导读:本文包含了末端扩增论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:快速,扇贝,基因,糖苷酶,组氨酸,薯蓣,高山。
末端扩增论文文献综述
赵建伟[1]（2019）在《基于恒温扩增反应检测端粒酶和利用末端保护比色检测蛋白质的研究》一文中研究指出端粒酶是一种核糖核蛋白逆转录酶,能够阻止端粒DNA的缩短。端粒酶在正常细胞中的活性非常低,很难被检测到,而在癌细胞中活性被激活,活性较高。端粒酶已经被认为是细胞癌变的一种潜在的生物标志物。因此实现对端粒酶的简单、快速、高灵敏度检测,对癌症的早期诊断以及研发靶向端粒酶的抗癌药物有着重大意义。蛋白质是生命的物质基础,人体的生命活动都离不开蛋白质的参与,如新陈代谢、免疫反应以及物质能量传输等。有研究表明,蛋白质的异常表达与某些疾病的发生有着密切联系。因此实现对蛋白质的简单、快速、高灵敏度检测,在临床诊断和相应的药物研发中具有重要意义。本学位论文基于恒温指数扩增技术和小分子连接DNA末端保护分别建立了简单、灵敏的端粒酶和链霉亲和素检测的新方法。(1)基于恒温指数扩增反应和磁分离技术检测端粒酶活性即使是在癌细胞中,被激活的端粒酶活性也较低,需要高灵敏度的分析方法才能检测到。恒温指数扩增技术能够在恒温条件,短时间内,对短链DNA进行快速高效的扩增。其在十几分钟内的扩增效率可以与PCR几个小时的扩增效率相媲美。我们利用链顶替作用形成的线性扩增,结合恒温指数扩增技术,设计了一种高灵敏度的端粒酶活性检测方法。同时,我们利用磁性微球捕捉有效的信号产物。通过磁分离,在每一步反应后将过量的反应物有效的进行分离,避免了其对后续反应的影响。最后利用双链特异性的染料SYBR Green I(SG I)对指数扩增结果进行实时定量检测。该方法最低可以检测到20个癌细胞中的端粒酶活性。(2)基于小分子连接DNA末端保护,利用未标记的金纳米粒子比色检测链霉亲和素。基于小分子连接DNA末端保护和未标记的金纳米粒子,我们建立了一个简单新颖的比色检测蛋白质的方法。我们设计了一个3′末端标记biotin的发卡型DNA探针(biton-DNA probe)。基于生物素(biotin)和链霉亲和素(SA)的特异性作用,在靶标蛋白SA存在下,SA与biton-DNA probe的3′末端的biotin特异性结合,能够阻止核酸外切酶III(Exonuclease III,Exo III)对biton-DNA probe的降解,形成末端保护。当靶标蛋白SA不存在时,biton-DNA probe被Exo III降解,生成单链DNA。加入金纳米粒子(AuNPs),单链DNA能够更好地吸附在AuNPs表面,保护AuNPs不被盐离子诱导聚集,溶液颜色为红色;而AuNPs对biton-DNA probe的吸附较弱,不能阻止盐离子诱导AuNPs发生聚集,溶液呈现蓝色。该方法对SA的检出限为0.24 pmol。方法简单灵敏,选择性好,无需标记,没有酶扩增反应参与,检测成本低。(本文来源于《河北大学》期刊2019-05-01）
李金娜,苗书魁,马文戈,魏玉荣,汪萍[2]（2018）在《口蹄疫病毒基因组3'末端序列扩增及分析》一文中研究指出【目的】扩增口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/Akesu/58 CE39A株基因组3'末端序列,并对其核苷酸序列进行分析,为FMDV反向遗传学研究奠定基础。【方法】采用普通PCR法和3'RACE法扩增FMDV基因组3'末端序列,利用分子生物学软件对该序列进行分析。【结果】扩增了口蹄疫病毒基因组3'末端序列,3'UTR长98 nt,Poly(A)长度不同(19、23、24、25、27、29、43)。3'UTR序列二级结构含有2个茎环结构,分别位于8 101～8 140和8 146～8 190 nt。O/Akesu/58 CE39A株3'UTR序列与参考毒株O/MAY/3/2014(GenBank登录号:KY322672)和O/IND26(54)/2014(GenBank登录号:KJ825807)的核苷酸序列同源性最高,均为89.8%。【结论】普通PCR法和3'RACE法均可扩增出3'末端序列。同一毒株的亚克隆,其Poly(A)长度与基因扩增时所用方法有关。不同毒株的Poly(A)长度不同,可能是毒株本身属性,也有可能是由扩增方法不同造成。Poly(A)要么扩增成功后其长度不同,要么扩增失败。失败的原因可能是3'末端结构复杂,难于扩增。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2018年11期）
肖慧,何婧琳,肖昊,杨婵,冯泽猛[3]（2017）在《基于末端脱氧核苷酸转移酶扩增DNA-铜纳米簇荧光传感检测L-组氨酸》一文中研究指出利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)扩增形成聚胸腺嘧啶(T)DNA模板,制备了聚T铜纳米簇(TS-CuNCs),构建了一种用于L-组氨酸(L-His)检测的荧光传感分析新方法。TdT酶在d TTP存在下合成聚T单链DNA核苷酸序列。由于胸腺嘧啶和Cu~(2+)之间的亲合力,聚T单链DNA作为合成铜纳米簇(CuNCs)的模板,加入还原剂后形成CuNCs,荧光强度增强。在L-His存在下,L-组氨酸的咪唑基与Cu~(2+)螯合形成L-His-Cu~(2+)配合物,因而进入聚胸腺嘧啶序列中的Cu~(2+)量减少,使得合成的CuNCs数量减少,导致荧光信号减弱。实验结果表明,体系荧光响应信号与L-His浓度的对数值在5.0×10~(-9)~5.0×10~(-4)mol/L范围内呈线性关系,检出限达到3.4×10~(-9)mol/L。本方法用于实际尿液样品中L-组氨酸检测的回收率为97.4%~104.6%,在生物医学及临床诊断中具有潜在应用价值。(本文来源于《分析化学》期刊2017年10期）
李玉华,邓培渊,赵奇,雷志华[4]（2015）在《cDNA末端快速扩增法克隆高山离子芥原叶绿酸酯氧化还原酶基因及其表达特异性分析》一文中研究指出用cDNA末端快速扩增技术从高山离子芥中克隆得到完整的原叶绿酸酯氧化还原酶(POR,EC:1.3.1.33)基因,命名为CbPORB,DNAMAN软件分析CbPORB和其他几种植物的POR基因,有很高的同源性,将其cDNA序列提交到NCBI数据库(序列接受号为FJ390503)。CbPORB基因全长1444bp,包含1个1209bp的开放阅读框(ORF),编码402个氨基酸的蛋白CbPORB(序列号为ACJ12925)。NCBI数据库在线软件计算高山离子芥CbPORB蛋白的等电点为9.43,推测其相对分子量为43.37kD。组织特异性表达分析显示:CbPORB在叶、茎中表达,根中不表达,具有器官特异性;干旱胁迫处理抑制CbPORB的转录水平;而表油菜素内酯(24-epibrassinolide;EBR)处理提高了CbPORB的转录水平。(本文来源于《河南农业大学学报》期刊2015年03期）
刘凤栾,郗琳,阿不都热扎克·依沙克,陈晓丽,马男[5]（2012）在《利用蔷薇科植物基因5'UTR快速扩增狗蔷薇RcPIN1和RcPLT的5'末端》一文中研究指出狗蔷薇不定根可被噻苯隆(TDZ)高效诱导形成类原球茎,深入探讨其诱导阶段的分子生物学机制,有利于指导切花月季建立类似高效再生和遗传转化体系。快速、准确克隆和筛选狗蔷薇类原球茎发生的关键基因是进行分子生物学水平研究的一个重要前提。利用苹果(Malus×domestica)、桃(Prunus persica)和草莓(Fragaria vesca)高同源性基因5'UTR(非翻译区)的相对保守性,在其内保守区域设计上游简并引物,以M-MLV逆转录酶反转录合成cDNA为模板,直接扩增蔷薇科植物狗蔷薇(Rosa canina)RcPIN1(pin-formed)和RcPLT(plethora)基因5'末端,大大减少了获取众多目的基因全长的时间及成本。结果显示,在狗蔷薇RcPIN1和RcPLT基因与其对应苹果、桃和草莓高同源性基因的5'UTR内,很多区域表现出较高保守性,表明在5'UTR相对保守区域设计上游简并引物扩增目的基因5'末端的合理性。与常规5'CDNA末端快速扩增技术(5'RACE)相比,本方法无需对cDNA模板5'末端加尾同聚物和引入锚定引物,即不必使用昂贵的5'RACE试剂盒,具有快捷、节约等优点,是一种获取蔷薇科植物基因5'末端的可行途径。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2012年10期）
贺斌,黄兴奇,余腾琼,钟巧芳,王玲仙[6]（2012）在《cDNA末端快速扩增技术及其方法的改进》一文中研究指出cDNA末端快速扩增(RACE)技术可以快速扩增mRNA3'和5'末端,从而获得全长的cDNA序列,为分离和研究新的基因提供了一个快速简便的方法。从RACE的原理出发,综述RACE技术的优缺点,阐述RACE技术的改良,并对其应用现状和发展前景进行了分析。(本文来源于《浙江农业科学》期刊2012年09期）
梁爱玲,刘勇军,侯敢,黄迪南[7]（2012）在《扇贝防御素基因改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应筛选方法的研究》一文中研究指出目的应用改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应(RACE)筛选扇贝抗菌肽基因,寻找基于基因序列同源性的双壳类抗菌肽(AMP)的筛选方法。方法 TRIzol法提取扇贝血淋巴中总RNA。根据贻贝抗菌肽的保守序列设计基因特异性简并引物,进行改良5′RACE钓取可能防御素基因cDNA的5′端序列、AT克隆、DNA测序和同源性分析。结果采用改良5′RACE从扇贝血淋巴RNA中得到多个未知基因的cDNA 5′端序列,挑选600bp以下的基因片段进行AT克隆和DNA测序后得到3个插入片段序列,其长度分别为257、275和511bp。通过BLAST程序搜索GenBank核酸数据库,未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的3个5′端cDNA序列可能属于新的基因。应用改良5′RACE能钓取含防御素保守序列的新基因片段,由此表明此方案具有可行性。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2012年10期）
梁爱玲,刘勇军,侯敢,黄迪南[8]（2011）在《改良3' cDNA末端快速扩增PCR法筛选扇贝抗菌肽基因》一文中研究指出目的应用改良3′ cDNA末端快速扩增PCR法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)筛选扇贝抗菌肽基因。方法设计M13和T7启动子分别修饰的基因特异性引物(gene special primer,GSP)、锚定引物,提取扇贝血淋巴总RNA进行改良3′ RACE和5′ RACE,获得cDNA准全长序列并在GenBank中进行同源性比较。结果从扇贝血淋巴中获得3个cDNA的3′端序列基因和1个准全长cDNA(544bp),在GenBank中未发现与之高度同源的基因。结论从扇贝血淋巴中获得的1个准全长cDNA、3个cDNA的3′端序列可能属于新基因。应用改良3′ RACE能钓取含抗菌肽保守序列的新基因片段,该方法可行。(本文来源于《现代药物与临床》期刊2011年05期）
黄斌,李瑞珍,汤惠茹,刘志红,乌兰娜[9]（2010）在《荧光原位杂交检测宫颈脱落细胞中人类染色体末端酶基因的扩增及临床意义》一文中研究指出目的探讨人类染色体末端酶(hTERC)基因在宫颈不同病变脱落细胞中的扩增和临床意义。方法收集2008年1月—2009年5月来北京大学深圳医院宫颈门诊就诊的309例患者的宫颈脱落细胞标本,按细胞学分组分为未见上皮内瘤变(NILM)72例,未明确诊断意义的不典型鳞状细胞(ASC-US)71例、不除外高度上皮内病变的不典型鳞状细胞(ASC-H)19例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)80例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)49例和鳞状细胞癌(SCC)18例;按组织学分组分为正常或慢性宫颈炎33例、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级168例、CINⅡ/Ⅲ级84例和SCC组24例。用荧光原位杂交(FISH)方法检测宫颈脱落细胞中hTERC基因的扩增。结果在NILM、ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL和SCC中,hTERC基因扩增阳性率分别为5.56%、14.09%、15.00%、42.11%、67.35%、100%。在正常或慢性宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ/Ⅲ级和SCC中,hTERC基因扩增阳性率分别为6.06%、7.74%、54.76%、100%。随细胞学和组织学病变程度增加,hTERC基因扩增阳性率均增加(P<0.001)。hTERC基因在HR-HPV阳性与阴性组中扩增率为29.08%与11.11%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。hTERC基因检测CINⅡ/Ⅲ级以上病变的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为64.81%、92.54%、82.35%和83.04%。结论 hTERC基因扩增与宫颈细胞学和组织学异常密切相关,且随着病变程度增加其扩增阳性率增加,可作为预测宫颈癌前病变进展的生物遗传学标志物。(本文来源于《中国全科医学》期刊2010年15期）
骆宁,金凤燮,鱼红闪[10]（2010）在《RACE技术对薯蓣皂苷糖苷酶基因cDNA3′末端的快速扩增》一文中研究指出对微生物Absidia sp.G3d产薯蓣皂苷糖苷酶基因cDNA3′末端的序列进行了调取。根据薯蓣皂苷糖苷酶基因的CDS区已知序列设计特异性引物,应用3′RACE(Rapid-Amplification of cDNA 3′Ends)技术,快速扩增得到cDNA 3′端未知序列片段,将PCR产物切胶回收,直接测序得到长度为258 bp的产物序列,经比对其中编码区长度为122 bp,非编码区长度为136 bp,Poly A部分长度为28 bp。这对其他类中草药高活性皂苷糖基水解酶基因cDNA3′末端的序列的调取提供了参考。(本文来源于《大连工业大学学报》期刊2010年03期）
末端扩增论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】扩增口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/Akesu/58 CE39A株基因组3'末端序列,并对其核苷酸序列进行分析,为FMDV反向遗传学研究奠定基础。【方法】采用普通PCR法和3'RACE法扩增FMDV基因组3'末端序列,利用分子生物学软件对该序列进行分析。【结果】扩增了口蹄疫病毒基因组3'末端序列,3'UTR长98 nt,Poly(A)长度不同(19、23、24、25、27、29、43)。3'UTR序列二级结构含有2个茎环结构,分别位于8 101～8 140和8 146～8 190 nt。O/Akesu/58 CE39A株3'UTR序列与参考毒株O/MAY/3/2014(GenBank登录号:KY322672)和O/IND26(54)/2014(GenBank登录号:KJ825807)的核苷酸序列同源性最高,均为89.8%。【结论】普通PCR法和3'RACE法均可扩增出3'末端序列。同一毒株的亚克隆,其Poly(A)长度与基因扩增时所用方法有关。不同毒株的Poly(A)长度不同,可能是毒株本身属性,也有可能是由扩增方法不同造成。Poly(A)要么扩增成功后其长度不同,要么扩增失败。失败的原因可能是3'末端结构复杂,难于扩增。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
末端扩增论文参考文献
[1].赵建伟.基于恒温扩增反应检测端粒酶和利用末端保护比色检测蛋白质的研究[D].河北大学.2019
[2].李金娜,苗书魁,马文戈,魏玉荣,汪萍.口蹄疫病毒基因组3'末端序列扩增及分析[J].新疆农业科学.2018
[3].肖慧,何婧琳,肖昊,杨婵,冯泽猛.基于末端脱氧核苷酸转移酶扩增DNA-铜纳米簇荧光传感检测L-组氨酸[J].分析化学.2017
[4].李玉华,邓培渊,赵奇,雷志华.cDNA末端快速扩增法克隆高山离子芥原叶绿酸酯氧化还原酶基因及其表达特异性分析[J].河南农业大学学报.2015
[5].刘凤栾,郗琳,阿不都热扎克·依沙克,陈晓丽,马男.利用蔷薇科植物基因5'UTR快速扩增狗蔷薇RcPIN1和RcPLT的5'末端[J].农业生物技术学报.2012
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[7].梁爱玲,刘勇军,侯敢,黄迪南.扇贝防御素基因改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应筛选方法的研究[J].检验医学与临床.2012
[8].梁爱玲,刘勇军,侯敢,黄迪南.改良3'cDNA末端快速扩增PCR法筛选扇贝抗菌肽基因[J].现代药物与临床.2011
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[10].骆宁,金凤燮,鱼红闪.RACE技术对薯蓣皂苷糖苷酶基因cDNA3′末端的快速扩增[J].大连工业大学学报.2010
论文知识图
