猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒3型二重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

论文摘要

为建立同时快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒3型(PCV3)的二重PCR方法,本研究根据GenBank中登录的PEDV M基因和PCV3 Rep基因高度同源保守序列设计并合成2对特异性引物,分别扩增PEDV M基因与PCV3 Rep基因,经过反应条件优化,建立了检测PEDV与PCV3的二重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:该方法对PEDV和PCV3的检测结果为阳性,而对猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒等8种常见的病原体均未检测到荧光信号;且具有良好的线性关系,R~2为0.99;应用本方法对PEDV和PCV3的最低检出量分别为37.6拷贝/μL和61.2拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%。结果表明:本试验建立的PEDV和PCV3二重实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效、定量检测PEDV和PCV3提供了技术帮助。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒株、菌株及临床样品
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物设计与合成
•   1.4 标准品的制备
•   1.5 荧光定量PCR反应条件优化及标准曲线的建立
•   1.6 特异性试验
•   1.7 敏感性试验
•   1.8 重复性试验
•   1.9 临床样品的检测
• 2 结果
•   2.1 标准品的制备结果
•   2.2 二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR反应条件的优化结果
•   2.3 荧光定量PCR标准曲线的建立
•   2.4 特异性试验结果
•   2.5 敏感性试验结果
•   2.6 重复性试验结果
•   2.7 临床样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韩昊莹,郑兰兰,田润博,赵宇,张鸿鑫,徐朋丽,陈红英

关键词: 猪流行性腹泻病毒,猪圆环病毒型,荧光定量

来源: 中国兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院,郑州市猪重大疫病防控重点实验室

基金: 河南省产学研合作计划资助项目(152107000003)

分类号: S852.651

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.04.02

页码: 615-621

总页数: 7

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