蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

为建立检测蓝舌病病毒（BTV）和流行性出血病病毒（EHDV）的快速诊断方法,笔者根据BTV的第10基因节段（Seg-10）和EHDV的第5基因节段（Seg-5）序列,分别设计BTV与EHDV的特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件优化,建立了同时检测两种病毒的双重荧光定量RT-PCR方法,并进行了特异性、灵敏度、重复性和临床样品检测验证。用该方法对BTV Seg-10和EHDV Seg-5节段的体外转录ssRNA为模板绘制标准曲线,相关系数（R2）均大于0.995,线性关系较好;该方法可检测不同血清型的BTV和EHDV,与阿卡斑病病毒（AKAV）、中山病病毒（CHUV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、口蹄疫病毒（FMDV）和牛流行热病毒（BEFV）无交叉反应,表明该方法特异性强;对2种标准品的检出极限均为10 copies/uL,比常规RT-PCR敏感性高10倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%;用所建立的双重荧光定量RT-PCR方法及常规RT-PCR方法,对100份血液样品和50份病毒液分别进行检测,符合率均大于90%。以上结果表明所建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有快速、准确、敏感和稳定等优点,为BTV和EHDV感染的早期快速诊断、高通量检测及流行病学调查提供了有效的技术方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 毒株与质粒
•   1.2 主要试剂和与仪器
•   1.3 引物和探针的设计及合成
•   1.4 标准品的制备
•   1.5 双重荧光定量RT-PCR反应条件的优化
•   1.6 标准曲线的绘制
•   1.7 特异性试验
•   1.8 敏感性试验
•   1.9 重复性试验
•   1.1 0 临床样本的检测
• 2 结果
•   2.1 标准品的制备
•   2.2 双重荧光定量RT-PCR方法的建立与优化
•   2.3 标准曲线的绘制
•   2.4 特异性试验
•   2.5 敏感性试验
•   2.6 重复性试验
•   2.7 双重荧光定量RT-PCR的应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨振兴,朱建波,李占鸿,李卓然,何于雯,谢佳芮,李华春,廖德芳,杨恒

关键词: 蓝舌病病毒,流行性出血病病毒,双重荧光定量

来源: 中国兽医科学 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

基金: 国家重点研发计划项目（2017YFC1200505,2016YFD0500908）,云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目（2017HB055）

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0150

页码: 1104-1111

总页数: 8

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