基于单抗捕获牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原ELISA方法的建立及应用

论文摘要

应用制备的牛病毒性腹泻病毒（BVDV） CC13B毒株E2蛋白的单克隆抗体与多克隆抗体,建立了基于单抗捕获牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea-mucosal disease virus,BVD-MDV）抗原的双抗体夹心ELISA方法。方阵试验确定的捕获BVDV抗原的单克隆抗体最佳抗体包被量为200 ng/孔,酶标多克隆抗体的最佳稀释浓度为1 000倍稀释。对100份BVDV阴性粪便样品进行检测与统计学处理,确定了夹心ELISA检测BVDV抗原的判定标准为待检样品D490值≥0.156 7时,检测结果判定为阳性。特异性、敏感性和重复性试验结果显示,建立的检测BVDV抗原的方法具有特异、敏感、快速及重复性好等特点。以建立的单抗捕获BVDV抗原的夹心ELISA方法,调查了山东、河南和吉林3省部分地区牛群BVDV感染情况,发现上述地区牛群的BVDV感染率低至6%。本研究结果为BVDV感染的诊断、检疫、净化及防制提供了有效的技术手段及流行病学理论依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 BVDV病毒株、粪便样品
•   1.2 BVDV CC13B毒株E2基因的扩增
•   1.3 BVDVE2基因的表达与纯化
•   1.4 抗E2单克隆抗体的制备
•   1.5 抗E2蛋白多克隆抗体的制备
•   1.6 E2单克隆抗体和多克隆抗体的抗原性鉴定
•   1.7 抗体纯化与HRP标记
•   1.8 捕获抗体包被量与酶标抗体最佳浓度的确定
•   1.9 判定标准的确定
•   1.10 特异性试验
•   1.11 敏感性试验及敏感性对比试验
•   1.12 重复性试验
•   1.13 牛群感染BVDV的调查
• 2 结果
•   2.1 CC13B E2基因的扩增及重组质粒的鉴定
•   2.2 E2重组蛋白的表达与纯化
•   2.3 抗E2单克隆抗体的制备与鉴定
•   2.4 E2单克隆抗体和多克隆抗体的抗原性鉴定结果
•   2.5 双抗体夹心ELISA方法最佳条件
•   2.6 双抗体夹心ELISA方法判定标准
•   2.7 特异性试验结果
•   1.8 敏感性及敏感性对比试验结果
•   2.9 重复性试验结果
•   2.10 牛群BVDV感染的调查
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡俊英,鲁海冰,常晓冉,李欣,马振乾,郭昌明,张泽财,王新平

关键词: 捕获夹心方法,流行病学调查,牛病毒性腹泻病毒

来源: 中国兽医学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林大学动物医学学院,教育部人兽共患病研究重点实验室

基金: “十三五”国家重点研发计划基金资助项目(2016YFD0500904,2017YFD0500104)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.03.05

页码: 401-407

总页数: 7

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