鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建

论文摘要

为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌（Hp）铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌种和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 IBDV VP2-Fe融合基因克隆载体的构建
•     1.2.1 引物设计与合成
•     1.2.2 IBDV VP2基因和Hp铁蛋白基因PCR扩增
•     1.2.3 IBDV VP2基因与Hp铁蛋白基因片段的融合
•     1.2.4 IBDV VP2和Hp铁蛋白融合基因重组克隆质粒的构建
•   1.3 IBDV VP2-Fe融合基因真核表达载体的构建
• 2 结 果
•   2.1 IBDV VP2基因和Hp铁蛋白基因的PCR扩增
•   2.2 IBDV VP2基因与Hp铁蛋白基因片段的融合
•   2.3 IBDV VP2-Fe融合基因重组克隆质粒的构建
•   2.4 IBDV VP2-Fe融合基因真核表达载体的构建
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯,李润芷,岳锋,吴玉苹,李鹏,孙国鹏,张艳芳,王选年

关键词: 传染性法氏囊病病毒,基因,幽门螺杆菌,铁蛋白,融合

来源: 中国畜牧兽医 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 新乡学院生命科学技术学院生物技术研究中心,郑州大学生命科学技术学院,河南科技学院动物科学学院

基金: 河南省科技攻关项目(182102110221),新乡学院青年骨干教师资助计划项目(GGJS2016-06),新乡学院科技创新团队项目(XXUTD20170106),河南省教育厅自然科学重点研究项目(19A230009)

分类号: S852.65

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.10.006

页码: 2860-2866

总页数: 7

文件大小: 553K

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