导读:本文包含了亲和层析柱论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:层析,亲和,免疫,毒素,抗体,单克隆抗体,黄曲霉。
亲和层析柱论文文献综述
李坤,詹少德,吴志华,陈红兵[1]（2016）在《利用自制免疫亲和层析柱纯化抗Ara h 2抗体》一文中研究指出目的 :近年来,抗体已经被广泛应用于体内/外的科学研究中,不仅应用于细胞内/外蛋白的识别与定位,在以抗原抗体特异性反应作为理论基础的免疫亲和分离或检测分析中,高效价的抗体更是一种不可或缺的重要工具。本研究利用自制免疫亲和层析柱(Immunoaffinity Chromatography Columns,IAC)纯化抗Ara h 2的多克隆抗体。方法 :首先利用离子交换层析柱从花生中纯化得到Ara h 2蛋白,以此作为抗原,采用多点皮下注射的方式免疫日本大耳兔,获得高效价血清备用。然后利用纯化的Ara h 2制备免疫亲和层析柱,并对多克隆抗体进行纯化,并与商业购买的已被成功用于纯化多克隆抗体的抗体亲和免疫球蛋白G琼脂糖高速流动树脂(Mab Affinity Protein G Agarose High Flow Resin,MPG)进行比较。结果 :尽管自制免疫亲和层析柱的柱容量只有商购MPG柱的40%左右,但在纯化效率上,自制柱的纯化因子为126.6,高于MPG的77.3。结论 :实验数据表明,与商购MPG柱相比,自制免疫亲和层析柱纯化出来的目标抗体效价较高。此外,与商购MPG柱相比,自制柱的制备成本低廉,可广泛适用于实验室抗体纯化工作。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集》期刊2016-11-04）
郑珩,劳兴珍,周亚丽,顾觉奋[2]（2016）在《双Z结构域亲和层析柱的制备及稳定性研究》一文中研究指出治疗性抗体是当前生物制药中发展最快、成果最显着的领域之一,国际上批准的治疗性抗体已经有24种,占生物技术药物产业份额的1/4~1/3~([1]),抗体的纯化和制备方法也因此受到了广泛的关注。其中,抗体纯化最常用的方法之一是固定蛋白质A的亲和层析法~([2]),蛋白质A(SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁的组成成分,它与抗体有很强的结合能力。但由于天然SPA提取及纯化较困难,使得相应的亲和层析柱制备成本很高,提高了抗体纯化的成本。Z(本文来源于《中国化学会第18届反应性高分子学术研讨会论文集》期刊2016-07-29）
曾鹏[3]（2016）在《呋喃唑酮代谢物AOZ免疫磁珠、免疫亲和层析柱的研制》一文中研究指出兽药在现代养殖业中发挥着十分重要的作用,但近年来,一些养殖人员或企业为了节约成本、获得较高抗菌效果而不顾国家规定滥用抗菌药物甚至使用禁用兽药,造成了动物源性食品中兽药的残留,严重威胁人类健康和自然环境。虽然硝基吱喃类药物属于广谱抗菌药,对大多数革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有抑菌、杀菌作用,但研究发现该类药物均具有致癌、致突变、致畸毒性,因此各国已将其列为禁用兽药。呋喃唑酮是硝基呋喃类药物中常用的一种,其代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)具有强烈的致癌、致突变作用,目前国内外用于检测呋喃唑酮残留的方法多为仪器分析法和免疫分析法。为了提高灵敏度、减少基质干扰、缩短样品前处理时间,本试验主要通过制备AOZ单克隆抗体,与纳米磁珠、琼脂糖凝胶偶联,制成AOZ免疫磁珠、AOZ免疫亲和层析柱,并优化各自吸附、洗脱条件,最终应用于鸡肉样品前处理中富集净化AOZ的衍生物3-[[(4-硝基苯基)-亚甲基]-氨基]-2-恶唑烷酮(NPAOZ),经间接竞争ELISA测定最低检测限和回收率以确定免疫磁珠和免疫亲和层析柱的使用性能。试验Ⅰ AOZ单克隆抗体的制备及鉴定采用活化酯法将CPAOZ与BSA偶联制成免疫原免疫小鼠,第四次免疫后取最佳免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA和间接竞争ELISA方法筛选出分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,并进行亚克隆与冻存。于小鼠腹腔接种细胞后,收集的腹水即为AOZ单克隆抗体,对其进行特性分析得出:该AOZ单抗的效价为1:100万,对NPAOZ的半数抑制浓度为0.31 ng/mL;利用间接竞争ELISA法对四种硝基呋喃类药物代谢物的衍生物(NPAOZ、NPAMOZ、NPAHD、NPSEM)以及对硝基苯甲醛、对醛基苯甲酸进行交叉抑制试验发现,AOZ单抗只与NPAOZ有反应,而与其它药物均无交叉反应。表明本试验制得的AOZ单克隆抗体具有高效价、高灵敏度、高特异性的特点。试验Ⅱ AOZ 免疫磁珠的研制先将纳米磁珠经EDC和NHS活化,并与AOZ单克隆抗体偶联制成AOZ免疫磁珠,对该磁珠的上样、洗脱条件进行优化,最终应用于鸡肉样品前处理中,并利用间接竞争ELISA法进行加标回收试验。结果表明,1 mg纳米磁珠活化后可与50 μgAOZ单克隆抗体偶联;在样品液pH值为7条件下,上样吸附10 min,磁珠对NPAOZ可保持较高吸附率;用300μL纯甲醇洗脱磁珠5 min,可将NPAOZ顺利洗下;AOZ免疫磁珠只对NPAOZ具有较高的特异性吸附,而对NPAHD、NPSEM、NPAMOZ均无吸附作用,该免疫磁珠重复使用两次后对NPAOZ的吸附率仍有86.5%。加标回收试验结果表明,加标量为0.25～2 ng/g时回收率均在78%以上,变异系数为5.3%～10.9%,最低检测限为0.049 μg/kg远低于常规样品前处理法的最低检测限0.139 μg/kg,说明基于免疫磁珠的样品前处理方法能有效富集鸡肉中NPAOZ,并有效提高了 ELISA检测方法的灵敏度。试验Ⅲ AOZ免疫亲和层析柱的研制将AOZ单克隆抗体偶联至CNBr活化的SepharoseTM4B胶上制成AOZ免疫亲和层析柱,优化层析柱的上样、洗脱条件,确定其柱容量和重复使用次数,最终应用于鸡肉样品前处理过程中富集NPAOZ,通过间接竞争ELISA方法测定AOZ回收率以及该方法的灵敏度。试验结果表明,当上样液pH为7.0,并以2 mL/min流速上样时,NPAOZ的吸附率大于90%,而用6 mL 90%甲醇水溶液以3 mL/min速度洗脱层析柱时,可将NPAOZ顺利洗脱下来,其洗脱率大于90%。该层析柱的柱容量为1.6 μg/mL,且至少可重复使用5次。加标试验结果表明,当加标量为1～8 ng/g时,AOZ回收率均大于80%,且变异系数小于10%,最低检测限为0.055 μg/kg。(本文来源于《南京农业大学》期刊2016-04-01）
肖付刚,钮伟民,何恩奇[4]（2011）在《节球藻毒素多抗免疫亲和层析柱的研制》一文中研究指出用合成的节球藻毒素完全抗原免疫日本大耳白兔得到节球藻毒素的多克隆抗体。用CNBr-activated Sepharose 4B和节球藻毒素的多克隆抗体制备了免疫亲和柱,测得抗体偶联率在77.5%—90.2%之间。制得的免疫亲和柱最大柱容量在70-98ng之间,柱空白为0,回收率在71.8%-97.2%之间。柱子再生重复使用6次回收率不低于71.8%。建立了免疫亲和层析柱-高效液相法测定水样中的节球藻毒素的方法。该法检测限为3ng/L,线性定量范围为10-500ng/L。(本文来源于《Proceedings of 2011 International Conference on Biomedicine and Engineering（ISBE 2011 V4）》期刊2011-08-04）
孙兴荣[5]（2011）在《黄曲霉毒素M_1免疫亲和层析柱的研制》一文中研究指出黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是由黄曲霉(A.falvus )和寄生曲霉(A.parasiticus)在生长繁殖过程中产生的一类强致癌物质,1960年于英国伦敦郊区首次被发现,它破坏人及动物肝脏组织,严重时可导致肝癌甚至死亡,1993年,被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构(IARC)规定为I类致癌物。黄曲霉毒素M_1(Aflatoxin M_1,AFM_1)是哺乳类动物食用了被AFB_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)污染的饲料或食品后,在体内经羟基化生成的代谢产物,例如牛、羊等哺乳类动物食用了被AFB_1、污染的饲料,那么在分泌的乳汁中则可检测出AFM_1。AFM_1的毒性虽较AFB_1低一个数量级,但与氰化钾和砒霜比仍属剧毒物质,为强致癌剂,严重危胁人类的健康和安全。2002年,被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构(IARC)规定为I类致癌物。目前,常用的检测方法都不同程度的存在前处理过程繁琐、净化效果差、耗时长等缺点。因此,研制高效分离、准确定量、灵敏、可靠的免疫亲和柱对保障人类及动物食品安全具有重要意义。本研究主要从以下叁个方面进行: 1.利用无血清培养基培养分泌抗AFM_1单克隆抗体的杂交瘤细胞,培养至96%以上的细胞死亡后,培养基利用Protein G亲和层析,对分泌的AFM_1单克隆抗体进行纯化,紫外分光光度计测定抗体OD_(260nm)、OD_(280nm)值,计算其蛋白浓度为3.533mg/mL;进行SDS-PAGE电泳分析,黄曲霉毒素M_1单克隆抗体纯度良好;间接非竞争ELISA测定其效价为3.2×10~6,AFM_1单克隆抗体与AFM_1、AFB_1、AFG_1、和DON的交叉反应率分别为100%、15.9%、6.8%和0%,亲和力为6.0×10~8 L/mol;满足研制免疫亲和柱对抗体亲和力的要求; 2.利用无血清培养基制备的高纯度抗AFM_1单克隆抗体与溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、封闭、装柱,测得单克隆抗体与活化载体的偶联率为93.4%;建立间接竞争ELISA法(IC-ELISA)和高效液相色谱法(HPLC),并建立相应的标准曲线,间接竞争ELISA的线性回归方程为y=-9.0249x+96.272(相关系数R~2 = 0.977),HPLC法的标准曲线方程为y = 326.08x-122.17(相关系数R~2 =0.9995),通过HPLC法优化了AFM_1单克隆抗体免疫亲和柱的使用条件,并对免疫亲和柱的性能进行评价。上样条件:pH 7.2,流速:3mL/min,洗脱条件:90%的甲醇-水溶液,流速:3mL/min。在此优化条件下,免疫亲和柱的柱容量为256ng,可使用次数为3次,如果不能在一天内及时使用免疫亲和柱,则应放在4℃条件下保存,经回收率实验测定,加标量在4～200ng之间时,免疫亲和柱的回收率范围为92.5%～95.6%;样品的加标实验得到AFM_1加标量在0.5～200ng/mL时的回收率为90.7%~93.5%,变异系数均小于8%。3.从黑龙江大庆市周边及大型超市随机抽取了30个乳制品样品,用免疫亲和柱-高效液相色谱法与自建的IC-ELISA法进行AFM_1检测,所有被检出含有AFM_1的样品含有AFM_1的浓度均低于0.5ng/mL。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2011-04-01）
肖付刚,钮伟民,何恩奇[6]（2010）在《节球藻毒素多抗免疫亲和层析柱的研制》一文中研究指出用合成的节球藻毒素完全抗原免疫日本大耳白兔得到节球藻毒素的多克隆抗体。用CNBr-activated Sepharose 4B和节球藻毒素的多克隆抗体制备了免疫亲和柱,测得抗体偶联率在77.5%—90.2%之间。制得的免疫亲和柱最大柱容量在70-98ng之间,柱空白为0,回收率在71.8%-97.2%之间。柱子再生重复使用6次回收率不低于71.8%。建立了免疫亲和层析柱-高效液相法测定水样中的节球藻毒素的方法。该法检测限为3ng/L,线性定量范围为10-500ng/L。(本文来源于《Proceedings of 2010 First International Conference on Cellular,Molecular Biology, Biophysics and Bioengineering(Volume 7)》期刊2010-12-25）
严兵[7]（2010）在《基于免疫亲和层析柱（IAC）检测牛奶中青霉素酶（TEM—1）的研究》一文中研究指出青霉素酶是催化水解青霉素β-内酰环产生青霉噻唑酸的一类β-内酰胺酶。目前,市场上大部分乳制品企业在牛奶中人为的添加青霉素酶,以达到降解青霉素类抗生素的目的,降低青霉素类药物的残留含量。但牛奶中蓄积的青霉素酶对人体危害很大,是禁止使用的食品添加剂。因此,对牛奶中青霉素酶的快速识别的研究势在必行。本研究选用青霉素酶(TEM-1)为因子,免疫健康实验獭兔,制备出针对青霉素酶的特异性抗血清,采用间接ELISA法对制备的特异性抗血清进行评价,并对特异性抗血清进行纯化,利用效价最高的特异性抗血清制备免疫亲和层析柱,建立识别牛奶中青霉素酶的方法。具体内容与结果如下:1.用青霉素酶(TEM-1)为抗原,按照常规免疫方法免疫健康实验獭兔,制备出针对青霉素酶的特异性抗血清。同时建立间接ELISA方法,其中包被抗原青霉素酶(TEM-1)的工作浓度为10μg/ml,阴性血清的工作浓度为1:2000倍稀释,HRP-山羊抗兔IgG二抗的最佳稀释倍数为1:2000,抗原最佳包被条件为4℃过夜,血清最佳反应时间为37℃1h,酶标二抗反应最佳时间为37℃1h,底物作用的最佳时间为20min。制备的青霉素酶特异性抗血清的最高效价为1:6.4×10~4。2.将制备的青霉素酶特异性抗血清用饱和硫酸铵粗提,然后用DEAE-Sephadex A 50凝胶层析柱进一步纯化IgG,经PAGE-SDS电泳法鉴定为目标蛋白。同时将纯化的IgG与CNBr-Sepharose 4B偶联,计算得出偶联率为92%,继续制备免疫亲和层析柱。3.建立检测青霉素的毛细管电泳(HPCE)检测方法,绘制标准曲线,线性方程为y=2698.7x-2330.2,R2=0.9991。最低检测限为2μg/mL。建立青霉素与青霉素酶对应关系的标准曲线,线性方程为y=-1071.1x+1126.1,R~2=0.9699。测得免疫亲和层析柱动态柱容量为2041ng/mg,绝对柱容量为410.98ng/mg。分别添加5mL 200μg/mL、300μg/mL和400μg/mL青霉素酶标准工作液,5mL甲醇洗脱,高效毛细管电泳检测,连续测定6次,测得其回收率为91%、93.33%、95.5%,变异系数为5.12%、3.31%、3.75%。同时测得牛奶中青霉素酶的浓度为0.378μg/mL。以上结果表明:本研究成功地制备了青霉素酶(TEM-1)特异性抗血清,建立了青霉素酶(TEM-1)特异性抗血清间接ELISA检测方法。青霉素酶特异性抗血清进行纯化后,成功地制备了特异性吸附青霉素酶(TEM-1)的免疫亲和层析柱,并对免疫亲和层析柱的柱效进行了评价。成功地建立了检测青霉素酶(TEM-1)的高效毛细管电泳方法。牛奶样品经过免疫亲和层析柱前处理后,应用建立的高效毛细管电泳方法检测,效果好。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2010-06-01）
肖付刚,赵晓联,汤坚,顾小红,张敬平[8]（2008）在《微囊藻毒素-LR免疫亲和层析柱的研制和应用》一文中研究指出用CNBr-activated Sepharose4B和微囊藻毒素-LR的单克隆抗体制备了免疫亲和层析柱,测得抗体偶联率在75.7%~94.1%之间。制得的免疫亲和层析柱最大柱容量在76~95ng之间,柱空白为0,回收率在90.8%~105.1%之间。柱子再生重复使用6次后,回收率不低于75%。建立了免疫亲和层析柱-高效液相色谱测定水样中的微囊藻毒素-LR的方法。该法检出限为5ng/L;线性定量范围为10~500ng/L。实验结果显示,免疫亲和层析柱特异性好,一次净化能除去绝大部分干扰物,净化效果明显优于现有的固相萃取柱。(本文来源于《分析化学》期刊2008年01期）
邓舜洲,余宙,章英,黄志兵,许杨[9]（2007）在《脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制》一文中研究指出利用本实验室研制的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体研制了DON单克隆抗体免疫亲和柱,柱容量为1μg。小麦样品添加DON标品(1～3μg/g),用蒸馏水提取样品中DON,经免疫亲和柱净化、甲醇洗脱,HPLC检测,回收率大于88%,变异系数4.6%～7.4%。(本文来源于《食品工业科技》期刊2007年02期）
梁明,刘楠,刘吉华,余伯阳[10]（2006）在《以鲁斯可皂苷元为配基的亲和层析柱的制备及其在纯化抗体中的应用》一文中研究指出目的:以鲁斯可皂苷元(ruscogenin,RUS)为配基制备亲和层析柱,并应用于免疫亲和纯化抗血清。方法:将鲁斯可皂苷元衍生为带有两个-COOH臂的丁二酸单酯衍生物(succinylatedruscogenin,RUS-2HS),与带有10碳原子链的琼脂糖凝胶EAHSepharose4B偶联,制成亲和层析柱;以制备的亲和层析柱纯化人工合成抗原RUS-2HS-BSA(牛血清白蛋白)免疫家兔产生的抗血清,得到特异性较高的抗体,并检测纯化抗体的纯度及特异性。结果:成功将RUS-2HS作为配体偶联至亲和介质上,偶联量为4.24mg.mL-1,偶联率为53.25%;竞争性抑制试验显示纯化抗体交叉反应率下降,特异性提高;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示单一蛋白质条带,其相对分子质量约为51.2kD。结论:建立了以小分子天然活性产物为配基制备亲和柱的方法,应用于抗血清的纯化,获得的特异性抗体为探索该类难检测的活性成分的药理作用机制提供新的技术手段。(本文来源于《中国天然药物》期刊2006年05期）
亲和层析柱论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
治疗性抗体是当前生物制药中发展最快、成果最显着的领域之一,国际上批准的治疗性抗体已经有24种,占生物技术药物产业份额的1/4~1/3~([1]),抗体的纯化和制备方法也因此受到了广泛的关注。其中,抗体纯化最常用的方法之一是固定蛋白质A的亲和层析法~([2]),蛋白质A(SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁的组成成分,它与抗体有很强的结合能力。但由于天然SPA提取及纯化较困难,使得相应的亲和层析柱制备成本很高,提高了抗体纯化的成本。Z
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
亲和层析柱论文参考文献
[1].李坤,詹少德,吴志华,陈红兵.利用自制免疫亲和层析柱纯化抗Arah2抗体[C].第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集.2016
[2].郑珩,劳兴珍,周亚丽,顾觉奋.双Z结构域亲和层析柱的制备及稳定性研究[C].中国化学会第18届反应性高分子学术研讨会论文集.2016
[3].曾鹏.呋喃唑酮代谢物AOZ免疫磁珠、免疫亲和层析柱的研制[D].南京农业大学.2016
[4].肖付刚,钮伟民,何恩奇.节球藻毒素多抗免疫亲和层析柱的研制[C].Proceedingsof2011InternationalConferenceonBiomedicineandEngineering（ISBE2011V4）.2011
[5].孙兴荣.黄曲霉毒素M_1免疫亲和层析柱的研制[D].黑龙江八一农垦大学.2011
[6].肖付刚,钮伟民,何恩奇.节球藻毒素多抗免疫亲和层析柱的研制[C].Proceedingsof2010FirstInternationalConferenceonCellular,MolecularBiology,BiophysicsandBioengineering(Volume7).2010
[7].严兵.基于免疫亲和层析柱（IAC）检测牛奶中青霉素酶（TEM—1）的研究[D].安徽农业大学.2010
[8].肖付刚,赵晓联,汤坚,顾小红,张敬平.微囊藻毒素-LR免疫亲和层析柱的研制和应用[J].分析化学.2008
[9].邓舜洲,余宙,章英,黄志兵,许杨.脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制[J].食品工业科技.2007
[10].梁明,刘楠,刘吉华,余伯阳.以鲁斯可皂苷元为配基的亲和层析柱的制备及其在纯化抗体中的应用[J].中国天然药物.2006
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