导读:本文包含了加味三棱丸论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:加味叁棱丸,原发性痛经,氧化应激,疼痛
加味三棱丸论文文献综述
蔡卉,韩小波,徐静静[1]（2019）在《加味叁棱丸治疗原发性痛经模型大鼠的机理研究》一文中研究指出目的:研究加味叁棱丸对原发性痛经模型大鼠的影响。方法:选取60只SD雌性大鼠,随机分为6组,正常对照组、模型组、布洛芬(20 mg/kg)阳性对照组及加味叁棱丸低(1.5 g/kg)、中(3.0 g/kg)、高(6.0 g/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外,各组大鼠制备原发性痛经模型,各给药组灌胃给药,1次/d,模型组与正常对照组灌胃生理盐水,连续给药7 d。观察各组给药前后的扭体次数、给药后的宫缩抑制率和子宫指数,采用ELISA法检测大鼠血清GSH-Px、SOD、MDA、8-OHdG、PGE_2、6-K-PGF_(1α)、ET、IL-1、IL-6、TNF-α水平,采用ELISA法检测各组大鼠子宫组织PGE_2、6-K-PGF_(1α)水平。结果:治疗前,与正常对照组比较,模型组扭体次数显着增多(P<0.05),模型组及各给药组的扭体次数相当(P>0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型组扭体次数、子宫指数及血清8-OHdG、PGE_2、6-K-PGF_(1α)、ET、MDA、IL-1、IL-6、TNF-α和子宫组织中PGE_2、6-K-PGF_(1α)显着升高,子宫收缩抑制率和血清GSH-Px、SOD显着降低(P<0.05)。与模型组比较,除加味叁棱丸低剂量组外各给药组扭体次数、子宫指数及血清8-OHdG、PGE_2、6-K-PGF_(1α)、ET、MDA、IL-1、IL-6、TNF-α和子宫组织中PGE_2、6-K-PGF_(1α)均显着降低,子宫收缩抑制率和血清GSH-Px、SOD均显着升高(P<0.05)。结论:加味叁棱丸通过改善痛经大鼠的氧化应激、疼痛指标和炎症因子等可能机理治疗原发性痛经。(本文来源于《中药材》期刊2019年03期）
李傲,汪莹,董伟,徐晓玉[2]（2010）在《加味叁棱丸对子宫内膜异位症雌激素生成及内膜侵袭能力的影响》一文中研究指出目的:明确加味叁棱丸(SLW)抗子宫内膜异位症(内异症)雌二醇生成的作用,并探讨其在SLW抑制内膜细胞侵袭过程中所起的关键作用。方法:培养子宫肌瘤和内异症患者在位子宫内膜细胞,以子宫肌瘤为对照,内异症在位内膜细胞经SLW大鼠血清高、中、低剂量处理后,分别在不同的时间点采用电化学发光免疫法检测雌二醇(E2)的分泌水平;明胶酶谱法分析内膜细胞分泌的基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,9)活性,细胞免疫荧光法观察组织型金属蛋白酶抑制剂1,2(TIMP-1,2)蛋白的表达;通过时效关系的考察,明确SLW抑制内膜细胞侵袭能力的最佳时间后,重新分为6组:子宫肌瘤组、内异症组、内异症+SLW中剂量组、内异症+SLW中剂量+雌二醇组、内异症+阿那曲唑血清组和内异症+雌二醇组,分别在最佳时间点检测各组细胞分泌的MMP-2,9活性及TIMP-1,2蛋白表达水平。结果:SLW高、中剂量可明显降低内异症在位内膜细胞分泌E2的水平,并呈时间和浓度依赖性;内异症组在各检测时间内,分泌的MMP-2,9活性明显高于子宫肌瘤内膜组(P<0.01);经SLW血清中剂量处理48 h后,与空白对照组比较,内异症在位内膜细胞分泌的MMP-2,9活性明显降低(P<0.01),而TIMP-1,2蛋白的表达明显升高(P<0.01);当SLW中剂量与雌二醇2.70 ng.L-1联合处理48 h后,内异症在位内膜细胞被SLW降低的侵袭能力可被反向添加的雌二醇部分恢复;其中,MMP-2活性、TIMP-1,2蛋白表达与空白组比较,已无显着性差异;而单独进行雌二醇处理,可进一步增加内异症内膜细胞的侵袭能力,特异性芳香化酶抑制剂阿那曲唑与雌二醇的作用恰好相反。结论:SLW可抑制内异症在位内膜细胞的侵袭能力,其作用与SLW降低内膜细胞雌二醇的分泌密切相关。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2010年12期）
李傲,汪莹,徐晓玉[3]（2010）在《加味叁棱丸抗子宫内膜异位症雌激素生成作用及对内膜细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的:研究加味叁棱丸(SLW)对子宫内膜异位症(内异症)雌二醇(E2)生成的抑制作用,并探讨其诱导内异症内膜细胞凋亡的机制。方法:培养子宫肌瘤和内异症患者在位子宫内膜细胞,以子宫肌瘤内膜细胞为对照,内异症在位内膜细胞经含SLW大鼠血清高、中、低剂量处理后,分别在不同的时间点采用电化学发光免疫法检测E2的分泌水平;流式细胞术和TUNEL法检测细胞的早期和晚期凋亡率;通过时效关系考察,明确SLW诱导内异症在位内膜细胞早、晚期凋亡的最佳时间后,重新将培养的内膜细胞分为6组:子宫肌瘤组、内异症组、内异症+SLW血清中剂量组、内异症+阿那曲唑血清组、内异症+SLW血清中剂量+雌二醇组和内异症+雌二醇组,在最佳时间点检测各组细胞的早期和晚期凋亡率。结果:SLW可显着降低内异症在位内膜细胞分泌E2的水平,并呈浓度和时间依赖性。子宫肌瘤组内膜细胞的早、晚期凋亡百分率随时间延长而增加,并显着高于同时间点的内异症组(P<0.05或P<0.01);经SLW血清中剂量处理72、96 h后,内异症在位内膜细胞的早、晚期凋亡百分率分别为(35.67±1.73)%和(57.56±1.09)%,较其他处理时间的诱导作用显着;当SLW血清中剂量与雌二醇5.30 ng/L联合处理72 h或与雌二醇6.36 ng/L联合处理96 h后,细胞的早、晚期凋亡百分率分别降低至(11.25±2.00)%和(7.72±0.71)%,与SLW血清中剂量比较,差异显着(P<0.01),添加的雌二醇浓度未能完全抑制SLW诱导内异症内膜细胞的凋亡;单独给予雌二醇5.30、6.36 ng/L进行处理,内异症内膜细胞的早、晚期凋亡百分率有进一步降低的趋势,但无统计学意义(P>0.05),芳香化酶抑制剂阿那曲唑与雌二醇的作用恰好相反。结论:SLW可能通过降低内异症在位内膜细胞分泌雌二醇的水平,发挥其诱导内膜细胞凋亡的作用。(本文来源于《中药材》期刊2010年03期）
李傲,况刚,汪莹,徐晓玉[4]（2009）在《加味叁棱丸对人子宫内膜异位症内膜雌激素分泌及血管生成的影响》一文中研究指出目的研究加味叁棱丸(SLW)对子宫内膜异位症(内异症)内膜细胞雌二醇分泌及血管内皮生长因子(VEGF)表达、分泌水平的影响,并进一步探讨其抑制血管生成能力的机制。方法培养子宫肌瘤和内异症病人在位子宫内膜细胞。以子宫肌瘤为对照,内异症在位内膜细胞分别经SLW高、中、低剂量(5.0、2.5、1.25g·kg-1·d-1,ig,bid×7d)给药大鼠血清处理后,在不同的时间点采用电化学发光免疫法检测内膜细胞雌二醇的分泌水平;采用免疫印迹(Western blot)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法,考察SLW中剂量(2.5g·kg-1·d-1)对VEGF表达和分泌的时效关系,明确SLW2.5g·kg-1·d-1抑制VEGF表达和分泌的最佳时间。随后设子宫肌瘤对照组,并将内异症在位内膜细胞分为:内异症对照组、SLW(2.5g·kg-1·d-1)组、阿那曲唑组、SLW(2.5g·kg-1·d-1)+雌二醇组和雌二醇组,并按上述方法在最佳时间点检测VEGF蛋白的表达及分泌水平。结果SLW高、中剂量可显着降低内异症在位内膜细胞分泌的雌二醇水平,并呈时间及剂量依赖性(P<0.01)。Western blot和ELISA法检测结果显示,内异症对照组在各检测时间内,VEGF蛋白的表达和分泌水平均明显高于子宫肌瘤对照组(P<0.01),经SLW2.5g·kg-1·d-1给药小鼠的血清处理24h后,VEGF蛋白的表达和分泌水平较内异症对照组显着降低(P<0.01);SLW2.5g·kg-1·d-1给药小鼠的血清与1.34ng·L-1雌二醇联合处理24h后,被SLW抑制的VEGF蛋白表达和分泌水平可被反向添加的雌二醇部分或完全恢复;雌二醇单独处理24h,VEGF蛋白的表达和分泌水平较内异症对照组明显增高(P<0.01),而阿那曲唑(0.1mg·kg-1·d-1)的作用恰好相反。结论SLW可能通过降低内异症在位内膜细胞雌二醇的分泌水平,从而降低VEGF的表达和分泌,发挥其抑制血管生成的作用。(本文来源于《中国新药与临床杂志》期刊2009年11期）
李卓恒,李傲,陈刚,何瑶,王静[5]（2009）在《加味叁棱丸对子宫内膜异位症粘附分子ICAM-1,CD44表达的影响》一文中研究指出目的:研究加味叁棱丸(SLW)对子宫内膜异位症移植物的抑制作用和探讨对粘附分子ICAM-1、CD44表达的影响。方法:采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,用游标卡尺、HE染色和免疫组化分别检测子宫内膜异位症移植物体积变化、异位内膜组织形态学改变和粘附分子ICAM-1,CD44的表达。结果:SLW0.11g·kg~(-1)、1.02 g·kg~(-1)均可以明显减小子宫内膜异位症移植物的体积;显微形态显示:给药组与模型组比较其病理改变程度减轻,异位内膜为薄单层细胞排列而非腺体数目多,细胞呈多层排列,腺上皮呈扁平或矮立方形,未见假腺体改变;SLW1.02g·kg~(-1)、0.11g·kg~(-1)均能明显降低了异位子宫内膜粘附分子ICAM-1和CD44的蛋白表达。结论:SLW可显着抑制子宫内膜异位症移植物生长,其作用机制可能与抑制粘附分子ICAM-1和CD44的蛋白表达水平有关。(本文来源于《第二届临床中药学学术研讨会论文集》期刊2009-07-22）
李卓恒,李傲,陈刚,何瑶,王静[6]（2009）在《加味叁棱丸对子宫内膜异位症黏附分子ICAM-1,CD44表达的影响》一文中研究指出目的:研究加味叁棱丸(SLW)对子宫内膜异位症移植物的抑制作用和探讨对黏附分子ICAM-1,CD44表达的影响。方法:采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,用游标卡尺、HE染色和免疫组化分别检测子宫内膜异位症移植物体积变化、异位内膜组织形态学改变和黏附分子ICAM-1,CD44的表达。结果:SLW 0.11,1.02 g.kg-1均可以明显减小子宫内膜异位症移植物的体积;显微形态显示:给药组与模型组比较其病理改变程度减轻,异位内膜为薄单层细胞排列而非腺体数目多,细胞呈多层排列,腺上皮呈扁平或矮立方形,未见假腺体改变;SLW 1.02,0.11 g.kg-1均能明显降低了异位子宫内膜黏附分子ICAM-1,CD44的蛋白表达。结论:SLW可显着抑制子宫内膜异位症移植物生长,其作用机制可能与抑制黏附分子ICAM-1,CD44的蛋白表达水平有关。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2009年10期）
李卓恒[7]（2009）在《加味叁棱丸的毒理及其对子宫内膜异位症的治疗作用研究》一文中研究指出背景:加味叁棱丸(以下简称SLW)是经本团队研究治疗子宫内膜异位症有效的一种中药复方制剂,前期工作进行了该制剂对子宫内膜异位症大鼠的主要药效学试验,本文观察了SLW的毒理作用,并进一步进行了药效学及其相关机制的研究,旨在为将其研制成为中药新药奠定基础。目的:1、毒理研究观察SLW对小鼠一次性口服给药的毒性反应并得出药物对小鼠的半数致死量(LD50);观察SLW对雌性大鼠6个月长期毒性过程中一般行为及身体指标的影响,以及对动物血液学指标、血液生化学指标、脏器系数的影响,找出无毒性反应的剂量及药物毒性靶器官,并观察其病理学变化情况。2、药效学及其机制研究观察SLW对正常大鼠血液雌激素、孕激素水平的影响和对大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的改变;观察SLW对模型大鼠子宫异位内膜的病理形态学改善作用,及其对异位内膜黏附因子ICAM-1、CD44表达的影响。以探讨SLW抗子宫内膜异位症的疗效及其机制。方法:1、SLW急性毒性观察用改良寇氏(Korbor)法进行实验,确定小鼠给药后D0%(动物全部不死的剂量)和D100%(动物全部死亡的剂量),分别作为正式实验的最低剂量和最高剂量。将此最高、最低剂量换算为常用对数,然后将最高、最低剂量的对数差,按所需要的组数随机分为8个对数等距的剂量组,每组10只小鼠,雌雄各半。给药后至少观察2周,每天观察一次,详细记录每只动物各种毒性反应出现和消失的时间,观察神经系统、呼吸系统、消化系统、生殖系统、皮毛、眼、体重及是否消瘦拒食物等。所有动物包括死亡或处死的动物均进行尸检,尸检异常的器官用10%中性甲醛固定作病理组织学检查。详细、及时的记录中毒和死亡发生的时间、持续的时间、恢复的时间和死亡动物的时间分布。计算LD50(半数致死量)及其95%的可信限,换算人用剂量的范围。2、SLW长期毒性观察取雌性健康大鼠160只,随机分为4组,即溶剂对照组、SLW高剂量组、中剂量组、低剂量组,分别给予SLW:1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg,空白对照组给予等量蒸馏水,每组40只。按以上剂量等容灌胃给药6个月,每周连续给药6天。分别于给药3个月,6个月时末次给药24小时后,活杀动物10只,14只,进行各项指标测试。剩下的继续观察30天作为恢复期,恢复期后处死剩下的动物检测各项指标,与前几批处死大鼠的各项指标比较,进行毒性反应的可逆性和延迟性观察。具体指标包括:外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量等一般指标,血液学指标,血液生化指标,系统尸解和组织病理学检查,脏器称重和脏器系数测定,体重测定。3、SLW对血中E2、P水平及垂体和卵巢中ERα蛋白表达的影响取雌性大鼠72只,随机分为对照组、SLW 250 mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg组,每组18只。连续灌胃给药6各月,每周灌胃6天。分别于给药第3月末、6月末、停药后1月处死动物,测定大鼠血液中雌激素(E2)和孕酮(P)的水平,取脑垂体和卵巢,常规石蜡包埋、切片,免疫组化法观察动物垂体和卵巢中雌激素受体(ERα)蛋白的表达情况。4、SLW对子宫内膜异位症大鼠异位移植物和黏附分子表达的影响采用自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,以移植物的外观、大小及病理检查为模型成功的依据。除正常对照组外,将造模成功的大鼠随机分为SLW 80mg/kg/d组、240mg/kg/d组、720mg/kg/d组、200mg/kg/d孕叁烯酮组、模型对照组,灌胃给药,每天1次,连续4周。4周后结束治疗,观察阴道细胞学涂片后处死大鼠,观察异位内膜生长情况,切取在位子宫与异位子宫内膜,HE染色进行形态学病理检察。免疫组化法检测黏附分子ICAM-1、CD44的表达。结果:1、SLW小鼠口服给药急性毒性SLW口服给药小鼠D0%=2400mg/kg,Dmin(最小致死量)=2600mg/kg,D100%(完全致死量)=9800mg/kg , LD50 = 5414.58mg/kg , LD50的95%的可信限为:5292.34~5536.82 mg/kg。按照文献[15]换算分别相当于人的口服剂量为303.60mg/kg、1239.7mg/kg、694.84mg/kg。动物给药后的毒性症状有:少动、精神萎靡、拒食、爬笼、跳起、呼吸徐缓、困难、潮式呼吸、上眼睑下垂后腿抽搐等。死亡动物尸检,主要脏器肉眼观察无明显的病变,HE染色观察,除肝脏有轻微病变外,其它脏器无明显病理变化,提示SLW对小鼠的急性毒性较轻。2、SLW大鼠口服长期毒性SLW连续给药3个月及6个月,结合血象、生化、脏器系数、病理分析,并与停药1个月后检测动物的各项指标相比, SLW对大鼠的一般行为指标,一般生理指标,血象指标,脏器系数及脏器病理检查均没有明显的影响。表明,加味叁棱丸为一种安全性高的中药复方制剂,动物试验得出在1000mg/kg剂量下安全。3、SLW对血中E2、P水平及垂体和卵巢中ERα蛋白表达的影响分别于给药3个月、6个月、及停药1个月后,检测大鼠血中雌激素(E2)和孕酮(P)水平,其结果500mg/kg组、1000mg/kg组大鼠血中E2水平与正常对照组比较,显着升高(P<0.05);500mg/kg组、1000mg/kg组大鼠血中P水平与正常对照组比较,显着降低(P<0.05)。用免疫组化法检测脑垂体和卵巢中雌激素受体(ERα)的蛋白表达,ERα阳性细胞全细胞染色为棕黄色,SLW给药后主要表达于脑垂体的嗜碱性粒细胞,卵巢的各级生长卵泡颗粒及黄体细胞。给药后,SLW 250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg组ERα阳性细胞表达较对照组明显减少,阳性的棕黄色减轻,且在停药后不能恢复。免疫组化图像分析结果显示,给药后SLW 250 mg/kg、SLW 1000mg/kg组脑垂体和卵巢中ERα阳性细胞累积积分光密度值(IOD值)与溶剂对照组相比减少,有显着性差异,停药1个月后仍不能恢复。4、SLW对子宫内膜异位症大鼠异位移植物和黏附分子表达的影响显微镜下形态显示,给药组与模型组比较其病理改变程度减轻,异位内膜为薄单层细胞排列而非腺体数目多,细胞呈多层排列,腺上皮呈扁平或矮立方形,未见假腺体改变;免疫组化结果SLW 240 mg/kg、720 mg/kg组均能明显降低了异位子宫内膜粘附分子ICAM-1和CD44的蛋白表达。结论:1、小鼠急性毒性试验口服一次性给药LD50为5414.58/kg,相当于动物有效剂量的22.56倍。SLW连续给药180天,结合体重及其增长、血液学、血液生化学、脏器指数、病理结果综合分析,提示改药物对血象、血液生化没有明显的影响,没发现明显的脏器毒性靶点,对动物的一般行为、摄食量及体重无明显影响,毒性反应较轻。总之,SLW的毒性较低,是较为安全的中药复方制剂。2、SLW能显着降低大鼠血中雌激素水平,显着升高孕激素水平,能明显减少雌性大鼠脑垂体及卵巢中雌激素受体(ERα)的蛋白表达,提示其使雌激素减少的机制与SLW对动物下丘脑-垂体-卵巢轴的抑制作用有关。3、SLW能减轻子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜的病理变化,其作用机制与减少异位内膜粘附分子ICAM-1和CD44的表达有关。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2009-05-01）
李卓恒,李傲,陈刚,陈怡,徐晓玉[8]（2008）在《加味叁棱丸对子宫内膜异位症粘附分子ICAM—1，CD44表达的影响》一文中研究指出目的;研究加味叁棱丸(SLW)对子宫内膜异位症移植物的抑制作用和探讨对粘附分子ICAM—1、CD44表达的影响。方法:采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,用游标卡尺、HE染色和免疫组化分别检测子宫内膜异位症移植物体积变化、异位内膜组织形态学改变和粘附分子ICAM—1,CD44的表达。结果:SLW各给药组明显减小了子宫内膜异位症移植物的体积,减轻了其病理程度,可观察到给药组异位内膜为薄单层细胞排列,腺体数目少.未见假腺体改变;SLW高、中剂量组明显降低了异位子宫内膜粘附分子ICAM—1和CD44的蛋白表达。结论:SLW可显着抑制子宫内膜异位症移植物生长,其作用机制可能与抑制粘附分子ICAM—1和CD44的蛋白表达水平有关。(本文来源于《2008年成渝药学学术年会论文集》期刊2008-11-01）
李傲,徐晓玉,王慧,董伟,汪莹[9]（2008）在《加味叁棱丸含药血清对子宫内膜异位症内膜细胞芳香化酶及环氧合酶-2的影响》一文中研究指出目的:观察子宫肌瘤与子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜芳香化酶(aromatase)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达上的差异,探讨加味叁棱丸(SLW)含药血清对内异症在位内膜芳香化酶、COX-2表达的影响。方法:Western blot和RT-PCR方法分别检测子宫肌瘤组、给予SLW含药血清前后内异症组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达,发光免疫分析法及放射免疫分析法分别检测上述各组细胞上清中雌二醇及前列腺素E2的含量。结果:以未给药的内异症内膜组为对照,子宫肌瘤组芳香化酶、COX-2 mRNA蛋白的表达,分泌雌二醇及前列腺素E2水平均明显低于对照组,差异有显着性(P<0.05)。SLW5.0,2.5g·kg-1·d-1组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达低于对照组,差异有显着性或极显着性(P<0.05或P<0.01)。SLW1.25g·kg-1·d-1组芳香化酶mRNA和蛋白、COX-2蛋白的表达也明显低于对照组(P<0.01),但COX-2 mRNA的表达与对照组比较差异无显着性(P>0.05)。SLW5.0,2.5,1.25g·kg-1·d-1组分泌的雌二醇和前列腺素E2水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:SLW可抑制子宫内膜异位症在位内膜细胞芳香化酶和COX-2的表达,从而降低局部雌激素及前列腺素E2的水平。(本文来源于《中国医院药学杂志》期刊2008年09期）
李傲[10]（2008）在《加味叁棱丸对子宫内膜异位症雌激素生成的影响及机制研究》一文中研究指出背景子宫内膜异位症(以下简称内异症)是生育年龄妇女的常见良性疾病。它可浸润病灶周围的正常组织,治疗后易于复发,具有一定的“恶性”行为。近年来发病率有逐年升高趋势,成为妇科疾病中的热点问题。尽管EMS的发病机制仍未阐清,但在经血逆流“种植学说”的基础上,越来越多的资料表明,EMS患者的在位内膜存在与异位内膜相似而与正常内膜迥异的遗传和功能特性。因此我们推测,在位内膜是EMS病变的源头,而直接干预在位内膜可达到防治EMS的效果。内异症是一种雌激素依赖性疾病,雌激素的合成代谢在内异症疾病的发生、发展中占有重要的地位。既往研究提示,加味叁棱丸有效成分(以下简称SLW)具有良好的抗子宫内膜异位症作用。因此,以“EMS是雌激素依赖性疾病”为切入点,探讨SLW源头治疗内异症的作用靶点及机制,可为其早日成为新的内异症治疗药物提供基础研究依据。目的观察SLW对内异症在位内膜雌二醇生成水平的影响,及其对参与雌二醇生成过程中恶性正反馈循环的关键酶及转录因子的影响;观察SLW对大鼠异位子宫内膜的发展、雌二醇生成、粘附及抗凋亡能力的影响,并进一步探讨SLW抑制内异症内膜细胞中雌二醇的生成在其抗子宫内膜异位症中的关键作用机制。方法1.培养内异症和非内异位症在位内膜(Eu and En)细胞,分为非内异症内膜细胞组、内异症内膜细胞组、SLW 170μg/ml组、17μg/ml组、1.7μg/ml组及0.1mg/kg阿那曲唑组。采用WST-8法检测SLW对Eu和En细胞增殖情况的影响,RT-PCR法和western blot检测En细胞及SLW处理后的Eu细胞中细胞色素P450芳香化酶(P450 arom)、环氧合酶-2(COX-2),类固醇类生成因子-1(SF-1)、小鸡卵清蛋白上游启动子转录因子(COUP-TF)mRNA及其蛋白的表达,17-β-羟甾类脱氢酶1,2(17-β-HSD 1,2)mRNA的表达情况;细胞免疫荧光法观察En细胞及SLW处理后的Eu细胞中SF-1和COUP-TF蛋白的表达,电化学发光免疫法和放射免疫法分别检测SLW对Eu细胞培养液上清中雌二醇(E2)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响。2.选择动情期大鼠行子宫内膜自体移植术,建立大鼠子宫内膜异位症疾病模型,取移植物积液高度≥2mm,病理学检查有子宫内膜组织生长的成功模型动物,分为SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组、0.1mg/kg阿那曲唑组、模型对照组,同时设立正常对照组。用药前经统计学检验,除正常对照组外,各组异位内膜体积间无显着性差异。灌胃给药,每天1次,连续28天。检测异位内膜体积,常规HE染色,免疫组织化学法和western blot检测异位组织中P450 arom和COX-2蛋白的表达;电化学发光免疫法和放射免疫法分别观察SLW对异位内膜组织中E2和PGE2水平的影响;免疫组织化学法和TUNEL法分别检测SLW对大鼠异位子宫内膜中细胞间粘附分子(ICAM-1)蛋白表达及细胞凋亡的影响。3.首先将内膜细胞分为非内异症内膜细胞对照组、内异症内膜细胞对照组和SLW 17μg/ml组,采用结晶紫染色法检测内膜细胞的粘附能力,明胶酶谱法分析内膜细胞分泌基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,9)及其酶原的活性,细胞免疫荧光法观察组织型金属蛋白酶抑制剂1,2(TIMP-1,2)蛋白的表达,ELISA法检测内膜细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量,流式细胞术和TUNEL法分别检测内膜细胞早期和晚期凋亡率。同时选取SLW的各测定指标最佳作用时间点,作为后续实验的检测时间点。随后,将SLW 17μg/ml与终浓度为1.34pg/ml～6.36pg/ml的雌二醇进行联合干预,并同时设计0.1μg/ml阿那曲唑组和终浓度为1.34pg/ml～6.36pg/ml的雌二醇组作为正反对照,在各检测时间点上按照上述方法对各项指标进行检测。结果1. WST-8法结果提示,体外培养的Eu细胞在各时相点的增殖速度,明显高于En细胞(P<0.05),但SLW对Eu细胞的增殖能力没有显着的影响;SLW 170μg/ml和17μg/ml组在作用48h、72h和96h时,分泌雌二醇的水平较Eu细胞对照组明显降低,差异显着(P<0.05)。而SLW 1.7μg/ml组仅在96h时显着降低内异症在位内膜细胞分泌雌二醇水平,其余各时间点与Eu细胞对照组比较,差异无显着性(P>0.05)。western blot和RT-PCR结果显示,给予SLW 170μg/ml、17μg/ml和1.7μg/ml 48h后的Eu细胞,P450 arom、COX-2、SF-1蛋白和mRNA表达较Eu细胞对照组明显降低,而COUP-TF蛋白和mRNA表达显着升高(P<0.05);细胞免疫荧光结果也显示,SLW 170μg/ml、17μg/ml组SF-1阳性细胞累积光密度值与Eu细胞对照组比较显着降低,而COUP-TF阳性细胞累积光密度值显着升高(P<0.05),与western blot和RT-PCR半定量分析结果一致。同时,放射免疫法结果显示,SLW 170μg/ml、17μg/ml和1.7μg/ml组细胞上清中PGE2的浓度,明显低于Eu细胞对照组(P<0.05)。RT-PCR结果同时显示,经SLW处理后, Eu细胞中HSD-1 mRNA表达显着减少,而HSD-2 mRNA表达明显升高,与Eu细胞对照组比较差异显着(P<0.05)。2.造模28天后,腹壁移植物体积增大,出现液体积聚,呈隆起透明的小囊状,被结缔组织或大网膜覆盖并有血管形成。以抑制物积液高度≥2mm,病理学检查有子宫内膜组织生长为模型成功标准,42只大鼠中40只符合上述标准,造模成功率为95.24%。SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组的移植物体积与模型对照组相比明显减小,差异显着(P<0.05)。HE染色光镜下观察模型对照组异位内膜腺上皮细胞呈高柱状或矮柱状,排列在囊泡内腔面,细胞间连接较紧密,细胞核大,呈椭圆形,位于基底部,胞浆丰富,内膜间质丰富,其中有个别部位上皮层内陷形成假腺体;SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组和0.1mg/kg阿那曲唑组的内膜腺上皮层明显变薄,细胞呈矮柱状甚至扁平状,松散排列。免疫组织化学和western blot结果显示,SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组异位内膜组织中P450 arom蛋白的表达值与模型对照组比较,显着降低(P<0.05);SLW 1.02 mg/kg组可以显着降低模型大鼠异位内膜组织中COX-2蛋白的表达(P<0.05),SLW 0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组虽有一定的降低趋势,但无统计学差异(P>0.05)。同时,电化学发光免疫法和放射免疫法结果也显示,SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组异位内膜组织中E2和PGE2的浓度,也明显低于模型对照组(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,模型对照组异位组织ICAM-1阳性染色细胞数量多而密集,染色呈淡黄色或棕黄色;SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg剂量组阳性细胞数量少,浅染,阳性程度和面积评分与模型对照组比较有显着性差异(P<0.05)。SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组的阳性细胞累积光密度值也显着低于模型对照组(P<0.05)。TUNEL法结果显示,SLW 1.02 mg/kg组、0.34 mg/kg组和0.11 mg/kg组内阳性细胞数显着增加,细胞凋亡指数增加,与模型对照组比较,差异显着(P<0.05)。3.将SLW 17μg/ml与Eu细胞共同孵育24h后,ELISA法检测结果显示,Eu细胞培养液上清中VEGF的含量显着高于En细胞组(P<0.05);结晶紫染色法、明胶酶谱法和细胞免疫荧光结果分别显示,48h后Eu细胞的粘附百分数,MMP-2,9及其酶原的活性显着高于En细胞,而TIMP-1,2蛋白的表达明显低于En细胞组(P<0.05);流式细胞术和TUNEL法结果分别显示,72h后的Eu细胞早期凋亡百分数显着低于En细胞组,96h后Eu细胞晚期凋亡指数也显着低于En细胞组(P<0.05);同时,SLW 17μg/ml可同时降低Eu细胞分泌的VEGF含量、细胞粘附百分数、MMP-2,9及其酶原的活性,上调TIMP-1,2蛋白的表达,增加Eu细胞早期和晚期凋亡数目,与Eu细胞对照组比较,差异显着(P<0.05)。当SLW 17μg/ml与雌二醇1.34pg/ml～6.36pg/ml联合给予时,Eu细胞被SLW改善的恶性生物学行为被反向添加的雌二醇部分或完全恢复。其中,Eu细胞的粘附百分率、MMP-2和pro-MMP-9活力、TIMP-1,2蛋白的表达以及Eu细胞培养液上清中VEGF的含量与与Eu细胞对照组比较,已无显着性差异(P>0.05)。单加雌二醇可进一步加强Eu细胞的粘附、侵袭、促血管生成及抗凋亡能力,而特异性的芳香化酶抑制剂阿那曲唑0.01μg/ml的作用恰与雌二醇相反。结论1. SLW体外可抑制内异症在位内膜细胞雌二醇的生成,这种抑制作用非依赖于抑制Eu细胞的增殖,而与抑制Eu细胞SF-1表达,促进COUP-TF表达,特异性地抑制Eu细胞中P450 arom的表达,进而降低P450 arom对COX-2的激活作用,并降低Eu细胞分泌PGE2的水平,从而阻断内异症内膜局部雌激素合成的正反馈机制密切有关。此外,SLW体外抑制Eu细胞HSD-1 mRNA表达、促进HSD-2 mRNA表达的作用可能也是其降低Eu细胞雌二醇生成机制之一。2. SLW可抑制大鼠子宫内膜异位症的发展,缩小异位内膜体积,改善异位内膜组织病理学变化,降低异位内膜组织中雌二醇含量,其机制与SLW特异性地抑制异位内膜组织中P450 arom蛋白,降低P450 arom对COX-2的激活作用,进而抑制E2和PGE2的生成,阻断雌激素生成的正反馈环有关。3. SLW可抑制大鼠异位子宫内膜细胞的粘附能力,促进异位内膜细胞凋亡,其机制与SLW抑制大鼠异位内膜组织ICAM-1表达,激活异位内膜细胞中内源性核酸内切酶有关。4. Eu细胞在体外与En细胞比较,粘附腹膜、侵袭腹膜基底膜、促血管生成及抗自身凋亡的能力更强,Eu细胞的上述特质受其局部雌二醇浓度的影响。SLW可抑制Eu细胞粘附、侵袭、促血管生成,促进Eu细胞凋亡,其机制与SLW抑制Eu细胞与Ⅰ型胶原的特异性粘附,降低MMP-2,9活力,提高TIMP-1,2表达,降低Eu细胞VEGF的分泌,促进其胞膜内层磷脂酰丝氨酸外翻,激活细胞中内源性核酸内切酶有关。降低Eu细胞局部雌二醇合成是SLW治疗内异症的关键,它与上述作用机制密切相关。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2008-05-01）
加味三棱丸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:明确加味叁棱丸(SLW)抗子宫内膜异位症(内异症)雌二醇生成的作用,并探讨其在SLW抑制内膜细胞侵袭过程中所起的关键作用。方法:培养子宫肌瘤和内异症患者在位子宫内膜细胞,以子宫肌瘤为对照,内异症在位内膜细胞经SLW大鼠血清高、中、低剂量处理后,分别在不同的时间点采用电化学发光免疫法检测雌二醇(E2)的分泌水平;明胶酶谱法分析内膜细胞分泌的基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,9)活性,细胞免疫荧光法观察组织型金属蛋白酶抑制剂1,2(TIMP-1,2)蛋白的表达;通过时效关系的考察,明确SLW抑制内膜细胞侵袭能力的最佳时间后,重新分为6组:子宫肌瘤组、内异症组、内异症+SLW中剂量组、内异症+SLW中剂量+雌二醇组、内异症+阿那曲唑血清组和内异症+雌二醇组,分别在最佳时间点检测各组细胞分泌的MMP-2,9活性及TIMP-1,2蛋白表达水平。结果:SLW高、中剂量可明显降低内异症在位内膜细胞分泌E2的水平,并呈时间和浓度依赖性;内异症组在各检测时间内,分泌的MMP-2,9活性明显高于子宫肌瘤内膜组(P<0.01);经SLW血清中剂量处理48 h后,与空白对照组比较,内异症在位内膜细胞分泌的MMP-2,9活性明显降低(P<0.01),而TIMP-1,2蛋白的表达明显升高(P<0.01);当SLW中剂量与雌二醇2.70 ng.L-1联合处理48 h后,内异症在位内膜细胞被SLW降低的侵袭能力可被反向添加的雌二醇部分恢复;其中,MMP-2活性、TIMP-1,2蛋白表达与空白组比较,已无显着性差异;而单独进行雌二醇处理,可进一步增加内异症内膜细胞的侵袭能力,特异性芳香化酶抑制剂阿那曲唑与雌二醇的作用恰好相反。结论:SLW可抑制内异症在位内膜细胞的侵袭能力,其作用与SLW降低内膜细胞雌二醇的分泌密切相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
加味三棱丸论文参考文献
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