N-糖基化对黑曲霉AnLPMO15g与纤维素酶协同作用的影响

论文摘要

裂解性多糖单加氧酶（LPMOs）辅助活性9家族蛋白（AA9）可有效促进纤维素酶降解纤维素。为研究N-糖基化对来源于黑曲霉的AA9蛋白AnLPMO15g与纤维素酶协同性的影响,采用定点突变的方法,将An LPMO15g中3个N-糖基化修饰位点（151、334、385）上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果表明,作用于微晶纤维素时,突变体N-151产生的还原糖量比AnLPMO15g提高了10.34%,突变体N-385产生的还原糖量降低了12.73%,突变体N-334变化不显著;作用于稻草粉时,3个突变体产生的还原糖量均高于An LPMO15g,提高幅度为7%～19%。当与纤维素酶共同作用于微晶纤维素时,只有突变体N-334产生的还原糖量较AnLPMO15g显著提高了38.89%;共同作用于稻草粉时,突变体N-334和N-385产生的还原糖量略高于AnLPMO15g。由此可见,N-糖基化修饰对AnLPMO15g及其与纤维素酶协同降解作用均有不同程度的影响,其中N-151和N-385位点的糖基化修饰对提高An LPMO15g与纤维素酶协同降解活性尤为重要。

论文目录

• 1 前言
• 2 材料与方法
•   2.1 菌株和质粒
•   2.2 试剂和仪器
•   2.3 实验方法
•     2.3.1 N-糖基化位点的预测
•     2.3.2 去N-糖基化分析
•     2.3.3 突变重组质粒的构建
•     2.3.4 毕赤酵母重组菌株的构建与筛选
•     2.3.5 蛋白的诱导表达
•     2.3.6 An LPMO15g及其突变体蛋白的纯化
•     2.3.7 N-糖基化位点突变对An LPMO15g蛋白与纤维素酶协同性的影响
•     2.3.8 协同度分析
•   2.4 还原糖的测定
• 3 结果与讨论
•   3.1 糖基化位点的预测
•   3.2 突变载体的构建与验证
•     3.2.1 N-糖基化位点突变的An15g04900基因的获取
•     3.2.2 重组质粒的验证
•     3.2.3 毕赤酵母的转化与验证
•     3.2.4 重组毕赤酵母的诱导表达
•   3.3 N-糖基化位点对An LPMO15g蛋白与纤维素酶协同性的影响
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马立娟,佟文哲,杜丽平,崔馨予,马清,肖冬光

关键词: 糖基化,纤维素酶,定点突变,协同性

来源: 高校化学工程学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 天津科技大学生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31770625),天津市自然科学基金重点项目(16JCZDJC31880)

分类号: TQ925

页码: 1148-1155

总页数: 8

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