UCP3基因在巴马猪和藏猪脂肪组织中的表达和甲基化分析

论文摘要

为探究解偶联蛋白3（uncoupling protein 3,UCP3）基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的表达和甲基化水平,试验采用实时荧光定量PCR技术检测UCP3基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的mRNA表达水平;针对猪UCP3基因启动子区域（-3 580～+920 bp）,利用在线软件MethPrimer对该区域进行CpG岛预测,并采用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）检测其甲基化水平,探究UCP3基因甲基化水平在巴马猪和藏猪中的差异。结果显示,巴马猪皮下脂肪组织UCP3基因表达量显著高于藏猪（P<0.05）;在UCP3基因启动子区预测到3个CpG甲基化岛,分别是CpG island1（-3 171～-2 928 bp）、CpG island2（-154～-2 bp）和CpG island3（+648～+806 bp）,其中CpG island1和CpG island3的甲基化水平在巴马猪和藏猪中差异较小,而藏猪CpG island2的甲基化水平（42.61%）高于巴马猪（24.49%）。本研究绘制了2个猪种CpG island2甲基化水平的黑白点图,其中CpG位点为4、8、9、10、11、12、15,藏猪甲基化频率分别比巴马猪高28.26%、17.39%、26.09%、26.09%、26.09%、23.91%和34.78%。在CpG island2处预测到3个转录因子结合位点（SP2、PPARγ和EGR1）。结果表明,巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中UCP3基因mRNA水平的表达差异可能是由于CpG island2的甲基化水平不同所导致,藏猪DNA甲基化水平在一定程度上阻碍了转录因子与启动子调控区域的结合,从而抑制了UCP3基因的表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验动物
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 UCP3基因定量检测
•     1.3.1 引物设计及合成
•     1.3.2 总RNA提取及cDNA合成
•     1.3.3 实时荧光定量PCR
•   1.4 UCP3基因甲基化检测
•     1.4.1 UCP3基因CpG island的预测
•     1.4.2 DNA提取及亚硫酸氢盐修饰
•     1.4.3 目的片段扩增及测序
•     1.4.4 CpG甲基化模式分析
•   1.5 统计分析
• 2 结 果
•   2.1 巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中UCP3基因表达水平
•   2.2 猪UCP3基因启动子区CpG甲基化位点
•   2.3 UCP3基因启动子区CpG位点甲基化水平
•   2.4 UCP3基因启动子区CpG island2潜在转录因子结合位点预测
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 范一萍,王彦芳,陶聪

关键词: 巴马猪,藏猪,基因,脂肪组织,甲基化

来源: 中国畜牧兽医 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

基金: 国家自然科学基金青年基金(31601929),中国农业科学院“青年英才”项目(ASTIP-IAS05)

分类号: S828

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.12.020

页码: 3627-3634

总页数: 8

文件大小: 1755K

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