一种转基因猪血中重组人血清白蛋白分离纯化新方法

论文摘要

基因工程技术已经成为研究和生产重组人血清白蛋白(rHSA)替代人血清白蛋白(HSA)的重点技术,而白蛋白的纯化则是该技术的关键。本文主要介绍了从转基因猪血中纯化rHSA的一种新方法,即热乙醇沉淀与多级色谱分离相结合的rHSA纯化方法。热乙醇沉淀法可从猪血浆中获得rHSA粗提取液,此时rHSA的纯度可达69.5%,回收率达51.3%。进一步采用多级色谱分离法,即阴离子交换色谱和反相色谱法进一步纯化,得到rHSA的最终纯度约为100.0%,总回收率为41.1%。该方法为从转基因猪血浆中大规模纯化用于临床和生化研究的高纯度rHSA提供可能,同时也为rHSA替代HSA奠定了基础。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 仪器、试剂与材料
•   1.2 rHSA分离纯化方法
•     1.2.1 初步分离血浆
•     1.2.2 热乙醇沉淀法
•     1.2.3 多级色谱分离法
•       （1） 阳离子交换色谱:
•       （2） 弱阴离子交换色谱:
•       （3） 反相色谱:
•   1.3 rHSA纯度的表征方法
•     1.3.1 反相色谱法表征
•     1.3.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 （SDS-PAGE） 表征
•     1.3.3 液相色谱-串联质谱表征
•   1.4 rHSA的回收率
• 2 结果与讨论
•   2.1 rHSA分离纯化流程
•   2.2 热乙醇沉淀法
•     2.2.1 pH值的影响
•     2.2.2 加热温度的影响
•     2.2.3 恒温反应时间的影响
•     2.2.4 稀释倍数的影响
•   2.3 阴离子交换色谱法
•     2.3.1 流动相种类与盐浓度
•     2.3.2 流动相pH值的影响
•   2.4 反相色谱法
• 3结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 余谦,王勇,钱小红,秦伟捷,张普民,张养军

关键词: 重组人血清白蛋白,纯化,热乙醇沉淀法,多级色谱分离法

来源: 分析测试学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学

单位: 安徽医科大学研究生院,军事医学研究院生命组学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室,中国人民解放军陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室

基金: 国家重点基础研究发展计划(2017YFA0505002,2017YFC0906703),2016年度转基因新品种培育重大专项课题(2016ZX08009-003)

分类号: O652.6

页码: 539-545

总页数: 7

文件大小: 583K

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