牛支原体新疆株的分离鉴定

论文摘要

为调查新疆规模化奶牛场病牛死亡原因并确定病原,本研究无菌采集7份肺炎病死牛病变肺组织样,通过牛支原体液体培养基和固体培养基分离到1株支原体,采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,采用支原体特异性引物和牛支原体16S rRNA通用引物扩增基因序列并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件中的邻接法（Neighbor-Joining,NJ）依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树。结果显示,分离株菌落呈典型的"煎蛋样",菌落中心凹陷深入培养基,周边菲薄而透明,经Dienes染液染色后,菌落中心呈深蓝色。该分离株不分解葡萄糖、尿素、不水解精氨酸,血细胞吸附试验和溶血试验均呈阴性,氯化三苯基四氮唑还原反应呈阳性,产生膜和斑。PCR反应扩增出大小为1 911 bp的牛支原体特异性目的片段;分离株16S rRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列同源性为99.8%,与牛支原体地方株（Mb NM2012、Mb HB0801、Mb Hubei-1、Mb Ningxia-1、Mb CQ-W70和Mb 08M）的同源性为99.3%～99.7%。系统进化树显示,分离株16S rRNA基因与Mb Ningxia-1株和Mb 08M株亲缘关系较近,处于同一分支。本研究结果证实了引起病牛死亡的病原为牛支原体,为新疆牛支原体病的防治提供了科学依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 病料
•     1.1.2 主要试剂及仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 病原分离与纯化
•     1.2.2 Dienes菌落染色
•     1.2.3 生化鉴定
•     1.2.4 PCR鉴定
•       1.2.4.1 基因组DNA的制备
•       1.2.4.2 PCR扩增
•       1.2.4.3 克隆和测序
•       1.2.4.4 序列分析
• 2 结 果
•   2.1 病原分离与纯化
•   2.2 Dienes菌落染色
•   2.3 生化鉴定结果
•   2.4 PCR检测结果
•   2.5 序列分析
•     2.5.1 同源性分析
•     2.5.2 系统进化树分析
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 凌晨,郝成武,何海,张飞,候凤,贺笋

关键词: 牛支原体,分离,鉴定

来源: 中国畜牧兽医 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 天康生物股份有限公司

基金: 天康生物技术中心项目(2018003)

分类号: S852.62

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.05.025

页码: 1466-1473

总页数: 8

文件大小: 1543K

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