导读:本文包含了转录抑制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:当归多糖,黄芪多糖,GATA1,BCL11A
转录抑制论文文献综述
崔运浩,初杰,范颖,李新,蒋宁[1]（2019）在《当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2影响》一文中研究指出目的:通过实验研究当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2的影响。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28～32 g。给模型组小鼠每日腹腔注射1次环磷酰胺380 mg·kg~(-1),正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3 d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000 r/min,离心10 min,去上清液,加入4 mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为7组,包括正常组、模型组、"EPO"组、"EPO+(G-CSF)"组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2 mg/mL,黄芪多糖0.2 mg/mL,EPO50 U/mL,(G-CSF) 50 U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3 d,室内18～20℃,20%相对湿度,5%CO_2,37℃孵育箱。采用MTT法检测骨髓干细胞生长和增殖的情况;采用ELISA检测骨髓干细胞中GATA1的蛋白含量;采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中BCL11A、KLF1、NFE2的mRNA表达。结果:(1)造模后模型组GATA1蛋白含量明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各给药组与模型组GATA1均有明显差异,药物组之间差异均有统计学意义,当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(2)造模后模型组小鼠骨髓干细胞BCL11A、KLF1、NFE_2mRNA明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。①各给药组与模型组BCL11A均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升BCL11A作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好;②各给药组与模型组KLF1均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升KLF1作用,两药交互作用明显,合用不如单用黄芪多糖;③各给药组与模型组NFE2均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升NFE2作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好。结论:当归多糖、黄芪多糖及两药配伍能够显着提升GATA1蛋白含量,上调骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的BCL11A mRNA、KLF1 mRNA、NF-E2 mRNA的表达水平,对珠蛋白基因的调控网络起到促进作用,从而为促进骨髓干细胞红系分化发育创造条件。两药配伍的作用优于单一用药。(本文来源于《中华中医药学刊》期刊2019年11期）
毛彦稳,张小欢,刘慧铭,王圆圆,汤磊[2]（2019）在《硫辛酰胺对高糖条件下肾小管上皮细胞氧化应激及转化生长因子β激活酶1和核转录共抑制因子蛋白表达的影响》一文中研究指出目的通过观察高糖环境下给予硫辛酰胺(dl-alpha lipoamide,ALM)干预后对细胞氧化应激水平、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)及核转录共抑制因子(SnoN)蛋白表达的影响,探讨ALM减轻高糖诱导诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法将体外培养的肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为3组:正常糖培养组(NG)、高糖组培养组(HG)、高糖培养条件下加入ALM刺激组(ALM);采用细胞免疫荧光及Western Blot技术,进行细胞鉴定;氧化应激试剂盒检测体外培养的各组肾小管上皮细胞(NRK-52E cells)氧化应激水平;Western Blot技术检测高糖环境下NRK-52E细胞中,硫辛酰胺对TAK1、SnoN蛋白表达的影响;流式细胞技术和Western Blot技术检测ALM对大鼠肾小管上皮细胞纤维化过程的抑制作用。结果所培养细胞为肾小管上皮细胞并对高糖刺激敏感;高糖条件下给予ALM干预后,T-SOD活性增强,MDA水平减少,且TAK1、p-TAK1(Thr184/187)及CollagenⅢ蛋白表达水平减少,SnoN及钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平的表达上调。结论高糖环境下给予ALM干预后,肾小管上皮细胞的氧化应激水平降低,伴随TAK1的表达减少和SnoN蛋白表达增加,从而抑制肾小管上皮细胞向间质细胞转分化的发生及细胞外基质沉积,最终延缓肾小管上皮细胞纤维化的发生发展。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年19期）
姚敏,沈水杰,陈洁,陈颖,王理[3]（2019）在《下调GPC-3转录经Wnt/β-catenin通路对肝细胞癌生长的抑制作用》一文中研究指出目的研究干预磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3, GPC-3)活化经Wnt/β-catenin通路对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的抑制作用。方法将miRNA干扰质粒转染GPC-3高表达的HepG2和Hep3B细胞,以CCK-8法检测细胞增殖,平板法分析克隆形成,以流式细胞术分析细胞周期;以裸鼠移植瘤模型观察成瘤时间、体积、生长曲线;以免疫组化法和免疫印迹法分析GPC-3及Wnt/β-catenin通路关键分子β-catenin、p-GSK3β及Cyclin D1的变化。结果特异性miRNA成功转染HepG2和Hep3B细胞后,体外研究显示HCC细胞增殖受到抑制、克隆形成明显降低和发生G_1期阻滞,差异有显着统计学意义(P<0.01),β-catenin及p-GSK3β显著降低(P<0.01);体内研究显示,移植瘤成瘤时间延长(t=12.89,P<0.01)、瘤体小(t=15.29,P<0.01);瘤内GPC-3表达明显下降(t=6.67,P<0.01)、相关信号分子β-catenin(t=9.61,P<0.01)、p-GSK3β(t=4.81,P<0.01)及Cyclin D1(t=5.90,P<0.01)表达均显着下调。结论干预GPC-3活化经Wnt/β-catenin通路抑制HCC细胞增殖和生长,提示GPC-3为HCC治疗的潜在靶目标。(本文来源于《胃肠病学和肝病学杂志》期刊2019年09期）
吕聪,孙麟,冯皓宇,马迅,贺亚军[4]（2019）在《减少氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞凋亡:抑制高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路的作用》一文中研究指出背景:脊髓损伤后,星形胶质细胞核内高迁移率族蛋白B1被释放到细胞外,通过与细胞膜表面受体结合激活核转录因子κB引起脊髓水肿或者炎症等一系列病理反应,但有关高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路调节氧糖剥夺/复氧损伤后脊髓星形胶质细胞凋亡的研究尚少。目的:分析高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路对氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞凋亡的调节作用。方法:体外培养新生一二天SD大鼠(山西医科大学动物中心提供)脊髓星形胶质细胞,建立氧糖剥夺细胞损伤模型,并分别复氧培养6,12,24 h,ELISA法检测培养基内高迁移率族蛋白B1质量浓度,Western blot法检测细胞内高迁移率族蛋B1、Bcl-2、BAX蛋白表达量,MTT法检测细胞存活率,以此筛选最佳复氧时间进行以下实验。取第4代脊髓星形胶质细胞,分4组培养:正常组、氧糖剥夺/复氧组、氧糖剥夺/复氧+丙酮酸乙酯组、氧糖剥夺/复氧+核转录因子κB抑制剂组,复氧培养24h后,ELISA法检测培养基内高迁移率族蛋白B1质量浓度,Westernblot法检测细胞内高迁移率族蛋B1、核转录因子κB、Bcl-2、BAX蛋白表达量,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与结论:(1)各检测结果显示复氧培养24 h为最佳复氧时间,用于后续实验;(2)与正常组比较,氧糖剥夺6 h/复氧24 h组高迁移率族蛋B1、核转录因子κB蛋白表达及细胞凋亡率升高(P <0.05),细胞存活率、Bcl-2/BAX比值降低(P <0.05);与氧糖剥夺6 h/复氧24 h组比较,氧糖剥夺6 h/复氧24 h+丙酮酸乙酯组、氧糖剥夺6 h/复氧24 h+核转录因子κB抑制剂组细胞存活率、Bcl-2/BAX比值升高(P <0.05),核转录因子κB蛋白表达、细胞凋亡率降低(P <0.05);(3)结果表明,高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路参与调节氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞的凋亡。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年33期）
宋志琦,徐艳峰,邓巍,于品,屈亚锦[5]（2019）在《锂元素对抑制元件沉默性转录因子表达的调控机制》一文中研究指出(目的)抑制元件沉默性转录因子(REST)在大脑内的正常表达对于健康老年人至关重要,而在阿尔兹海默病和朊病毒病等神经退行性疾病中REST的表达受到抑制。特异性促进REST在神经元中的表达可能具有潜在的神经保护作用。本研究旨在分析锂元素对REST表达的影响和潜在的调控机制。(方法)①Pr P106-126毒性多肽孵育原代皮质神经元,收集并分离细胞的胞浆和胞核,分析REST在亚细胞结构中的表达和定位;②在以上环境中加入氯化锂(Li Cl),通过免疫荧光分析氯化锂对REST细胞定位的影响;③用含有锂元素的不同化合物或GSK3β特异性抑制剂孵育原代皮质神经元,检验氯化锂(Li Cl)是否为REST的特异性调节剂;④在原代皮质神经元中干扰REST,再分析Li Cl的孵育是否会缓解REST干扰导致的下游调控蛋白的抑制。(结果)结果表明:①锂元素促进REST的核转移;②锂元素特异性促进REST表达;③锂元素恢复REST干扰引起的下游靶蛋白表达紊乱。(结论)结果提示,锂元素可以特异性缓解毒性多肽对REST1的抑制作用,促进REST表达及核转移,为靶向REST治疗相关神经退行性疾病提供理论基础和科研依据。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
杨德莲,童津津,孙铭维,张婕,张华[6]（2019）在《无乳链球菌通过抑制酪氨酸激酶/信号转导及转录激活因子和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成》一文中研究指出本试验旨在研究无乳链球菌(GBS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳蛋白合成的影响机理。试验用不同浓度GBS[感染复数(MOI)分别为100、50、10]感染BMECs 1、2、4、6、8、12、18、24 h,每个时间点都设立相应的空白对照,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、扫描电镜以及流式细胞术等方法检测GBS对BMECs活性、形态及凋亡的影响;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot检测β-酪蛋白及乳蛋白合成相关基因的mRNA和蛋白表达量。结果表明:1) GBS对BMECs的毒性作用具有明显的时间、剂量依赖性,即随着感染时间的延长、细菌浓度的升高,LDH释放量显着或极显着高于对照组(P<0.05或P<0.01); GBS感染后细胞形态发生显着变化,感染6 h时,细胞结构断裂,感染8 h时,细胞形态结构受到严重破坏;感染2 h时,BMECs发生了显着的凋亡(P<0.05);感染6 h时,BMECs发生极显着的凋亡(P<0.01)。2)感染6 h时,GBS导致BMECs中β-酪蛋白以及正调控乳蛋白表达基因酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转换及转录激活因子5a(STAT5a)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、核糖体蛋白S6(sRPS6)、催乳素受体(PRLR)、est结构域转录因子5(ELF5)mRNA表达量极显着下降(P <0. 01);负调控基因真核翻译起始因子4E结合蛋白1 (EIF4EBP1) mRNA表达量极显着上升(P<0.01); GBS导致BM ECs中β-酪蛋白、STAT5a、磷酸化-信号转导及转录激活因子5a(p-STAT5a)、mTOR、磷酸化-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、AKT1蛋白表达量极显着下降(P <0.01),而磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1 (p-AKT1)蛋白表达完全受到抑制。在感染8 h时,GBS完全抑制了β-酪蛋白、STAT5a、p-STAT5a、mTOR、p-mTOR、AKT1、p-AKT1的蛋白表达。由此可见,GBS能够损伤BM ECs的形态结构,促进细胞凋亡,降低细胞活性,从而影响细胞的正常生理功能,此外,GBS抑制BMECs乳蛋白的合成,主要通过抑制JAK/STAT、mTOR信号通路发挥作用。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年08期）
丁笑[7]（2019）在《库页红景天化学成分及其抑制HIF-1α转录活性研究》一文中研究指出在此项研究中,使用正、反相硅胶柱色谱、大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶柱和半制备高效液相等技术对库页红景天根茎的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位 进 行 分 离 纯 化,共 得 到 22 种 化 合 物。利用核磁共振波谱、质谱等方法对所得化合物进行结构解析,结果分别鉴定为苏丹叁(1)、叁十五烷(2)、十一烷(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、2,6-二甲氧基-4-羟基苯乙酮(5)、2,4-二羟基-6-甲氧基苯乙酮(6)、大黄素(7)、2(R)-26-[(2E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-2,3-dihydr oxypropyl ester(8)、没食子酸甲酯(9)、酪醇(10)、咖啡酸(11)、没食子酸(12)、β-熊果苷(13)、2-甲氧基对苯二酚(14)、山奈酚(15)、对羟基苯甲酸(16)、原儿茶酸(17)、4,6-二羟基-2-O-0β-D-吡喃葡萄糖苷)-苯乙酮(18)、2,6-二甲氧基-4-O-(β-D-吡喃葡萄糖苷)-苯乙酮(19)、芦丁(20)、3'-甲氧基木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(21)、木犀草苷(22)。其中,化合物1?3、5?9、14、18、19、21、22为首次从该植物中分离得到。在该实验中,利用荧光素酶报告基因法来检测22种化合物对HeP3B细胞中HIF-1α转录活性的抑制作用,同时用MTT法检测了所有化合物的细胞毒性。荧光素酶报告基因法和MTT测定的结果显示化合物6、12、15、17、18具有抑制HIF-1α转录活性的作用,并且在相应的作用浓度下无明显的细胞毒性。其中化合物12、15、18随着给药浓度的增加,HIF-1a转录活性呈现依次降低的趋势。(本文来源于《延边大学》期刊2019-05-30）
邱立强,夏豪,江洪,李雯静,吴刚[8]（2019）在《斑蝥素阻断核转录因子κB信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移》一文中研究指出目的:探讨斑蝥素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响,以及从核转录因子κB(NF-κB)信号通路角度探讨其机制。方法:组织块贴壁法获取SD大鼠原代VSMCs,以1 mg/L的脂多糖诱导VSMCs增殖和迁移。实验分4组:对照组、1 mg/L脂多糖刺激组、脂多糖刺激后加用5μmol/L斑蝥素组和脂多糖刺激后加用10μmol/L斑蝥素组。观察不同浓度斑蝥素对VSMCs增殖和迁移的影响及从NF-κB信号通路角度探讨其机制。结果:细胞毒性及增殖检测实验显示,斑蝥素浓度在10μmol/L内细胞活性不受影响,脂多糖使用浓度为1 mg/L时VSMCs增殖能力显着提高,但随着脂多糖浓度的进一步提高其增殖能力增速减慢。流式细胞仪检测结果显示,脂多糖可促进VSMCs由S期向G2期转化,而斑蝥素可明显抑制脂多糖的上述作用(P<0.05)。Transwell结果显示,脂多糖可显着诱导细胞迁移(P<0.01),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制脂多糖诱导的细胞迁移(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测显示,脂多糖显着增加磷酸化NF-κB p65水平,同时明显抑制NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的表达,而斑蝥素呈浓度依赖性抑制脂多糖的上述作用(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链式反应法和酶联免疫吸附测定结果均显示,脂多糖显着增加促炎因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和单核细胞趋化蛋白-1的表达(P<0.05),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制其表达(P<0.05)。结论:斑蝥素对脂多糖诱导的VSMCs的增殖和迁移具有显着抑制作用,其机制与抑制NF-κB通路并减轻炎症反应有关。(本文来源于《中国循环杂志》期刊2019年05期）
崔伟伟[9]（2019）在《Sohlh2通过抑制HIF-1α转录调控乳腺癌血管形成》一文中研究指出研究背景乳腺癌位居女性恶性肿瘤发病之首,且致死率占第二位。2018年全球肿瘤发病与死亡报告中指出,每年乳腺癌新发病例约有209万例,其中约有63万例患者死于乳腺癌。但目前为止乳腺癌发生发展机制并不明确,加之缺乏早期诊断的特异性指标和较为有效的治疗方案,乳腺癌已然成为危害全球女性健康的重大问题。乳腺癌细胞增殖能力活跃且极易发生远处转移,这是病人预后差的关键原因。但乳腺癌发病因素复杂多样,疾病的一级预防尤为困难。因此探究乳腺癌的发生发展机制极为重要。任何肿瘤的发生发展过程都离不开肿瘤微环境。在微环境中,肿瘤生长经历两个时期:无血管期和血管期;在无血管期,肿瘤直径一般不会超过1-2mm,但是一旦进入血管期,肿瘤实体组织迅速生长且极易发生远处转移。由此可见,新生血管形成不管是在肿瘤的起源,还是远处转移都起着至关重要的作用。抗血管治疗作为临床治疗的主要手段,在切断原发肿瘤营养供给的同时,也能减轻肿瘤细胞的远处转移。VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)是促进血管形成的关键分子,抗VEGF的靶向药物贝伐珠单抗(Bevacizumab)已广泛应用于临床肿瘤的治疗,但是随着耐药现象出现以及缺氧诱导其它促血管生成因子增加,如Angptl4(Angiopoietin-like4)、IL-8(Interleukin-8)、EPO(Erythropoietin)等,病人的治疗效果及预后并未得到明显的改善。因此从缺氧角度出发探究乳腺癌血管形成机制尤为重要。缺氧是肿瘤微环境中的重要特征,其中缺氧诱导因子1 alpha(HIF-1α)在促进肿瘤新血管形成中发挥重要的调控作用。HIF-1α诱导肿瘤细胞产生大量的促血管生长因子及激活血管形成的相关通路,如VEGF、Angptl4、EPO、IL-8、TGF-β(Transforming Growth Factor β)、NF-KB,其中以VEGFA作用最为明显。大量的促血管生成因子的出现,使得肿瘤组织中内皮细胞异常增生,形成紊乱无序且具有高渗透性的新生血管,导致肿瘤细胞迅速增殖且发生血行转移。因此,抑制缺氧环境中肿瘤细胞HIF-1α基因表达,将有效地减少肿瘤内新生血管形成。Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis basic helix-loop-helix transcription factor 2)是碱性螺旋-环-螺旋家族中重要的转录因子,可通过与靶基因启动子的E box序列(CANNTG)结合,调控细胞的增殖、迁移、分化等多种细胞行为。Sohlh2广泛存在人体各器官组织中,如乳腺、卵巢、结肠、肾脏等,但是在各脏器对应的肿瘤组织中表达量却明显降低。前期实验已证实sohlh2是一个新的抑癌基因,可以抑制乳腺癌、卵巢癌、结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭和远处转移。RNA高通量测序结果显示,敲减sohlh2可促进乳腺癌细胞HIF-1α及血管生成相关因子VEGF、IL-8等的表达。我们提出假设,sohlh2可能通过抑制HIF-1α信号通路参与乳腺癌血管形成的调控。选取30例乳腺导管癌患者病理切片,免疫组化染色检测sohlh2与血管相关蛋白(CD31、CD34)在乳腺癌组织标本中的表达,分析sohlh2表达与微血管密度(Microvessel density)的相关性。实验结果显示,乳腺癌组织中sohlh2蛋白表达与MVD存在显着的负相关,结果提示sohlh2可能抑制乳腺癌的血管形成。肿瘤血管形成在很大程度上依赖于肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用。通过慢病毒转染的方式,构建过表达sohlh2或敲减sohlh2的稳转乳腺癌细胞系;通过构建乳腺癌细胞-内皮细胞共培养体系或收集乳腺癌细胞条件培养基的方式,体外模拟肿瘤微环境,旨在探究sohlh2是否通过调控肿瘤细胞血管生成相关细胞因子的分泌,影响血管内皮细胞功能;另外通过q-PCR、Western-blot、CHIP、Luciferase Report Assay、免疫荧光、免疫组化、裸鼠原位成瘤等实验技术,探究sohlh2对于HIF-1α及下游促血管形成因子的调控及其机制,以期为临床抗血管治疗提供新的思路。研究方法1.研究乳腺癌组织中sohlh2与MVD、临床特征的相关性选取30例乳腺导管癌患者肿瘤组织标本,免疫组化染色分析乳腺癌组织中sohlh2蛋白水平与MVD的相关性;结合患者临床特征信息,分析sohlh2基因表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、ER(+)、PR(+)、远处转移的相关性。2.研究soh Ih2是否通过肿瘤细胞旁分泌途径调控血管内皮细胞功能选取人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MCF-7),通过慢病毒转染的方式构建稳转细胞系,分为以下四组:①MDA-MB-231 con②MDA-MB-23]sohlh2③MCF-7 si-con④MCF-7 si-sohlh2。通过构建共培养体系或收集条件培养基,将稳转乳腺癌细胞与人脐静脉内皮细胞HUVEC相互作用,通过CCK-8、FACS、Transwell迁移、基质胶小管形成等实验方法,研究sohlh2是否通过肿瘤细胞旁分泌途径调控血管内皮细胞功能。3.在体实验研究sohlh2在乳腺癌血管形成中的作用16只雌性Balbc裸鼠随机分为4组,于右侧乳房脂肪垫原位注射上述四组乳腺癌细胞,测量肿瘤大小,绘制生长曲线。4周后,剥离原位瘤体,拍照、称重,进行CD31、CD34免疫组化染色,在体实验研究sohlh2对乳腺癌原位瘤体的生长、血管形成的影响。4.研究soh I h2是否通过调控HIF-1 a及其相关的促血管生长因子表达,调控乳腺癌血管形成在乳腺癌细胞系与裸鼠原位瘤体中,通过q-PCR、Western-blot、ELISA、免疫荧光、免疫组化等实验方法,检测sohlh2对于乳腺癌细胞HIF-1α、VEGFA、Angptl4 的mRNA和蛋白表达的影响;通过CHIP、Luciferase Report Assay等实验技术,检测sohlh2是否直接调控HIF-1α转录;利用乏氧剂氯化钴诱导缺氧模型或给予HIF-1α的阻断剂KC2F7,进一步研究HIF-1α是否介导sohlh2抑制乳腺癌血管形成的作用。5.研究临床乳腺癌样本中,soh I h2与HI F-1 α及其促血管生长因子的相关性免疫组化染色,观察sohlh2与HIF-1α、VEGFA、Angpt14蛋白表达的相关性,spearman分析计算相关系数。研究结果1.临床乳腺癌组织免疫组化染色结果显示:在sohlh2高表达的乳腺癌样本中,CD31、CD34呈明显低表达;而在sohlh2低表达的乳腺癌样本中,CD31、CD34呈高表达。绘制散点图,spearman相关分析系数分别为-0.769和-0.708,sohlh2与CD31、CD34表达呈显着负相关;分析患者临床特征信息,结果显示sohlh2表达量与年龄、ER(+)、PR(+)无显着性差异,而与肿瘤大小、组织学分级、远处转移呈负相关。2.CCK-8、Transwell迁移结果显示:sohlh2阻断肿瘤细胞旁分泌对血管内皮细胞增殖、迁移的促进作用,敲减sohlh2作用相反;FACS测凋亡结果证实sohlh2通过肿瘤旁分泌途径促进内皮细胞的凋亡,敲减sohlh2作用相反;基质胶小管形成实验结果显示:sohlh2抑制条件培养基对于内皮细胞小管形成的诱导作用,敲减sohlh2则作用相反。3.ELISA结果示:sohlh2抑制肿瘤细胞分泌VEGFA、Angptl4,敲减sohlh2则促进VEGFA的分泌,尤以对VEGFA影响最为显着。4.裸鼠成瘤实验结果示:sohlh2抑制乳腺原位瘤体的生长,敲减sohlh2则促进原位瘤体的生长。免疫组化结果示:与MDA-MB-231 con组相比,MDA-MB-231 sohlh2组的CD31、CD34表达量明显降低,肿瘤组织血管较少;与MCF-7 si-sohlh2组比较,MCF-7 si-sohlh2组的CD31、CD34表达量明显降低,肿瘤组织血管较多。5.乳腺癌细胞系中,q-PCR、Western-blot结果示:sohlh2抑制HIF-1α、VEGFA、Angptl4的mRNA和蛋白水平的表达,敲减sohlh2则促进HIF-1 α、VEGFA、Angptl4 mRNA和蛋白水平的表达。免疫荧光结果示:sohlh2抑制胞核中HIF-1α的表达,敲减sohlh2胞核中HIF-1 α的表达量明显升高;sohlh2抑制胞质中VEGFA、Angpt14的表达,敲减sohlh2胞质中VEGFA、Angptl4明显升高。6.裸鼠瘤体组织中,q-PCR、Western-blot结果示:sohlh2抑制HIF-1α、VEGFA、Angptl4的mRNA和蛋白水平的表达,敲减sohlh2作用相反;免疫组化进一步证实sohlh2抑制瘤体组织中HIF-1α、VEGFA、Angptl4蛋白的表达,敲减sohlh2后,HIF-1α、VEGFA、Angptl4蛋白表达量明显升高。7.CHIP、Luciferase Report Assay结果显示:sohlh2可以结合到HIF-1α的启动子区域并抑制其转录,敲减sohlh2则作用相反;氯化钴诱导缺氧模型结果示:HIF-1α可以在一定程度上逆转sohlh2对于小管形成的抑制作用,且能够部分阻断sohlh2对于VEGFA、Angpt14表达的下调作用;给予KC2F7处理,抑制HIF-1α下游通路,结果示:KC2F7可明显减弱sohlh2 RNAi对于小管形成的促进作用,以及对于VEGFA、Angpt14表达的上调作用。8.在临床乳腺癌病理切片中,免疫组化染色检测sohlh2与HIF-1α、VEGFA、Angpt14的表达。结果显示,sohlh2高表达的乳腺癌样本中,HIF-1α、VEGFA、Angpt14呈低表达;而在sohlh2低表达的乳腺癌标本中,HIF-1α、VEGFA、Angpt14呈高表达。Sperαmαn相关分析进一步证实sohlh2与HIF-1α、VEGFA、Angpt14呈明显的负相关。结论1.Sohlh2通过肿瘤细胞旁分泌途径调控血管内皮细胞功能;2..Sohlh2通过抑制HIF-1α的转录调控乳腺癌血管形成。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-21）
陈王深杰[10]（2019）在《通过抑制BMSCs中转录因子LEF1的表达促进肩袖腱骨愈合的研究》一文中研究指出研究背景肩袖损伤是目前肩关节疼痛并影响正常活动的主要原因之一。目前对于肩袖损伤治疗的最佳方法是进行关节镜下手术修补。但是由于肩袖解剖结构的特殊性,其腱骨界面(bone-tendon junction,BTJ)愈合的情况决定了患者的预后。目前的研究显示,外科术后的腱骨愈合一般是以瘢痕愈合的方式进行的,难以达到肩袖原本的生理结构愈合。这种由瘢痕形成的愈合方式使得肩袖组织的生物力学强度明显弱于正常结构,成为患者术后早期进行功能锻炼的障碍,并且可能增加远期肩袖发生再次损伤的概率。LEF1是Wnt通路中重要的转录因子,是TCF/LEF转录因子家族中的成员,对Wnt通路调控细胞分化有着重要作用,并且能够影响其他信号通路。因此,本研究拟1.提取SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs),利用慢病毒转染抑制LEF1表达,研究转录因子LEF1对其诱导向软骨细胞分化的作用;2.建立SD大鼠冈上肌腱损伤修复模型,利用能够抑制LEF1的慢病毒感染SD大鼠BMSCs,将混有转染后BMSCs的明胶海绵缝入BTJ,观察术后腱骨愈合部位的组织变化情况,观察该转录因子对肩袖BTJ愈合影响,为应用于临床打好基础。研究目的本研究拟1.提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用慢病毒转染BMSCs抑制其LEF1的表达及作用,研究转录因子LEF1对其诱导分化的作用;2.建立SD大鼠冈上肌损伤修复模型,利用抑制LEF1的慢病毒感染SD大鼠BMSCs,将混有转染后BMSCs的明胶海绵缝入肩袖损伤BTJ,观察术后腱骨愈合部位的组织变化情况,观察该转录因子对肩袖BTJ愈合影响。研究方法1、调控LEF1并观察其对大鼠BMSCs的作用(1)全骨髓贴壁培养法提取SD大鼠BMSCs:选用出生7d的SD大鼠(海军军医大学动物实验中心提供),75%酒精淹溺后取双下肢股骨,以注射器吸取培养液将骨髓从骨髓腔中冲出进行培养。(2)针对LEF1的siRNA的设计、合成和筛选:根据siRNA设计的原理和要求,针对SD大鼠LEF1基因序列,设计3对抑制LEF1作用的siRNA,验证效率后包装相应慢病毒感染SD大鼠BMSCs。利用Western Blot技术观察转染后Sox9蛋白的表达情况。2、动物实验设计选取出生4周雄性SD大鼠40只(海军军医大学动物实验中心提供),体重约100~150g,分为1 LEF1抑制组、2普通BMSCs组、3明胶海绵对照组、4空白对照组。所有分组的SD大鼠均进行左侧冈上肌肩袖组织撕裂修补术,在1组肩袖中缝入混有转染慢病毒抑制LEF1表达的BMSCs的明胶海绵,2组肩袖中缝入混有普通BMSCs的明胶海绵,3组仅缝入明胶海绵,4组不缝入明胶海绵。逐层缝合后在术后第14d、28d各处死5只SD大鼠,取左上肢冈上肌标本进行生物力学检测并进行组织学观察,判断肩袖愈合情况。3、SD大鼠冈上肌损伤修复模型建立方法利用2%戊巴比妥钠溶液腹腔注射对SD大鼠进行麻醉。麻醉完成并消毒皮肤后。沿上肢纵轴纵行切开皮肤,钝性撕脱冈上肌在肱骨大结节的止点,用巾钳在肱骨上建立一骨隧道。圆针带不可吸收缝线穿过离冈上肌组织末端2mm处,然后再穿过混有转染后BMSCs的明胶海绵块,再用圆针带不可吸收缝线穿过骨隧道,将冈上肌肌腱缝合固定在肱骨的撕脱止点上,将明胶海绵一同固定于冈上肌断端与肱骨大结节接触部位,模型构建完毕。4、标本制作分别在术后第14d、28d分别处死各组的5只SD大鼠,取整个肩胛骨及其相连的肱骨作为一个完整标本行生物力学测试。生物力学检测完成后,取大结节足印区组织(厚约5mm)进行脱钙固定,进行组织学检测,观察转染组腱骨愈合部位组织类型。5、观察方法和结果测定生存状态观察:培养皿中细胞的形态、贴壁情况以及大体观,有无被污染等;SD大鼠术后的生存状态,如动物活动情况、手术切口愈合情况(是否出现感染或者其他炎症反应)、肢体活动度等。HE染色观察:组织经过固定、脱钙、脱水、清晰、包埋、切片染色等处理后,镜下观察。6、统计学分析利用SPSS 22.0对数据进行统计学分析,同一时间点生物力学的两两比较统计学分析采用SNK-q(Student-Newman-Keuls)检验,比较各组间是否有统计学差异,明确转染后的BMSCs对腱骨愈合是否有作用。不同时间点之间比较采用独立样本t检验,比较第14d和第28d时各组的拉力大小是否有统计学差异。研究结果1、RT-PCR、Western-Blot检测结果(1)根据siRNA设计原则设计出3种序列,分别利用RT-PCR对siRNA的抑制效果进行鉴定,其中siRNA-1对LEF1的抑制效果最佳;(2)转染后的BMSCs经Western Blot检测,Sox9表达含量较非转染细胞升高;2、大体结果术后大鼠上肢活动度减退,肢体活动受限,2例出现局部组织感染,剔除实验并重新补充大鼠;饮食未见明显变化;术后动物呈易激惹状态。其余未见明显差异。3、组织切片结果(1)各组动物均肩袖愈合情况可,最终形成瘢痕愈合;(2)第1组动物最终愈合情况相对较好,镜下观察有相对较多的软骨细胞形成。234组在BTJ除有较多瘢痕,少量的软骨细胞形成,切片无明显差异。4、生物力学检测结果在同一时间点,按照α=0.05水准:在第14天时,各组间生物力学比较无明显差异,p>0.05;在第28天时,第1与第234比较均有统计学意义,p<0.05,234组间比较无统计学意义,p>0.05,第1组拉力大于234组。同一组在不同时间点的拉力均数比较,按照α=0.05水准,均有统计学差异,28d时的拉力大于14d的拉力,说明大鼠肩袖腱骨结合部总体生物力学拉力随时间推移表现为逐渐增强的趋势。研究结论SD大鼠冈上肌损伤修复模型构建技术较成熟,建模方便,成功率高,模型动物生存率高,是研究治疗肩袖疾病方法的较好的模型;RT-PCR、Western-Blot可以检测肩袖损伤修复过程中信号通路发挥的作用情况,提示腱骨愈合过程中可能发挥作用的信号通路机制;HE染色是组织切片的常用方法,能观察到腱骨结合部的组织情况。根据本次研究表明,通过抑制转录因子LEF1的表达,一定程度上可以诱导BMSCs向成软骨细胞方向进行分化;在肩袖损伤修复部位中加入慢病毒转染后的BMSCs在短期内可促进BTJ的愈合,增强愈合部位的生物力学功能,可能实现术后早期进行功能锻炼的需求。本研究有助于为临床治疗肩袖损伤疾病提供新的可能的方法。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-21）
转录抑制论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过观察高糖环境下给予硫辛酰胺(dl-alpha lipoamide,ALM)干预后对细胞氧化应激水平、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)及核转录共抑制因子(SnoN)蛋白表达的影响,探讨ALM减轻高糖诱导诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法将体外培养的肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为3组:正常糖培养组(NG)、高糖组培养组(HG)、高糖培养条件下加入ALM刺激组(ALM);采用细胞免疫荧光及Western Blot技术,进行细胞鉴定;氧化应激试剂盒检测体外培养的各组肾小管上皮细胞(NRK-52E cells)氧化应激水平;Western Blot技术检测高糖环境下NRK-52E细胞中,硫辛酰胺对TAK1、SnoN蛋白表达的影响;流式细胞技术和Western Blot技术检测ALM对大鼠肾小管上皮细胞纤维化过程的抑制作用。结果所培养细胞为肾小管上皮细胞并对高糖刺激敏感;高糖条件下给予ALM干预后,T-SOD活性增强,MDA水平减少,且TAK1、p-TAK1(Thr184/187)及CollagenⅢ蛋白表达水平减少,SnoN及钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平的表达上调。结论高糖环境下给予ALM干预后,肾小管上皮细胞的氧化应激水平降低,伴随TAK1的表达减少和SnoN蛋白表达增加,从而抑制肾小管上皮细胞向间质细胞转分化的发生及细胞外基质沉积,最终延缓肾小管上皮细胞纤维化的发生发展。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转录抑制论文参考文献
[1].崔运浩,初杰,范颖,李新,蒋宁.当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2影响[J].中华中医药学刊.2019
[2].毛彦稳,张小欢,刘慧铭,王圆圆,汤磊.硫辛酰胺对高糖条件下肾小管上皮细胞氧化应激及转化生长因子β激活酶1和核转录共抑制因子蛋白表达的影响[J].实用医学杂志.2019
[3].姚敏,沈水杰,陈洁,陈颖,王理.下调GPC-3转录经Wnt/β-catenin通路对肝细胞癌生长的抑制作用[J].胃肠病学和肝病学杂志.2019
[4].吕聪,孙麟,冯皓宇,马迅,贺亚军.减少氧糖剥夺/复氧后脊髓星形胶质细胞凋亡:抑制高迁移率族蛋白B1/核转录因子κB通路的作用[J].中国组织工程研究.2019
[5].宋志琦,徐艳峰,邓巍,于品,屈亚锦.锂元素对抑制元件沉默性转录因子表达的调控机制[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[6].杨德莲,童津津,孙铭维,张婕,张华.无乳链球菌通过抑制酪氨酸激酶/信号转导及转录激活因子和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成[J].动物营养学报.2019
[7].丁笑.库页红景天化学成分及其抑制HIF-1α转录活性研究[D].延边大学.2019
[8].邱立强,夏豪,江洪,李雯静,吴刚.斑蝥素阻断核转录因子κB信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移[J].中国循环杂志.2019
[9].崔伟伟.Sohlh2通过抑制HIF-1α转录调控乳腺癌血管形成[D].山东大学.2019
[10].陈王深杰.通过抑制BMSCs中转录因子LEF1的表达促进肩袖腱骨愈合的研究[D].中国人民解放军海军军医大学.2019