1株T1样噬菌体vB＿EcoS＿IME18的分离鉴定及其受体分析

论文摘要

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1株噬菌体vBEcoSIME18（IME18）,通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5 min,裂解期50 min,爆发量高达223 PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90 min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50 354 bp,G+C含量为45.6%;蛋白Fhu A、Ton B在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 噬菌体的分离与纯化
•     1.3.2 噬菌体的电镜观察
•     1.3.3 噬菌体基因组的提取
•     1.3.4 噬菌体的全基因组测序及分析
•     1.3.5 噬菌体的最佳感染复数 （multiplicity of infection, MOI） 及一步生长曲线
•     1.3.6 噬菌体的体外杀菌效果
•     1.3.7 噬菌体宿主谱测定
•     1.3.8 噬菌体抗性株的筛选和验证
•     1.3.9 噬菌体抗性株的基因组提取、高通量测序、比较基因组学分析
•     1.3.1 0 噬菌体受体突变株的构建
•       1.3.1 0. 1 质粒pKDsg-tonB、pKDsg-fhuA的构建
•       1.3.1 0. 2 重组
•       1.3.1 0. 3 突变株tonB （fhuA） 基因的测序
•     1.3.1 1 突变株的噬菌体敏感性验证
• 2 结果与分析
•   2.1 噬菌体的形态
•   2.2 噬菌体全基因组分析
•   2.3 噬菌体的最佳MOI及一步生长曲线
•   2.4 噬菌体的体外杀菌效果
•   2.5 噬菌体宿主谱测定结果
•   2.6 噬菌体抗性株的鉴定和基因组分析
•   2.7 tonB、fhuA基因的沉默
•   2.8 突变株的噬菌体敏感性验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李萍,林洪,童贻刚,王静雪

关键词: 大肠杆菌,噬菌体,鉴定,噬菌体受体

来源: 食品科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国海洋大学食品科学与工程学院,军事科学院军事医学研究所微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室

基金: “十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1600703),国家重点研发计划项目(AWS16J020),山东省重点研发计划项目(2017GNC1318)

分类号: Q78

页码: 79-86

总页数: 8

文件大小: 2658K

下载量: 284