荧光假单胞菌2P24中RstA蛋白的功能鉴定

论文摘要

探究荧光假单胞菌2P24中OmpR家族转录因子RstA的功能,明确其对EmhABC外排泵的调控作用及机制。利用共适应分析预测RstA的潜在功能;采用同源重组技术构建rstA、emhABC基因缺失菌株ΔrstA和ΔemhABC,检测野生型、ΔrstA、ΔemhABC对多种抗生素的敏感性;通过qRT-PCR和β-半乳糖苷酶实验检测emhABC在野生型和ΔrstA菌株中的转录、表达水平;表达纯化His-RstA蛋白并经凝胶阻滞实验检测RstA蛋白与emhABC基因启动子区域的结合活性。结果显示,RstA同EmhABC存在共适应性,并预测RstA与多种抗生素胁迫环境的适应相关;ΔrstA和ΔemhABC对多种抗生素耐受性下降;与野生株相比,突变株ΔrstA中emhABC的转录、表达水平均下降超过3倍;成功表达纯化His-RstA蛋白,经凝胶阻滞实验显示重组His-RstA蛋白可与emhABC基因启动子区域特异性结合。OmpR家族转录因子RstA通过结合在emhABC上游启动子区域正向调控EmhABC的表达,并影响荧光假单胞菌2P24的多重耐药性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 试剂与仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 共适应性分析
•     1.2.2 rstA基因缺失菌株的构建
•     1.2.3 抗生素最小抑制浓度测定
•     1.2.4 emhA及emhC转录水平检测
•     1.2.5β-半乳糖苷酶实验
•     1.2.6 rstA基因的克隆
•     1.2.7 RstA蛋白的表达与纯化
•     1.2.8 凝胶阻滞实验
• 2 结果
•   2.1 转录因子Rst A与外排泵Emh ABC共适应性分析
•   2.2 荧光假单胞菌中rstA同源序列比对
•   2.3 rstA基因缺失菌株的鉴定
•   2.4 RstA直接影响荧光假单胞菌多重耐药性
•   2.5 RstA正向调节emhABC的表达
•   2.6 RstA蛋白的表达与纯化
•   2.7 凝胶阻滞实验
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李谛音,何永兴,韩建庭,李坤,王志平,李妙慧

关键词: 荧光假单胞菌,蛋白,外排泵,多重耐药性

来源: 生物技术通报 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 兰州大学第二医院泌尿外科甘肃省泌尿系疾病研究重点实验室,兰州大学生命科学学院细胞活动与逆境适应教育部重点实验室,四川大学华西临床医学院

基金: 国家自然科学基金项目(31770535,31300616),甘肃省自然科学基金项目(17JR5RA208)

分类号: Q933

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0097

页码: 99-106

总页数: 8

文件大小: 2471K

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