导读:本文包含了核酸结合论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核酸,幽门,探针,螺杆,基因,蛋白,磷酸化。
核酸结合论文文献综述
于玲,于莉[1]（2019）在《HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用》一文中研究指出目的探讨艾滋病病毒(HIV)抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用效果。方法 2016年6月—2018年3月HIV抗原抗体试剂筛查具有反应患者189例作为研究对象,所有患者给予3代试剂复检并采用蛋白印迹法(WB)抗体验证。结果 189例患者经4代试剂HIV筛查有反应者中,反应类型排在前两位的分别为:Ag-/Ab+、Ag+/Ab-,分别占85.71%和12.17%;23例Ag+/Ab-患者均完成WB抗体确诊及核苷酸定量检测,结合患者流行病学特征、临床表现,均确诊为HIV感染。结论 HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测中能提高HIV感染患者早期检出率,能评估患者预后。(本文来源于《中国卫生标准管理》期刊2019年16期）
华影,陈丽萍,李生,周发友,唐晓磊[2]（2019）在《特异性结合幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)核酸适配子的筛选及鉴定》一文中研究指出目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子。随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能。结果本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA。经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98%的重组HpaA蛋白作为筛选靶标。利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1～HA6。其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAM)标记的HA6适配子对166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58%,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95%)。结论本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年06期）
李亚拿[3]（2019）在《纳米材料结合循环扩增反应用于金属离子、核酸分子的分析》一文中研究指出金属离子(如铜、锌离子)和生物分子(如RNA、DNA)在各种生物过程中发挥着重要的作用。近年来,高灵敏检测金属离子以及在疾病中具有指示性的生物分子微RNA(miRNA)引起了研究领域的浓厚兴趣。然而,金属离子浓度过低或过高都会对生物系统产生不利影响。因此,迫切需要开发高灵敏度和选择性的方法来检测人体内的和日常饮食中的金属离子。组织或体液中与疾病相关的生物标志物通常在疾病的早期阶段表达水平比较低,难以用常规分析方法检测。因此,新型超灵敏检测策略和生物分析技术的发展备受关注。本论文主要介绍了几种用于高效检测金属离子和miRNA的方法。主要内容如下:1.本论文提出了一种锌离子的荧光测定法。该方法依赖于(a)使用等温循环来放大荧光信号,和(b)使用磁性分离磁珠(MBs)以完全除去未反应的DNA检测探针降低背景干扰。首先将生物素和荧光基团标记的底物链(Zn-Sub)作为检测探针组装在MBs上。接着,将Zn(Ⅱ)-特异性DNAzyme(Zn-Enz)链与Zn-Sub链杂交。在Zn(Ⅱ)存在下,Zn-Sub链被剪切,这导致释放出较短的DNA片段(含有荧光标记)和Zn-Enz链的离解。离解的Zn-Enz链随后与剩余的Zn-Sub链杂交并以同样的方式剪切。从而实现靶循环扩增机制和累积信号放大过程。由此在Zn(Ⅱ)存在的情况下获得强烈放大的信号。未经剪切的Zn-Sub链可随MBs从溶液中磁性分离出来。该方法在信噪比为3时具有低至33 fM的检测限和在100fM至11 nM Zn(Ⅱ)浓度范围的线性响应。将其应用于加标自来水和海水样品中Zn(Ⅱ)的测定,所测定结果与ICP-MS分析得到的结果进行了比较。该方法还用于测定母乳粉和母乳中Zn(Ⅱ)的含量。2.本论文基于Cu(Ⅱ)特异性DNA酶(DNAzyme)和Ni/Fe水滑石(LDH)/G-四链体类过氧化物酶开发了灵敏的铜离子(Cu(Ⅱ))传感器。简而言之,在Cu(Ⅱ)存在时,短的富含鸟嘌呤(G)的片段标记的底物(Cu-Sub)链与Cu(Ⅱ)特异性DNAzyme(Cu-Enz)链杂交并被剪切,导致富含G的DNA片段的释放。同时,Cu-Enz链被解离并参与下一个杂交-剪切循环。累积的富含G的DNA片段进一步折迭成四链体结构。然后,使用链霉亲和素包被的磁珠方便地分离出所有未反应的Cu-Sub链、被剪切后的Cu-Sub链和Cu-Enz链。最后,将Ni-Fe-LDH纳米片与G-四链体(G-quadruplex,不含氯化血红素)结合用于催化比色反应,首次表现出增强的类过氧化物酶活性。这种新的Cu(Ⅱ)检测方法的检测限为0.29 pM,线性范围为1 pM至10μM(r~2>0.997)。所建立的基于双酶的传感器被应用于测定血清样品中的Cu(Ⅱ),并获得与电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)的相近的结果。由此,Ni/Fe-LDH/G-quadruplex被证明是一种可用于分析应用的新型高效DNAzyme。3.本论文开发出了pH依赖性选择性离子交换与苯胺的催化聚合相结合的方法,用于铜(Cu~(2+))和铁离子(Fe~(3+))的灵敏检测。镍离子(Ni~(2+))螯合的乙二胺四乙酸(EDTA)通过共沉淀反应插入水滑石中。随后将插层后的水滑石产物用作吸附剂,用于富集pH 6.5条件下的Cu~(2+)和pH 4.5条件下的Fe~(3+)。由于Cu~(2+)和Fe~(3+)均与EDTA具有更强的络合物形成常数,因此Cu~(2+)和Fe~(3+)选择性地将Ni~(2+)置换出来。所得的含有Cu~(2+)/Fe~(3+)的吸附剂被分离并用于催化苯胺聚合反应,因为吸附剂可以在不同的pH值下有效地释放Cu~(2+)/Fe~(3+),并且具有高的聚合反应催化能力。由于在不同pH值下产生的聚苯胺具有不同颜色,故可利用比色信号区分Cu~(2+)和Fe~(3+)。经优化萃取温度、萃取时间、催化时间和pH值后,该方法对Cu~(2+)的检测限为0.1 nM(6.4 ng/L),Fe~(3+)的检测限为1 nM(56 ng/L);宽线性范围(分别为0.0005-2.5μM和0.005-5μM)且线性(r~2值分别为0.9904和0.9965)良好。优化后的方法适用于河水样本中Cu~(2+)和Fe~(3+)的灵敏分析检测。以Cu~(2+)/Fe~(3+)为例,该工作为方便有效地检测水样中的金属离子提供了一种新型有趣方法。4.本论文设计了一种高灵敏检测microRNA(miRNA)let-7a的叁重放大分析法。该方法依赖于与靶miRNA相关的杂交链式扩增反应(HCR)引发的磁性DNA/Fe_3O_4纳米片网状结构的形成。DNA/Fe_3O_4网状结构中的Fe_3O_4纳米片具有参与比色反应的类过氧化物酶催化活性,从而产生用于定量let-7a的高灵敏信号。在最佳条件下,该测定在信噪比为3时获得了13 aM的检测限,并且在0.05fM和12 nM之间获得了线性校准曲线。该叁重放大方法成功运用于血清样品中let-7a的定量。该方法基于HCR、网状结构和催化反应的叁重扩增策略,被证明是一种新型、快速、有效的miRNA分析方法。(本文来源于《江苏科技大学》期刊2019-06-06）
吴英凤,王林,杨丽[4]（2019）在《冠心病患者血清微小核糖核酸-335、潜在转化生长因子结合蛋白2的表达及意义》一文中研究指出目的观察冠心病(CHD)患者血清微小核糖核酸335(miR-335)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)的表达,并探讨其意义。方法将102例CHD患者按疾病类型分为稳定型心绞痛(SAP)36例(SAP组)、不稳定型心绞痛(UAP)32例(UAP组)、急性心肌梗死(AMI)34例(AMI组),根据Gensini积分将102例CHD患者分为轻度病变组37例、中度病变组40例、重度病变组25例,另取冠状动脉(冠脉)造影诊断为非CHD患者40例为对照组。采用AU5800全自动生化分析仪检测空腹血糖、甘油叁酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-335,采用酶联免疫吸附法检测血清LTBP-2水平。CHD患者病情严重程度与血清miR-335、LTBP-2的关系采用Pearson积矩相关性分析。结果对照组、SAP组、UAP组、AMI组收缩压、舒张压、空腹血糖、TG、TC、LDL-C、HDL-C比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照组、SAP组、UAP组、AMI组血清miR-335水平呈逐渐下降趋势,而血清LTBP-2水平呈逐渐升高趋势,单因素方差分析结果显示,各组间血清miR-335、LTBP-2比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。轻度病变组、中度病变组、重度病变组血清miR-335水平呈逐渐下降趋势,而血清LTBP-2水平呈逐渐升高趋势,单因素方差分析结果显示,各组间血清miR-335、LTBP-2差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关分析结果显示,CHD患者病变严重程度与血清miR-335水平呈负相关(r=-0.673,P<0.05),而与LTBP-2水平呈正相关(r=0.705,P<0.05)。结论 CHD患者血清miR-335呈低表达,而LTBP-2呈高表达;二者联合检测有助于CHD患者病情程度的评估。(本文来源于《山东医药》期刊2019年16期）
乌那尔汗·吉斯汗,任衍倍,孟凡峰,田似报,符玉涓[5]（2019）在《PCR结合核酸斑点杂交检测猪伪狂犬病毒》一文中研究指出本研究基于猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)gE基因,建立了一种PCR结合核酸斑点杂交检测方法来鉴别野毒株和疫苗株,并利用这一方法对山东省部分地区的猪临床病料中PRV进行了检测。结果显示,建立的PCR结合核酸斑点杂交检测方法只与PRV野毒株反应,而与PRV gE基因缺失疫苗、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪圆环病毒2型不反应。PCR结合核酸斑点杂交方法在53份病料中检出PRV阳性病料5份,阳性率为9.43%,高于单纯PCR的检出率(7.55%)。结果表明,本研究建立的PCR结合斑点杂交的方法特异性强,灵敏度高,适合PRV野毒的检测以及流行病学调查,可应用于PRV的鉴别诊断和净化。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2019年01期）
赵松,刘燕红,李婷,李伟,张键锋[6]（2019）在《结合重组酶介导的核酸等温扩增和荧光探针快速检测日本血吸虫基因片段》一文中研究指出目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,建立荧光RAA反应体系。扩增不同拷贝数的Sj G28重组质粒,评价荧光RAA检测的敏感性;分别以日本血吸虫、曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫基因组为模板进行荧光RAA检测,以评价该方法的特异性。采用荧光RAA分别检测500、 200和50条日本血吸虫尾蚴感染的兔粪中虫卵DNA。分别在50只阴性钉螺中混入1、 2、 3、 4、 5、 10只阳性钉螺,并提取DNA进行荧光RAA检测。结果以不同拷贝数的Sj G28重组质粒为模板进行荧光RAA扩增,在5 min时即可观察到明显的荧光信号,随着拷贝数的不断降低,检测到荧光信号的时间也随之延长,不同拷贝数的扩增均在10 min内完成,最低可检出的质粒浓度为10拷贝/μl。以曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫及华支睾吸虫基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。不同数量尾蚴感染的兔粪中提取的DNA样品经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在15 min内完成。含不同数量阳性钉螺的50只阴性钉螺提取的日本血吸虫DNA经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在10 min内完成。结论本研究建立的可检测日本血吸虫核酸片段的荧光RAA方法,反应快捷,敏感性和特异性均较高。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年01期）
陈银,葛以跃,赵康辰,崔仑标,史智扬[7]（2018）在《环介导等温扩增结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术快速检测脑膜炎奈瑟菌》一文中研究指出目的建立一种适合现场使用、灵敏、特异的脑膜炎奈瑟菌(N.men)检测方法。方法针对N.men的ctrA基因设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和核酸侵入反应探针,对LAMP扩增产物进行核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针杂交检测。优化反应体系和反应条件后进行敏感性和特异性实验,并与Real-Time PCR检测方法进行比较。结果以核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针显色技术检测LAMP扩增产物和毛细管电泳法具有相同的敏感性和特异性;LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术的检测敏感性为10copies DNA分子/反应,且与其他病原体之间无交叉反应。在临床样本检测方面,LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术与Real-Time PCR检测效果相当。结论结合LAMP、核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术建立的N.men检测方法灵敏、特异,无需特殊仪器,适用于基层检测和现场快速检测。(本文来源于《江苏预防医学》期刊2018年06期）
张景凤,李双利,杨运煌,杨代文,刘买利[8]（2018）在《Yb-1蛋白的CSD结构域对核酸的选择性结合及S102磷酸化对结合的影响》一文中研究指出Yb-1(Y-box binding protein 1)在正常细胞中呈低水平表达,但在癌细胞中常呈高水平表达。Yb-1是核酸结合蛋白,与RNA和DNA结合,参与RNA的剪接、基因转录和基因组复制。Yb-1通过CSD(Cold shock domain)识别特异性核酸,但对其识别的核酸序列目前还有争议。CSD上的S102可被磷酸化,S102磷酸化与癌症的进展密切相关。据报道S102磷酸化能降低Yb-1与RNA的结合,促进Yb-1向细胞核转移,在细胞核内则增强Yb-1与(本文来源于《2018第二十届全国波谱学学术年会会议论文摘要集》期刊2018-10-12）
许学文[9]（2018）在《闭锁小带-1相关核酸结合蛋白（ZONAB）促进膀胱癌侵袭作用的研究》一文中研究指出目的:紧密连接(tight junction,TJ)是癌细胞侵袭转移过程中必须克服的首要屏障。癌细胞首先丧失细胞间连接,由原发灶解离,然后侵袭周围组织。闭锁小带-1相关核酸结合蛋白(zonula occludens-1 associated nucleic acid binding protein,ZONAB)是重要的紧密连接蛋白,也是转录因子,细胞密度增加时ZONAB结合于闭锁小带-1(zonula occludens-1,ZO-1),处于未激活状态,ZONAB被激活后进入细胞核,特异性地结合cyclinD1、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的启动子,起到促进细胞增殖的作用。在肝癌、结肠癌中ZONAB的表达上调,发挥促进癌细胞增殖的作用,但目前尚缺乏膀胱癌(bladder cancer,BC)中ZONAB表达情况的报道,虽然ZONAB作为转录因子促进细胞增殖的作用已被人们所知,而它能否影响肿瘤侵袭仍是未知数。本研究的目的是通过基因转染、离体实验、在体实验等多种方法,检测ZONAB在膀胱癌中的表达变异,并证明ZONAB表达对癌细胞侵袭力的影响,揭示膀胱癌侵袭的可能机制。研究方法:1、研究对象:选取患者为2014年至2016年之间于中国医科大学附属盛京医院医院泌尿外科收治并接受手术治疗,病理确诊尿路上皮癌,排除不合并泌尿系感染病变,包括30例肌层浸润性膀胱癌、41例非肌层浸润性膀胱癌和相应的癌旁非肿瘤组织(adjacent non-tumor tissue,ANTT)。研究样本取自手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,其中部分组织固定后行病理检查及免疫组化实验,部分组织转移至-80℃冰箱中冻存。人尿路上皮永生细胞系sv-huc-1和膀胱尿路上皮癌细胞系5637、T24、UM-UC-3由中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(上海)购得。2、ZONAB过表达T24多克隆细胞系构建:在氨苄青霉素LB培养基中培养pLV-ZONAB-DU及其对照组pLV-GFP-DU菌液,收集菌体提取质粒,用紫外分光光度计测量OD260值,计算质粒浓度,慢病毒载体、pH1、pH2转染HET293T细胞,收集纯化病毒,将慢病毒悬液加入有T24细胞生长的完全培养基,然后加入凝聚胺至终浓度,以此替换原细胞培养基,加入嘌呤霉素筛选细胞,14天后冻存细胞。3、用shRNA使ZONAB表达沉默:根据ZONAB基因序列设计合成shRNA序列,用大肠杆菌提取质粒,慢病毒载体、pH1、pH2转染HET293T细胞,收集纯化病毒,用病毒感染UM-UC-3细胞,加入嘌呤霉素筛选细胞,14天后冻存细胞。4、Transwell细胞体外侵袭实验:将被稀释的基质胶加入transwell培养板上室,覆盖聚碳酯膜,上室加入单细胞悬液。下室加入趋化因子液,1天后去除基质胶和聚碳酯膜上表面的细胞。甲醇固定上室,苏木素染色,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,切取聚碳酯膜,放置于载玻片,中性树脂封片。在高倍镜下计数细胞。5、动物模型的制备:将各组T24细胞于裸鼠的双上肢腋下进行皮下注射,记录裸鼠瘤体各径线。6、Westem blotting技术:检测膀胱组织、培养的各组细胞系中各种蛋白的表达水平。7、realtime-PCR技术:检测膀胱组织、培养的各组细胞系中各种mRNA表达水平。8、免疫组化技术:观察和检测膀胱组织中各种蛋白的表达分布及强弱。9、H&E染色:用于观察实验动物模型中膀胱癌原发灶的浸润情况。结果:一、膀胱癌中ZONAB的表达上调1、膀胱癌与癌旁非肿瘤组织中ZONAB mRNA的表达:采用realtime-PCR检测发现膀胱癌中ZONAB mRNA的表达较癌旁非肿瘤组织高。2、膀胱癌与癌旁非肿瘤组织中ZONAB蛋白的表达:采用Western blotting发现膀胱癌中ZONAB蛋白的表达高于癌旁非肿瘤组织。3、膀胱癌与癌旁非肿瘤组织中ZONAB蛋白的免疫组化染色:通过免疫组化法检测肌层浸润性膀胱癌、非肌层浸润性膀胱癌、癌旁组织中的ZONAB高表达率,发现膀胱癌中ZONAB高表达率高于癌旁组织,而且肌层浸润性膀胱癌中ZONAB的高表达率高于非肌层浸润性膀胱癌。4、膀胱癌中ZONAB蛋白表达与临床病理因素的相关性:通过对免疫组化法测得膀胱癌中ZONAB蛋白的表达阳性率的分析,我们发现ZONAB蛋白的表达高表达率在不同年龄、性别、淋巴结转移及远隔转移等临床病理因素中均未表现出明显差异。5、各种人尿路上皮细胞系中ZONAB mRNA的表达:采用realtime-PCR检测人膀胱癌细胞系5637、T24、UM-UC-3和人尿路上皮永生细胞系sv-huc-1中ZONAB mRNA的表达,可见膀胱癌细胞系中ZONAB mRNA的表达较正常尿路上皮细胞系中的表达高。6、各细胞系中ZONAB蛋白的表达:采用Western Blot法检测人膀胱癌细胞系5637、T24、UM-UC-3和人尿路上皮永生细胞系sv-huc-1中ZONAB蛋白的表达,可见膀胱癌细胞系中ZONAB蛋白的表达较正常尿路上皮细胞系中的表达高。二、ZONAB过表达的T24细胞系侵袭力增强1、ZONAB过表达的T24膀胱癌细胞系模型建立:通过慢病毒载体稳定转染人膀胱癌细胞系T24,用ZONAB表达载体pLV-ZONAB-DU包装为ZONAB表达慢病毒,用表达ZONAB慢病毒分别感染T24细胞,筛选表达ZONAB的T24细胞株。通过Western blotting验证表达ZONAB的T24细胞系(T24-ZONAB)中ZONAB蛋白呈稳定较高表达。2、不同ZONAB表达水平的T24膀胱癌细胞系的侵袭力检测:通过Transwell小室侵袭实验测得T24-P(空白对照)、T24-GFP(阴性对照)以及T24-ZONAB 3组细胞的侵袭率率。T24-ZONAB的侵袭率明显高于对照组。叁、ZONAB表达下调的UM-UC-3细胞系侵袭力减弱1、ZONAB表达下调的UM-UC-3膀胱癌细胞系模型建立:通过慢病毒载体shRNA转染人膀胱癌细胞系UM-UC-3,筛选ZONAB表达下调的UM-UC-3细胞株。通过Western blotting验证ZONAB表达下调。2、不同ZONAB表达水平的UM-UC-3膀胱癌细胞系的侵袭力检测:通过Transwell小室侵袭实验测得UM-UC-3-P(空白对照)、UM-UC-3-N(阴性对照)以及UM-UC-3-R(实验组)3组细胞的侵袭率率。UM-UC-3-R的侵袭率明显低于对照组。四、在体研究证实ZONAB表达促进膀胱癌侵袭1、膀胱癌异种移植物动物模型:T24-ZONAB组肿瘤生长速度明显高于T24-P及T24-GFP组,肿瘤直径明显大于其他两组,提示ZONAB表达具有促进肿瘤细胞增值的作用。2、不同ZONAB表达水平的膀胱癌细胞的转移及侵袭检测:小动物荧光成像发现T24-ZONAB裸鼠膀胱癌模型中肿瘤原发灶有明显的荧光,提示膀胱癌原发灶有稳定的ZONAB高表达,但未发现明确的远隔转移灶。H&E染色发现T24-P组与T24-GFP组肿瘤边缘未发生周围组织侵袭,而T24-ZONAB组原发灶周围可见多处癌细胞横纹肌侵袭,提示ZONAB表达有促进肿瘤侵袭的功能。结论:1、膀胱癌中ZONAB表达上调。2、肌层浸润性膀胱癌中ZONAB表达高于非肌层浸润性膀胱癌。3、ZONAB表达有促进肿瘤侵袭的作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-10-01）
Zeng,Zhe,Deng,Feng,Shi,Ke[10]（2018）在《抗病毒新靶点:冠状病毒nsp9二聚体形态增强其核酸结合特性》一文中研究指出随着我国养猪业规模化、集约化的快速发展,如何对猪场疫病进行有效防控进而净化疫病显得日益重要和迫切。近年来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)作为再现的一种α冠状病毒,能够造成仔猪高死亡率、高度接触性的肠道传染病,给我国养猪业的发展带来严重危害。此外,2014年新发猪δ冠状病毒(PDCoV)在美国、加拿大、中国和泰国等国家相继被检出,并呈逐年上升趋势,主要感染仔猪产生严重的水样腹泻和呕吐,给养殖业造成严重的经济损(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年08期）
核酸结合论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性。方法构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子。随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能。结果本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA。经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98%的重组HpaA蛋白作为筛选靶标。利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1～HA6。其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAM)标记的HA6适配子对166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58%,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95%)。结论本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
核酸结合论文参考文献
[1].于玲,于莉.HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用[J].中国卫生标准管理.2019
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