导读:本文包含了蛇毒锯鳞蝰素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛇毒,凝血酶原,蝰蛇,显色,多肽,基质,大肠杆菌。
蛇毒锯鳞蝰素论文文献综述
杨利军,杨涛,程牛亮,解军,牛勃[1]（2006）在《蛇毒锯鳞蝰素融合蛋白的发酵与纯化》一文中研究指出研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1,转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达,研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白,经DTT裂解后,检测Ecs活性。发酵后菌体湿重可达75g/L,融合蛋白表达量约占总蛋白的35%,重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。亲和层析纯化后,得到Ecs单体,得率为28mg/L发酵液。生物学活性分析显示,重组Ecs能有效抑制血小板的聚集,其活性与天然Ecs相似。优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和纯化条件,为规模化生产奠定基础。(本文来源于《微生物学报》期刊2006年01期）
韩兵社[2]（2002）在《重组蛇毒锯鳞蝰素（Echistatin）原核高效表达体系的构建》一文中研究指出目的 构建蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin)的原核高效表达体系 方法 由Genebank数据库检索蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin)的氨基酸序列，结合大肠杆菌蛋白质合成体系对氨基酸密码子使用的偏爱性，设计了Echistatin编码基因，体外人工合成编码基因DNA片段，通过适当的限制性内切酶位点插入表达载体pBV220，分别构建了Echistatin的单拷贝表达克隆、双拷贝串联表达克隆；进一步通过PCR技术构建Echistatin的融合表达基因克隆。由限制性内切酶酶切实验、DNA序列测定鉴定重组表达质粒的正确性。 将上述重组表达质粒CaCl_2法转化大肠杆菌JM109、DH5α、BL21(DE3)、BL21(DE3)plySs感受态细胞，温控诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE及凝胶电泳分析系统检测目的蛋白的分子量、表达亘，Western—blotting检测目的蛋白的抗原抗体反应特异性。 采用超声结合溶菌酶的方法裂解大肠杆菌，检测目的蛋白的表达形式，纯化融合蛋白，血小板聚集实验测定其生物学活性。 结果 设计并合成了Echistatin编码基因DNA序列，构建了Echistatin单拷贝表达载体，经DNA测序鉴定正确后，SDS-PAGE及Western-blotting结果表明：Echistatin在上述菌株中未获得高效表达。 设计并合成了Echistatin编码基因的改进DNA序列，构建了Echistatin改进序列利原有序列的串联表达载体，经DNA测序鉴定正确后，SDS-PAGE山西医科大学2002届硕士学位论文及western一blotting结果表明:Echistatin在上述菌株中未获得高效表达。 构建了Echistatin融合蛋白表达载体，经DNA测序鉴定正确后，温控诱导表达，获得了高效表达，表达产物经505一队GE分析，分子量为16000Oa，符合预计的融合蛋白分子量，表达产物.ll’菌体总蛋白的30%以上，westem一blotting结果显示，该日的蛋白能够和Echistatin多克隆抗体发生特异性抗原抗体反应，表明我们成功构建了 Eohistatin的高效融合表达克隆。该融合蛋自含有载体蛋自hPKS，His x6纯化标记，Met澳化佩裂解位点，经裂解可获得不含Met的重组Echistatin。超声破菌证明:表达产物土要以不溶的包涵体形式存在。结论 成功构建了Echistatin的原核高效表达克隆，表达量高于现有国内外研究水平，为Echistatin功能及相关疾病的研究奠定了基础。 小分子量异源蛋自在人肠杆菌的表达受mRNA不稳定、翻译起始效率低、易被蛋自酶降解等因素的干扰，较难获得高效表达，通过与已高表达的蛋自融合表达可以克服以上问题，可以使大多数蛋白获得高效表达。配合使用不同的载体蛋自和纯化、标记序列，可大人简化后续的鉴定、纯化!一艺，是一种简便、快速的真核蛋自原核表达策略。(本文来源于《山西医科大学》期刊2002-05-10）
李洪超,李雄彪,胡美浩[3]（1996）在《蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变》一文中研究指出本研究的目的是利用蛋白质工程定点突变的方法，在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基，１５位甘氨酸残基，１６位天冬氨酸残基），以其增加该分子的生物活性，并探讨蛋白质一级结构，空间结构和功能的关系。在质粒ｐＪＣ２６４的基础上，利用ＰＣＲ定点突变方法，对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变，使相应的ＤＮＡ片段变成表达Ａｒｇ１４－Ｇｌｙ１５－Ａｓｐ１６的核苷酸顺序，经酶切和ＤＮＡ测序鉴定正确。ＣＮＢｒ裂解后，用反相ＨＰＬＣ分析，分离制备突变体蛇毒锯鳞蝰素，制备的突变体蛇毒锯鳞蝰素的Ｎ－末端１０个氨基酸残基与天然蛇毒锯鳞蝰素的相同。在人的富含血小板血浆测活体系中，经１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，突变体蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为３．０×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ；重组野生型蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为４．０×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ；天然蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ_（５０）为２．８×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ。此外，就蛇毒锯鳞蝰素中保守序列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ以及其空间构象对蛇毒锯鳞蝰素抑制血小板凝集之间的关系进行了讨论。(本文来源于《遗传学报》期刊1996年02期）
梅浙川,徐葆元[4]（1994）在《锯鳞蝰蛇毒显色多肽基质法测定血浆异常凝血酶原》一文中研究指出本研究采用锯鳞蝰蛇毒显色多肽基质法（Ｅｃａｒｉｎ法）测定原发性肝癌（ＰＨＣ）、其它肿瘤、慢性肝病及正常对照共１１４例血浆异常凝血酶原（ＤＣＰ）．结果显示：Ｅｃａｒｉｎ法测定血浆ＤＣＰ的批内变异为３．８％、批间变异为４．９％、平均回吸收率为９０．４％，ＤＣＰ诊断ＰＨＣ的敏感性为７２．３％、特异性为９７％、准确性为８６．８％。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊1994年01期）
蛇毒锯鳞蝰素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 构建蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin)的原核高效表达体系 方法 由Genebank数据库检索蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin)的氨基酸序列，结合大肠杆菌蛋白质合成体系对氨基酸密码子使用的偏爱性，设计了Echistatin编码基因，体外人工合成编码基因DNA片段，通过适当的限制性内切酶位点插入表达载体pBV220，分别构建了Echistatin的单拷贝表达克隆、双拷贝串联表达克隆；进一步通过PCR技术构建Echistatin的融合表达基因克隆。由限制性内切酶酶切实验、DNA序列测定鉴定重组表达质粒的正确性。 将上述重组表达质粒CaCl_2法转化大肠杆菌JM109、DH5α、BL21(DE3)、BL21(DE3)plySs感受态细胞，温控诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE及凝胶电泳分析系统检测目的蛋白的分子量、表达亘，Western—blotting检测目的蛋白的抗原抗体反应特异性。 采用超声结合溶菌酶的方法裂解大肠杆菌，检测目的蛋白的表达形式，纯化融合蛋白，血小板聚集实验测定其生物学活性。 结果 设计并合成了Echistatin编码基因DNA序列，构建了Echistatin单拷贝表达载体，经DNA测序鉴定正确后，SDS-PAGE及Western-blotting结果表明：Echistatin在上述菌株中未获得高效表达。 设计并合成了Echistatin编码基因的改进DNA序列，构建了Echistatin改进序列利原有序列的串联表达载体，经DNA测序鉴定正确后，SDS-PAGE山西医科大学2002届硕士学位论文及western一blotting结果表明:Echistatin在上述菌株中未获得高效表达。 构建了Echistatin融合蛋白表达载体，经DNA测序鉴定正确后，温控诱导表达，获得了高效表达，表达产物经505一队GE分析，分子量为16000Oa，符合预计的融合蛋白分子量，表达产物.ll’菌体总蛋白的30%以上，westem一blotting结果显示，该日的蛋白能够和Echistatin多克隆抗体发生特异性抗原抗体反应，表明我们成功构建了 Eohistatin的高效融合表达克隆。该融合蛋自含有载体蛋自hPKS，His x6纯化标记，Met澳化佩裂解位点，经裂解可获得不含Met的重组Echistatin。超声破菌证明:表达产物土要以不溶的包涵体形式存在。结论 成功构建了Echistatin的原核高效表达克隆，表达量高于现有国内外研究水平，为Echistatin功能及相关疾病的研究奠定了基础。 小分子量异源蛋自在人肠杆菌的表达受mRNA不稳定、翻译起始效率低、易被蛋自酶降解等因素的干扰，较难获得高效表达，通过与已高表达的蛋自融合表达可以克服以上问题，可以使大多数蛋白获得高效表达。配合使用不同的载体蛋自和纯化、标记序列，可大人简化后续的鉴定、纯化!一艺，是一种简便、快速的真核蛋自原核表达策略。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛇毒锯鳞蝰素论文参考文献
[1].杨利军,杨涛,程牛亮,解军,牛勃.蛇毒锯鳞蝰素融合蛋白的发酵与纯化[J].微生物学报.2006
[2].韩兵社.重组蛇毒锯鳞蝰素（Echistatin）原核高效表达体系的构建[D].山西医科大学.2002
[3].李洪超,李雄彪,胡美浩.蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变[J].遗传学报.1996
[4].梅浙川,徐葆元.锯鳞蝰蛇毒显色多肽基质法测定血浆异常凝血酶原[J].重庆医科大学学报.1994
论文知识图
