金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK原核表达、纯化及溶液构象分析

论文摘要

金黄色葡萄球菌K型肠毒素（Staphylococcus aureus enterotoxin K,SEK）由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码,流行病学显示,编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率,说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病因子。本研究将截去N端信号肽的SEK蛋白编码基因与原核表达载体pET-28a（+）连接,构建重组表达质粒pET-28a（+）-ΔNspsek;通过对sek基因在不同原核表达宿主菌中的表达及表达条件优化分析,确立SEK蛋白的最优表达条件;利用镍亲合层析纯化含组氨酸（His）标签的SEK融合蛋白,将凝血酶切除His标签后的SEK蛋白进行聚合状态及热稳定分析、荧光发射谱和圆二色谱分析。结果表明,重组蛋白SEK表达成功,热处理导致蛋白部分降解;荧光光谱揭示SEK蛋白在278 nm和295 nm波长处具有相同的最大色氨酸发射峰;344 nm波长处表明SEK蛋白处于紧密折叠的天然状态;圆二色谱分析表明,ΔNspSEK重组蛋白富含β-折叠（23.6%）、β-转角（28%）以及α-螺旋（29.1%）等二级结构。为深入研究SEK蛋白的结构与功能提供基础,也对改进食品加工工艺和提高食品安全具有指导意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 ΔNspSEK蛋白原核表达载体的构建
•     1.3.2 重组质粒在大肠杆菌中表达条件优化
•     1.3.3 His-ΔNspSEK蛋白分离与纯化
•     1.3.4 ΔNspSEK重组蛋白聚合态和热稳定分析
•     1.3.5 圆二色谱测定和荧光光谱分析
•   1.4 数据分析和图像处理
• 2 结果与分析
•   2.1 重组表达质粒pET-28a （+） -ΔNspsek的基因测序鉴定结果
•   2.2 pET-28a （+） -ΔNspsek在大肠杆菌中表达条件优化及可溶性表达验证结果
•   2.3 最优条件下的His-ΔNspSEK表达纯化及凝血酶切除6×His标签结果
•   2.4 纯化的ΔNspSEK聚合状态分析和热稳定分析
•   2.5 纯化ΔNspSEK蛋白的圆二色谱和荧光发射谱分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田万帆,刘骥,赵燕英,唐俊妮

关键词: 金黄色葡萄球菌型肠毒素,原核表达,纯化,热稳定性,荧光发射谱,圆二色谱

来源: 食品科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(31371781),西南民族大学中央高校基本科研业务费重点项目(2018NZD14)

分类号: TS201.3

页码: 138-145

总页数: 8

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