导读:本文包含了人胞外区基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:受体,基因,蛋白,绦虫,细胞,激酶,干扰素。
人胞外区基因论文文献综述
吕开绩,陈旭东,程开,王路得,朱进顺[1]（2018）在《小鼠PD-1及其配体PD-L1胞外区基因的原核表达及亲和性》一文中研究指出目的:制备小鼠PD-1胞外区(mPD-1)与其配体PD-L1胞外区(mPD-L1)原核表达蛋白,并制备mPDL1兔多克隆抗体,在体外对mPD-L1和mPD-1的结合亲和性进行验证。方法:通过分子克隆方法分别构建重组质粒pET21a/mPD-L1和p GEX4T-1/mPD-1,并通过原核表达系统制备相应的重组蛋白并纯化,通过Western blot进行鉴定;将纯化的mPD-L1蛋白免疫健康日本大耳白兔制备兔多克隆血清抗体,用ELISA、Western blot分析得到的多克隆抗体的效价和特异性,并且将该多克隆抗体作为免疫荧光的阳性对照。最后应用ELISA和免疫荧光验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的亲和性。结果:SDS-PAGE和Western blot结果显示原核表达的重组蛋白与预期大小一致,mPD-L1和mPD-1分别为25 kDa和40 kDa。经mPD-L1蛋白免疫后的日本大耳白兔能够产生特异性抗体,抗体效价在免疫后第6周达到高峰,Western blot检测结果显示多克隆血清可特异性识别mPD-1。ELISA结果表明,原核表达的mPD-L1蛋白能够和mPD-1蛋白结合,实验组OD450值明显高于对照组。免疫荧光结果显示,在小鼠PD-L1阳性细胞B16(小鼠黑色素瘤细胞株)的胞膜区出现绿色荧光团块。结论:利用原核细胞表达并纯化后获得mPD-L1和mPD-1蛋白,并在体外成功验证了mPD-L1和mPD-1之间的结合特性,为后期利用mPD-1和PD-L1的生物学特性研究提供了基础。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2018年06期）
孙守勋,刘静,解立威,柏雪婷,单娜[2]（2018）在《人TLR2胞外区基因酵母表达载体的构建及表达研究》一文中研究指出目的在真核生物酵母细胞中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因。方法以重组质粒pAdTrack-TLR2为模板,应用PCR方法扩增TLR2胞外区基因,克隆到pMD18-T载体中并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中并转化酵母菌Y187,测定其在Y187中的自激活现象及毒性,提取酵母蛋白质,行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果成功扩增出TLR2胞外区基因,测序结果与GenBank中序列一致。酶切回收的目的基因成功克隆入酵母表达载体pGBKT7中并转化酵母菌Y187后证实无重组质粒的自激活作用,Western blot分析显示该基因在酵母细胞中表达。结论成功构建了TLR2胞外区基因的酵母表达载体,并在酵母细胞Y187中正确表达,为后续研究奠定了基础。(本文来源于《现代检验医学杂志》期刊2018年03期）
卢亚平[3]（2016）在《猪TREM2基因的克隆表达及针对猪TREM2胞外区多克隆抗体的制备》一文中研究指出髓系细胞触发受体作为先天性免疫受体中的一类,在宿主先天性防御巾起着相当重要的作用,到目前为止,对猪髓系细胞触发受体的研究还没有报导,为了深入了解猪髓系细胞触发受体2的生物学功能,首先根据GenBank预测的猪TREM2(NM_001256777.1)的全基因序列,从猪肺泡巨噬细胞中提取的RNA为模板扩增TREM2(本文来源于《中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集》期刊2016-10-19）
曹艳杰,何怡宁,唐宁,王海勇,张志鹏[4]（2016）在《叁黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达》一文中研究指出【目的】克隆鸡干扰素基因刺激蛋白(STING)胞外区基因并进行原核表达,为了解STING蛋白的生物学功能及探讨禽类的固有免疫机制打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增鸡STING胞外区基因,与原核表达载体p GEX-4T-1连接构建重组表达质粒,再转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行12%SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。【结果】叁黄鸡STING胞外区基因全长951 bp,与原核表达载体p GEX-4T-1可成功构建重组表达质粒p GEX-4T-1-STING,转化BL21(DE3)感受态细胞后经1.0 mmol/L IPTG诱导表达4 h,12%SDS-PAGE电泳检测得到一个带GST标签约62 ku的融合蛋白,采用抗GST多克隆抗体进行Western blotting鉴定,约在62 ku处可见一条明显的蛋白印迹条带,表明目的蛋白原核表达正确,且特异性较高。【结论】从叁黄鸡外周血淋巴细胞中克隆获得的STING胞外区基因片段可在原核细胞中高效表达,且纯化后的融合蛋白可用于制备鸡STING多克隆抗体。(本文来源于《南方农业学报》期刊2016年08期）
卢亚平[5]（2016）在《猪TREM2基因的克隆表达及针对猪TREM2胞外区多克隆抗体的制备》一文中研究指出髓系细胞触发受体作为先天性免疫受体中的一类,在宿主先天性防御中起着相当重要的作用,到目前为止,对猪髓系细胞触发受体的研究还没有报导,为了深入了解猪髓系细胞触发受体2的生物学功能,首先根据Gen Bank预测的猪TREM2(NM_001256777.1)的全基因序列,从猪肺泡巨噬细胞中提取的RNA为模板扩增TREM2的全基因片段,通过测序验证扩增序列的正确性。选取猪TREM2胞外区基因片段(438 bp)连接到原核表达载体p ET-28a中,利用原核表达系统获得了高效表达于包涵体中的重组TREM2蛋白(约21 k Da)。利用亲和层析技术纯化获得TREM2重组蛋白,以纯化的TREM2重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,每只小鼠免疫约100μg,制备多抗血清,通过Western-Blot证明该多抗血清可以识别猪源TREM2分子。本研究不仅为进一步研究猪TREM2在病原微生物感染中的作用做好铺垫,而且为揭示猪TREM2在猪呼吸性疾病中的作用奠定了基础。本研究分为叁个部分:1.猪TREM2基因的克隆与生物信息学分析随着TREM2分子在炎症反应中的作用越来越备受关注,尤其现在猪呼吸道疾病引起的炎症反应在我国兽医临床中的比例越来越大,其传播速度快,发病迅速,给养猪业带来巨大灾难。因此,研究猪TREM2分子在猪呼吸道炎症反应中的作用具有极大的前景。本研究根据Gen Bank预测的TREM2(NM_001256777.1)的全基因序列,利用primer5.0设计扩增引物,然后提取猪肺泡巨噬细胞RNA,反转录c DNA作为模板扩增TREM2全基因片段,通过测序验证扩增序列的正确性。与Gen Bank中的参考序列及其编码的氨基酸进行比对,同时将猪TREM2基因的序列分别于人和小鼠的TREM2序列进行遗传的差异性分析,构建了系统进化树,并分析其氨基酸的亲水性、跨膜区及B细胞抗原表位预测,旨在阐明TREM2蛋白抗原表位的分子生物学特性、系统进化关系、研制多克隆抗体和建立新型检测方法提供理论依据和实验依据。2.猪TREM2胞外区原核表达载体的构建、表达及纯化根据克隆到的猪TREM2分子及序列生物信息学分析结果,选取猪TERM2分子的胞外区进行原核表达,设计原核载体表达引物,将猪TERM2分子的胞外区连接到表达载体p ET-28a中。将重组表达载体转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中,通过对诱导表达条件的优化,确定最佳诱导表达条件。通过SDS-PAGE电泳检测重组蛋白表达情况,利用His-Trap镍离子螯合层析柱将重组蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳检测蛋白纯化情况。结果显示在0.4 mmol/L浓度的IPTG中表达14h可以使蛋白得到大量表达,并且纯化成功,为多克隆抗体的制备奠定了基础。3.抗猪TREM2多克隆抗体的制备及应用将纯化得到的重组蛋白与弗氏佐剂按1:1的比例混合乳化,免疫小鼠,免疫量约100μg/只,第四次免疫一周后采血,分离血清得到多克隆抗体。通过Western-Blot证明多克隆抗体的特异性,结果显示免疫得到的多克隆抗体不但能与猪源TREM2分子反应,还可以与真核表达载体表达的猪TERM2的全长反应(约31 KDa)。此次制备的抗猪TREM2分子的多克隆抗体为后续研究猪TREM2分子的功能奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-04-28）
陈为,李妍,李强,方芳,张宸豪[6]（2015）在《人EpCAM蛋白胞外区基因原核表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建人EpCAM蛋白胞外区基因原核表达载体。方法通过聚合酶链式反应来扩增人EpCAM分子胞外区的编码基因,将目的基因克隆至T载体,通过酶切反应构建pET32a-EpCAM和pcold-TF-EPCAM重组表达载体。结果 EpCAM胞外区基因成功与pET32a和pcold-TF质粒连接。结论本研究通过构建EpCAM胞外区的原核表达载体,为深入研究EpCAM分子的功能提供了实验基础。(本文来源于《吉林医药学院学报》期刊2015年06期）
宋凯杰,陈宗艳,黄云秀,李传峰,孟春春[7]（2015）在《鸭TLR3基因胞外区的原核表达及抗体制备》一文中研究指出采用PCR方法扩增鸭TLR3基因胞外区,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后,表达重组TLR3蛋白,并从包涵体中纯化重组蛋白。结果显示,PCR扩增得到972 bp的TLR3基因胞外区,用纯化的重组TLR3蛋白免疫实验兔,制备TLR3的多克隆抗体,用Western blot和ELISA检测其特异性及效价。本研究成功表达了TLR3基因胞外区,用该蛋白免疫实验兔后,制备的多抗能与TLR3特异性反应。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2015年05期）
杨媛,朱艳平,岳锋,孙国鹏,张艳芳[8]（2015）在《猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达》一文中研究指出为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。(本文来源于《动物医学进展》期刊2015年09期）
魏艳玲,郭爱疆,张学勇,王帅,骆学农[9]（2015）在《牛带绦虫胰岛素受体(TsaIR-4810)基因胞外区的克隆及表达》一文中研究指出目的:胰岛素信号通路是一条相对保守的信号传导途径,在细胞生长发育及代谢调控中发挥重要作用,并可以影响细胞与外界环境的相互作用。已有研究表明,寄生蠕虫不仅存在胰岛素样因子(insulin-like peptide,LP),同时还存在与哺乳动物同源性很高的胰岛素样受体(insulin receptor,IR)及下游分子,并能利用宿主胰岛素调节自身代谢和生长发育。目前,猪带绦虫(Taenia solium,Ts)、细粒棘球绦虫全基因组测序均已完成。本研究根据我们完成的牛带绦虫全基因组注释信息和Gene DB的相关数据,采用生物信息学比较分析了寄生蠕虫胰岛素受体的基因序列,并根据其保守区序列设计引物,从牛带绦虫总RNA中RT-PCR扩增出Tsa IR-4810基因的配体结合域(LBD,ligand binding domain),片段大小为1687bp。方法与结果:本研究根据我们完成的牛带绦虫全基因组注释信息和Gene DB的相关数据,采用生物信息学比较分析了寄生蠕虫胰岛素受体的基因序列,并根据其保守区序列设计引物,从牛带绦虫总RNA中RT-PCR扩增出Tsa IR-4810基因的配体结合域(LBD,ligand binding domain),片段大小为1687bp。Smart软件分析表明,该片段含有RL(receptor-L-domain)和FU(furin-rich repeat)组成的LBD区。将Tsa IR-4810的LBD区插入原核表达载体p ET-30a,构建重组表达质粒p ET-Tsa IR,转化入大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对表达条件进行优化。SDS-PAGE结果显示,获得与预期相符的67ku的重组蛋白,表明目的蛋白在大肠杆菌BL21中成功表达。在2×YT培养基中于30℃、IPTG终浓度0.3 m mol/L的条件下诱导6h,重组蛋白的表达量达到最大值,且主要以包涵体形式存在。裂解菌体后,用纯化的Tsa IR包涵体蛋白免疫家兔。Western-blot分析表明,该蛋白能刺激家兔产生相应的抗体,并能与阳性血清进行特异性免疫反应,证明表达蛋白具有良好的抗原性。结论:综上所述,本文对Tsa IR蛋白进行了初步研究,为进一步研究其与牛带绦虫胰岛素样因子的结合功能,以及对葡萄糖代谢的调节作用奠定了基础。(本文来源于《中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集》期刊2015-08-12）
郑凤霞,傅芬,蔡勇,叶称连[10]（2015）在《EGFR、蛋白激酶B在宫颈癌中表达及EGFR胞外区基因突变的研究》一文中研究指出目的:探讨宫颈癌中表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及EGFR胞外区基因突变的规律和临床意义,为宫颈癌的发生发展机制和靶向个性化治疗提供实验依据。方法:采用免疫组化SP法检测EGFR、Akt蛋白在16例正常宫颈组织、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和60例宫颈癌组织中的表达,并分析其与宫颈癌临床病理的关系。采用酚氯仿法抽提60例宫颈癌组织中DNA,PCR+DNA双向测序法检测EGFR胞外IV亚区基因突变。结果:正常宫颈组、CIN组及宫颈癌组中EGFR蛋白的阳性表达率分别为13.33%、43.33%及76.67%,Akt蛋白的阳性表达率分别为6.25%、35.00%及68.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中,EGFR表达水平与病理类型、细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄和淋巴结转移无关(P>0.05);Akt表达水平与细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄、病理类型和淋巴结转移无关(P>0.05)。60例宫颈癌中EGFR基因外显子15突变率为3.33%(2/60),突变类型G→A,未发现外显子14突变。宫颈癌组织中EGFR、Akt表达呈正相关性(r=0.556,P<0.05)。结论:EGFR、Akt可作为检测宫颈癌及癌前病变的重要参考指标,也为宫颈癌的多靶点联合治疗提供新思路;宫颈癌中EGFR胞外区可有基因突变,但突变率很低,关于其突变的规律和意义有待进一步研究。(本文来源于《现代妇产科进展》期刊2015年07期）
人胞外区基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的在真核生物酵母细胞中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因。方法以重组质粒pAdTrack-TLR2为模板,应用PCR方法扩增TLR2胞外区基因,克隆到pMD18-T载体中并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中并转化酵母菌Y187,测定其在Y187中的自激活现象及毒性,提取酵母蛋白质,行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果成功扩增出TLR2胞外区基因,测序结果与GenBank中序列一致。酶切回收的目的基因成功克隆入酵母表达载体pGBKT7中并转化酵母菌Y187后证实无重组质粒的自激活作用,Western blot分析显示该基因在酵母细胞中表达。结论成功构建了TLR2胞外区基因的酵母表达载体,并在酵母细胞Y187中正确表达,为后续研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人胞外区基因论文参考文献
[1].吕开绩,陈旭东,程开,王路得,朱进顺.小鼠PD-1及其配体PD-L1胞外区基因的原核表达及亲和性[J].温州医科大学学报.2018
[2].孙守勋,刘静,解立威,柏雪婷,单娜.人TLR2胞外区基因酵母表达载体的构建及表达研究[J].现代检验医学杂志.2018
[3].卢亚平.猪TREM2基因的克隆表达及针对猪TREM2胞外区多克隆抗体的制备[C].中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集.2016
[4].曹艳杰,何怡宁,唐宁,王海勇,张志鹏.叁黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达[J].南方农业学报.2016
[5].卢亚平.猪TREM2基因的克隆表达及针对猪TREM2胞外区多克隆抗体的制备[D].山东农业大学.2016
[6].陈为,李妍,李强,方芳,张宸豪.人EpCAM蛋白胞外区基因原核表达载体的构建及鉴定[J].吉林医药学院学报.2015
[7].宋凯杰,陈宗艳,黄云秀,李传峰,孟春春.鸭TLR3基因胞外区的原核表达及抗体制备[J].中国动物传染病学报.2015
[8].杨媛,朱艳平,岳锋,孙国鹏,张艳芳.猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达[J].动物医学进展.2015
[9].魏艳玲,郭爱疆,张学勇,王帅,骆学农.牛带绦虫胰岛素受体(TsaIR-4810)基因胞外区的克隆及表达[C].中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集.2015
[10].郑凤霞,傅芬,蔡勇,叶称连.EGFR、蛋白激酶B在宫颈癌中表达及EGFR胞外区基因突变的研究[J].现代妇产科进展.2015
论文知识图
