增程序:94℃预变性2 min,然后进行35个循环(94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min),最后72℃延伸10 min。(本文来源于《广西林业科学》期刊2012年01期）
随机引物论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的将随机引物应用于黄热病毒核酸检测,为口岸快速准确地检测黄热病毒提供技术支持。方法采用随机引物和特异性引物进行逆转录,分别用自行设计的引物、探针和参考文献的引物、探针,用实时荧光PCR方法对6份黄热病毒阳性尿液样本进行黄热病毒核酸检测,并对检测结果进行比较。结果与特异性引物逆转录相比,随机引物逆转录的实时荧光PCR Ct值差别不显着(F值=0.11,P>0.05)。结论随机引物可直接应用于黄热病毒检测,也可在口岸传染病监测中发挥其他作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
随机引物论文参考文献
[1].王利静.基于随机引物PCR的出血热病毒高通量检测方法的初步研究[D].中国疾病预防控制中心.2016
[2].田茵,刘翌,王飞,孙福军,张绍福.随机引物在黄热病毒核酸检测中的应用[J].中国国境卫生检疫杂志.2016
[3].王昱,叶自霞,聂福平,肖进文,杨俊.应用随机引物法鉴定伪劣羊肉卷中的肉种成分[J].中国动物检疫.2014
[4].沈学怀,张丹俊,潘孝成,赵瑞宏,胡小苗.随机引物PCR技术及其在动物医学中应用的研究进展[J].中国畜牧兽医.2014
[5].黄威,邢益平,严有德,严玉娟,艾月梅.一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法[J].现代生物医学进展.2014
[6].施云燕,黄海飞,朱振洪.贝母类药材随机引物扩增多态性分析研究[J].现代中药研究与实践.2014
[7].黄威,邢益平,严友德,严玉娟,艾月梅.一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法[C].中华医学会第十叁次全国感染病学术会议论文汇编.2014
[8].黄威.随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌[D].南京医科大学.2014
[9].刘奇才,欧启水,刘爱林,翁少煌,郜峰.随机引物PCR与纳米电化学传感器联用技术用于绘制胰腺癌基因指纹图谱[C].中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编.2012
[10].邓紫宇,张照远,项东云,唐庆兰,陈健波.桉树随机引物PCR反应体系优化研究[J].广西林业科学.2012
论文知识图
