导读:本文包含了重组菌株论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:菌株,蛋白,基因组,基因,复性,离子束,卡介苗。
重组菌株论文文献综述
张秀华,刘飞,刘英梅,陈勉,刘霞[1]（2019）在《重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化》一文中研究指出目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrap Heparin HP纯化,C2C12细胞检测活性。结果 rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1 L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20 g/L。采用稀释法复性,蛋白复性率大于40%,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95%以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性。结论成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本。(本文来源于《食品与药品》期刊2019年05期）
阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏[2]（2019）在《牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究》一文中研究指出金属硫蛋白(MT)作为一类广泛存在并高度可诱导的多功能内源性蛋白,具有重金属解毒、抗辐射、清除自由基等功能,近年来已成为研究和开发的热点。为解决MT原料来源的瓶颈问题,本文以一株海洋源MT重组巴斯德毕赤酵母菌株(GS~(-1)15-MT)为研究对象,对其进行培育条件(温度、pH、溶氧、接种量)、诱导表达条件(溶氧、甲醇浓度、菌株生产状况、诱导时间、诱导金属及浓度)综合优化,以获得MT高效表达最佳工艺。结果显示,GS~(-1)15-MT的最佳生长条件为培育温度30℃,培养基初始pH为9,摇床转速240r·min~(-1),接种量4%;最佳MT诱导发酵条件为摇床转速为220r·min~(-1),甲醇浓度为5%,菌液OD_(600)为9.7,诱导24h,Cu~(2+)诱导浓度50μmol·L~(-1)。在以上优化条件下,MT表达量达0.328mg·mL~(-1)。本结果可为海洋源MT的规模化工业生产提供一定理论依据。(本文来源于《生物产业技术》期刊2019年05期）
宫路路,柳陈坚,张宁,李洁[3]（2019）在《大肠埃希菌β-半乳糖苷酶重组菌株的筛选和培养条件研究》一文中研究指出目的筛选含有目的基因E. coli BL21/pET28a-bgaB-18(以下简称18号重组菌株)的β-半乳糖苷酶重组菌株并对其产酶条件进行优化。方法采用Kan琼脂平板培养基筛选和菌落PCR验证,得到整合短乳杆菌β-半乳糖苷酶基因的重组大肠埃希菌菌株。通过改变碳源、氮源的种类及其浓度,结合改变IPTG诱导剂浓度、重组菌株培养时间,摇床培养振荡速度等多种因素,在不同条件下采用液体振荡培养法培养重组大肠埃希菌。收集培养的重组菌液经离心后超声破碎,取上清液,测定重组菌株破碎细胞上清液酶活性,并根据酶活大小确定培养条件。结果筛选得到1株稳定表达β-半乳糖苷酶基因的重组菌株E. coli BL21/pET28a-bgaB-18。通过测定不同培养条件下破碎细胞上清液酶活性,确定该重组菌株最佳培养条件为:碳源为蔗糖,浓度7.0%;氮源为酵母粉,浓度2.0%;培养时间为7 h,诱导剂IPTG浓度为1.5 mg/ml,摇床转速为220 r/min。经优化的条件培养的重组菌酶活达156.2 U/ml,较诱导前酶活性为16.5 U/ml,提高约8.5倍。结论重组菌E. coli BL21/pET28a-bgaB-18在适宜碳源、氮源种类、浓度,IPTG浓度及培养时间条件下能稳定表达β-半乳糖苷酶,在食品和乳品加工等方面具有较好的应用前景。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年08期）
马玲玲,马臣杰,史客松,曾瑾[4]（2019）在《绿色荧光蛋白示踪产气荚膜梭菌Beta1毒素重组表达菌株的构建》一文中研究指出采用PCR技术分别扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)以及产气荚膜梭菌Beta1毒素基因(cpb1),并将egfp融合至cpb1基因的3'端,构建CPB1-EGFP重组质粒。为保证绿色荧光蛋白以及Betal毒素两个蛋白各自的功能,两者之间以柔性蛋白linker (Gly4Ser1)相连。结果表明,携带CPB1-EGFP重组载体的BL21(DE3)大肠杆菌具有绿色荧光,同时SDS-PAGE显示CPB1-EGFP蛋白是以可溶性蛋白形式存在的,分子量约为63KD,与理论值大小一致。本实验为利用绿色荧光蛋白示踪技术对Beta1毒素的组织嗜性以及亚细胞定位研究提供实验材料,为深入理解Beta1毒素对动物细胞以及机体的毒性机理奠定研究基础。(本文来源于《第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议会刊》期刊2019-08-16）
李婷[5]（2019）在《两株不含c-di-GMP代谢相关基因的重组卡介苗菌株引起的免疫应答对不同毒力的结核菌株的抵抗作用》一文中研究指出菌膜是一种生物膜,作为一种类似于结核分枝杆菌感染过程中出现的某些特征的结构,如抗生素耐药性和感染的长期性,以及作为感染豚鼠的体液反应抗原的来源,在结核病领域重新引起了人们的兴趣。有充分的证据表明,在其他细菌中,第二信使c-di-GMP调节从浮游细胞到生物膜形成的转变。在这项工作中,作者使用牛分枝杆菌活疫苗BCG来确定与c-di-GMP代谢相关的基因缺失是否会影响与巨噬细胞的相互作用,在小鼠细胞系和小鼠中诱导免疫应答的能力,以及在表面膜的(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2019年03期）
魏婷婷[6]（2019）在《产碱性蛋白酶菌株BN-2的鉴定及其重组酶的酶学性质表征》一文中研究指出蛋白酶是能将蛋白质降解为小肽和氨基酸的水解酶,碱性蛋白酶(Alkaline protease,AP)作为在碱性环境下活力较高、稳定性较好的一类蛋白酶,其在洗涤剂、生物修复、废物管理、摄影、诊断等工业中均有应用。微生物源碱性蛋白酶因生产成本低、生产率高可满足工业上的需求,成为碱性蛋白酶生产的重要来源,在微生物中,细菌和真菌是各种碱性蛋白酶的良好来源。目前,芽孢杆菌属细菌如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌等是适用于工业生产的主要产酶菌株。本文主要从自然环境中筛选出一株产酶活性较高的菌株,并对菌株中碱性蛋白酶进行了相关研究。首先,从自然发酵的大豆中分离出一株产蛋白酶活性较高的菌株BN-2,结合形态学、分子生物学鉴定该菌种为Bacillus subtilis subsp.natto BEST195。然后通过CTAB法成功提取了BN-2菌株中基因组DNA,利用PCR技术扩增出该菌株中碱性蛋白酶(Alkaline protease,AP)基因,插入pBE2R载体中,构建成重组表达载体pBE2R-AP,并转染枯草芽孢杆菌WB600进行分泌性表达。以糊精、可溶性淀粉作为碳源,每毫升发酵液中重组蛋白酶的酶活约是出发菌株中蛋白酶酶活的1.2倍。将pBE2R载体中p43启动子替换为BN-2菌株中碱性蛋白酶的p195启动子时,每毫升发酵液中p43启动子调控下的碱性蛋白酶酶活约是p195启动子调控下酶活的1.4倍。以酪蛋白为底物对该重组蛋白酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该酶的最适作用pH为8.0,在pH 8.0缓冲液中保存24 h,剩余酶活力达94%;该酶的最适作用温度为50℃,在50℃中处理30min时残余酶活力降至51%;1mmol/L的Mn~(2+)使该酶活性提高了48%,1mmol/L的Ca~(2+)使该酶活性提高了8%;洗涤剂组分中1%的TritonX-100对该酶活性有13%的抑制作用,1%的Tween20对该酶活性有8%的抑制作用,1%的Tween80对该酶活性有15%的抑制作用。(本文来源于《山西大学》期刊2019-06-01）
滕丽丽[7]（2019）在《含透明颤菌血红蛋白基因重组菌的构建及其对菌株发酵产槐糖脂的影响》一文中研究指出槐糖脂是一类由酵母菌产生的生物表面活性剂,与化学工业合成的表面活性剂相比,槐糖脂低毒或无毒,环境相容性好,具有良好的分散、乳化、增溶性能等优点,此外,还具有抗肿瘤、抗病毒、抑制白细胞增长等特点。良好的特性使槐糖脂在日化、石油、环境保护、医药等领域应用日益广泛。目前,限制槐糖脂工业化大规模制备和应用的主要因素是发酵成本过高,其中,发酵过程中氧气的供给和利用水平低导致油溶性底物利用率低、发酵周期长是限制其降低成本的关键因素之一。球拟假丝酵母在利用脂溶性碳源合成槐糖脂的过程中,脂肪酸的羟基化是槐糖脂合成的关键步骤,该反应需要消耗大量氧气,在高密度发酵过程中,菌体细胞生长和槐糖脂合成过程中溶解氧水平往往成限制因素。通过增加通气量、加快搅拌速度、提高罐压等方法改善发酵过程中的溶氧固然可行,但这些措施对设备强度等要求较高,且二氧化碳分压过高还会限制细胞的生长。因此,寻求一种即能增加细胞对氧气的利用效率又不需要大量耗能的手段势在必行。已有研究表明,透明颤菌血红蛋白(VHb)能够从分子水平上提高基因克隆菌对氧气的利用能力,其应用不仅可以降低氧气及能量的消耗,还不需要附加的设备投资,进而大大降低发酵成本。本研究利用现代分子生物学基因重组技术,将透明颤菌血红蛋白基因vgb的编码序列电转化导入球拟假丝酵母O-13-1菌株中,筛选到阳性转化子VHb~+,根据菌体颜色和CO差光谱法验证了VHb蛋白的生物学活性。含VHb基因重组菌的成功构建,为研究VHb对槐糖脂发酵的影响提供了实验材料。透明颤菌血红蛋白基因对槐糖脂发酵生产影响的研究结果显示,摇瓶实验中,重组菌株VHb~+槐糖脂产量高于原始菌株VHb~-;5L发酵罐发酵实验结果显示,在富氧条件(转速400 rpm、通气量1.0 vvm)下,二者的生物量和槐糖脂产量差异不大,但在槐糖脂合成阶段,VHb~+菌株的耗氧量比VHb~-菌株平均低21.8%;在贫氧条件(转速350 rpm、通气量1 vvm)下,VHb~+菌株在发酵过程中对溶氧的利用明显改善,其槐糖脂产量比VHb~-菌株提高了25.1%。采用qPCR方法研究了VHb的作用机理,结果显示,发酵24h时重组菌株VHb~+的TCA循环、呼吸链和槐糖脂合成关键酶基因相对表达水平相差不大,而72h时(槐糖脂生物合成的指数增长期),VHb~+菌株在这叁条代谢途径中的关键酶基因表达水平明显增加,表明vgb的表达通过增加TCA循环与呼吸链的活性,提高了细胞内氧气的利用效率,从而促进了槐糖脂的合成。综上所述,VHb基因的异源表达提高了菌株O-13-1对氧气的利用效率,提高了贫氧条件下的槐糖脂产量,是缓解低供氧对其槐糖脂发酵限制的有效方法。本研究通过单次单因素实验方法优化了重组菌株VHb~+的发酵溶氧条件,在转速、通气量和罐压分别为350 rpm、0.6 vvm和0.04 Mpa时有利于槐糖脂的发酵生产,该条件下的槐糖脂产量、生物量及发酵液中的溶氧相对较高,且最终槐糖脂呈透明状粘稠液体,易于通过自然沉降法分离。因此,在工业发酵中,保证发酵液中合适的溶氧,对提高槐糖脂的产量有重要意义。通过透明颤菌血红蛋白基因vgb在球拟假丝酵母O-13-1中的表达,从分子水平上增加了细胞内氧的传递速率,提高了氧的利用效率。这一策略,为解决槐糖脂发酵过程中供氧不足问题提供了一条新的途径,为节能降耗提供依据,具有良好的应用前景。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2019-05-21）
唐朝[8]（2019）在《低能离子束重组酵母菌株Ar_Han0458的有参转录组学研究》一文中研究指出为了进一步认识和了解通过低能离子注入介导外源转化获得的重组酵母Ar_Han0458的代谢及其转录调控的变化,利用生物信息学方法,基于离子束重组酵母Ar_Han0458及其原始菌株As2340在00h、24h、48h、72h、96h的Illumina转录组测序数据,对Ar_Han0458和As2340进行了转录组方面的比较分析。同时,对发生遗漏性可变剪接的mRNA的启动子区域进行了转录因子分析。差异基因分析结果表明从各发酵时间点与其他时间点相比较来看,在原始菌株As2340和重组菌株Ar_Han0458中,24/00、48/00、72/00、96/00、48/24、72/24的下调表达基因数量均大于上调表达基因数量,在其余时间对比中除了重组菌株Ar_Han0458在72/48上调基因数量和下调基因数量相等,其余均为上调表达基因数量大于下调表达基因数量。差异表达基因的GO富集分析结果显示23个生物学过程、7个细胞组分和10个分子功能为As2340和Ar_Han0458共有;20个生物学过程、6个细胞组分和3个分子功能为As2340特有;5个生物学过程、2个细胞组分和7个分子功能为Ar_Han0458特有。KEGG富集分析表明,特有代谢通路中,苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸生物合成为原始菌株As2340所特有,色氨酸的合成速率0h至72h上升,随后下降;而分解速率0h至48h上升,随后下降。10个差异表达基因参与Ar_Han0458的谷胱甘肽代谢,谷胱甘肽的合成速率分别在24 h和96 h达到峰值。可变剪接分析表明两个菌株的可变剪接均以外显子遗漏性剪接为主要类型,其在As2340和Ar_Han0458中分别占比88.87%、91.03%,其次是3`选择性剪接,两个菌株中均不存在RI。两种菌的可变剪接相关基因的GO二级条目在数量上保持一致,其中色素沉着为As2340特有,细胞增殖为Ar_Han0458特有,其余功能在不同程度上最多相差1~5条GO二级条目。Ar_Han0458及As2340其共有功能主要涉及通道运输和物质转运、催化活性及蛋白底物,而两种菌特有的功能大都为不同的亚基及底物蛋白。同时两个菌株中的差异可变剪接的基因的功能均为水通道蛋白和铜转运蛋白。外显子遗漏性可变剪接的转录因子分析结果表明,在离子束注入介导外源转化后,重组酵母菌株Ar_Han0458的启动子区域的模体相对原始菌株As2340减少一个,但是在重组酵母菌株Ar_Han0458的中新增两个与AP2/ERF区域相关的转录因子。本研究为人们进一步认识和理解低能离子对真核微生物的代谢及转录调控的作用机制提供了生物信息学证据,同时也为离子束重组菌株的次生代谢产物调控的进一步研究提供了理论依据。(本文来源于《新疆大学》期刊2019-05-19）
张寒玉[9]（2019）在《低能离子束重组酵母菌株Ar_Han0458的基因组学研究》一文中研究指出异常汉逊酵母具有高产乙酸乙酯的能力,且在较高温度的下具有较强的发酵力和酯化力,是酿造工业中的主要生香来源,同时也是常用的外源基因表达载体,用于离子注入介导的转基因研究。本研究使用PacBio叁代测序技术对离子束重组异常汉逊酵母菌Ar_Han0458及其原始菌株As2340进行了基因组de novo测序,应用生物信息学方法,从基因组结构与组分、基因功能、系统进化等方面开展了低能离子注入前后的异常汉逊酵母菌基因组学的研究。基因组de novo测序结果表明,低能离子注入前,异常汉逊酵母菌As2340的基因组大小为13,760,069bp,Contig N50长度为1,883,332bp,GC含量为34.53%;检测到总长为238,164bp的1,897条串联重复序列,散在重复序列108,253bp,重复序列长度占基因组的2.46%;预测到了932个非编码RNA基因;在预测的6,664个编码基因中,98.62%具有同源蛋白基因,其基因完整性达到91.7%;注释到KOG、KEGG和GO数据库的蛋白编码基因分别为4,391个、2,119个和3,580个,富集获得了3,937种GO功能(GO Term)。通过对低能离子注入后获得的离子束重组异常汉逊酵母菌Ar_Han0458的基因组de novo的测序结果进行分析,结果表明其基因组大小为13,646,815bp,Contig N50长度为1,346,975bp,分别比原始菌株减少了113,254bp和536,357bp,而GC含量与原始菌株相同。在重组菌株Ar_Han0458的基因组中检测到总长为227,825bp的1,874条串联重复序列,散在重复序列107,439bp,重复序列长度占其基因组的2.52%;预测到的非编码RNA基因和编码基因分别比原始菌株减少了25个和38个,GO功能缺失了44个。应用比较基因组学分析方法,以原始菌株As2340的基因组为参考基因组,对离子束重组菌株Ar_Han0458进行变异分析,结果表明,基因组发生SNP的碱基数目占基因组的0.15%,其中发生在基因中的SNP占比为34.50%;有17,779个位点发生了碱基插入或缺失,基因中InDel数目为5,997个,占全基因组的33.69%。离子束重组异常汉逊酵母菌Ar_Han0458及其原始菌株As2340与其它7种酵母菌进行基因家族聚类分析的结果表明,9株酵母菌共聚类成7,588个基因家族,使用其中的1,789个单拷贝同源基因构建系统发育树,结果显示,与异常汉逊酵母菌亲缘关系最近的是异常威克汉姆酵母,最远的是粟酒裂殖酵母。本研究结果进一步加深了人们对异常汉逊酵母菌基因组以及低能离子驱动的微生物变异机理的认识,为深入理解异常汉逊酵母菌的基因组特征以及分子生物学功能提供了理论依据,也为后续开展其遗传多样性研究奠定了理论基础。(本文来源于《新疆大学》期刊2019-05-19）
崔国贤[10]（2019）在《一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株的实验分析》一文中研究指出研究背景概述本文通过实验研制乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株,期望可以有效的治愈我国糖尿病患者。根据针对糖尿病中的免疫功能紊乱以及自由基毒素等致病因子对人体进行作用,从而降低人体机能中的胰岛素抵抗力以及胰岛功能,最终形成蛋白质、电解质以及脂肪等系列性代谢紊乱症状的分析。提出了(本文来源于《食品界》期刊2019年04期）
重组菌株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
金属硫蛋白(MT)作为一类广泛存在并高度可诱导的多功能内源性蛋白,具有重金属解毒、抗辐射、清除自由基等功能,近年来已成为研究和开发的热点。为解决MT原料来源的瓶颈问题,本文以一株海洋源MT重组巴斯德毕赤酵母菌株(GS~(-1)15-MT)为研究对象,对其进行培育条件(温度、pH、溶氧、接种量)、诱导表达条件(溶氧、甲醇浓度、菌株生产状况、诱导时间、诱导金属及浓度)综合优化,以获得MT高效表达最佳工艺。结果显示,GS~(-1)15-MT的最佳生长条件为培育温度30℃,培养基初始pH为9,摇床转速240r·min~(-1),接种量4%;最佳MT诱导发酵条件为摇床转速为220r·min~(-1),甲醇浓度为5%,菌液OD_(600)为9.7,诱导24h,Cu~(2+)诱导浓度50μmol·L~(-1)。在以上优化条件下,MT表达量达0.328mg·mL~(-1)。本结果可为海洋源MT的规模化工业生产提供一定理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组菌株论文参考文献
[1].张秀华,刘飞,刘英梅,陈勉,刘霞.重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化[J].食品与药品.2019
[2].阎光宇,余蕾,何建林,孙继鹏.牡蛎金属硫蛋白重组毕赤酵母菌株高效诱导表达工艺研究[J].生物产业技术.2019
[3].宫路路,柳陈坚,张宁,李洁.大肠埃希菌β-半乳糖苷酶重组菌株的筛选和培养条件研究[J].中国病原生物学杂志.2019
[4].马玲玲,马臣杰,史客松,曾瑾.绿色荧光蛋白示踪产气荚膜梭菌Beta1毒素重组表达菌株的构建[C].第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议会刊.2019
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[8].唐朝.低能离子束重组酵母菌株Ar_Han0458的有参转录组学研究[D].新疆大学.2019
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