羊口疮病毒ORF019基因的克隆及表达

论文摘要

【目的】克隆、分析羊口疮病毒（ORFV）的ORF019基因,进而表达、纯化和鉴定重组表达产物.【方法】根据GenBank登录的ORFV OV-SA00株（AY386264）E2L基因序列设计1对引物,以提取的ORFV/QH02/2010株基因组DNA为模板,通过PCR获得该毒株的ORF019基因,将该基因连接至原核表达载体pET-32a（+）上,获得重组质粒pET-32a-ORF019,并对其测序,测序结果与副痘病毒属及其脊椎动物痘病毒亚科代表毒株的E2L蛋白进行一致性分析;并转化BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-32a-ORF019,读码框正确;生物信息学分析发现,ORF019基因在副痘病毒属各成员间高度保守,也在脊椎动物痘病毒亚科痘病毒的遗传进化过程中保留了相对稳定的氨基酸残基;获得了约100 ku的融合蛋白表达产物,并以包涵体的形式存在于宿主菌.【结论】成功对ORFV019基因进行系统的遗传演化分析,并利用原核表达系统获得了重组表达产物.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、菌株和载体
•   1.2 载体、工具酶及其他试剂
•   1.3 方法
•     1.3.1 引物的设计与合成
•     1.3.2 病毒DNA的提取及ORF09基因的PCR扩增
•     1.3.3 重组表达载体的构建及鉴定
•     1.3.4 ORFV ORF019基因及其编码蛋白的生物信息学分析
•     1.3.5 重组表达菌的诱导表达鉴定
•     1.3.6 重组蛋白的纯化
•     1.3.7 重组蛋白的Western-blot检测
• 2 结果与分析
•   2.1 ORF019基因的PCR扩增及其重组表达质粒的构建
•   2.2 ORFV ORF019基因及其编码蛋白的生物信息学分析结果
•   2.3 重组蛋白的表达与鉴定
•   2.4 融合蛋白的可溶性分析
•   2.5 重组ORF019蛋白的纯化
•   2.6 重组ORF019蛋白的Western-blot分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 沈岩尔,贾怀杰,王晓霞,陈国华,何小兵,房永祥,薛慧文,景志忠

关键词: 羊口疮病毒,基因,进化分析,原核表达,纯化

来源: 甘肃农业大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室,兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2017YFD0500903,2016YFD0500907)

分类号: S852.654

DOI: 10.13432/j.cnki.jgsau.2019.06.001

页码: 1-7

总页数: 7

文件大小: 1843K

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