导读:本文包含了光诱导表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,诱导,蛋白,烟草,马铃薯,哈萨克,拟南芥。
光诱导表达载体论文文献综述
童文艳,胡孟可,徐林娜,乔慧聪,李芬[1]（2019）在《烟草NtTkr尾部T_(1084)缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达》一文中研究指出已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil, CC3)第1 084位苏氨酸(T_(1084))对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白。为确定T_(1084)缺失(T_(1084d))或替换(T1084A)突变对NtTkr与这些候选蛋白体外互作的重要性,首先以pBI121-NtTkr为模板,通过重迭延伸PCR扩增得到烟草NtTkr尾部T_(1084d)、T1084A片段并将其克隆入质粒pUC19,经蓝白斑筛选、SmaⅠ-BamHⅠ双酶切鉴定后送去测序,获得正确的T_(1084)缺失和替换的NtTkr尾部;然后将重组的pUC19-T_(1084d)、pUC19-T1084A与pMXB10进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切,回收目的片段和载体片段并连接,连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选得到重组子,进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切鉴定,最终成功构建pMXB10-NtTkr-T1084A和pMXB10-NtTkr-T_(1084d)原核表达载体;最后将原核表达载体pMXB10-T_(1084d)和pMXB10-T1084A转入BL21(DE3)中,分别经0.05,0.06 mmol/L IPTG浓度诱导,12%SDS-PAGE电泳检测蛋白质表达情况,结果证明获得了NtTkr-T_(1084d)-1317和NtTkr-T1084A-1320的成功表达,且IPTG浓度大于0.06 mmol/L时,均可高效表达约77 ku的NtTkr-T1084A-1320和76.2 ku的NtTkr-T_(1084d)-1317蛋白量。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年03期）
解津刚,热衣扎别克·哈德坎,张翔宇,卢奇诚,李东升[2]（2018）在《哈萨克羊抑制素α基因原核表达载体的构建及其诱导表达》一文中研究指出本实验以新疆哈萨克羊睾丸组织为实验材料,提取组织总RNA,经反转录得到c DNA并以此为模板,用以Gen Bank(NM_001308579.1)序列为参考设计的特异性引物进行PCR扩增,之后将扩增产物与p ET32a(+)载体相连,构建重组质粒p ET32a(+)-INHα。将构建好的重组质粒转化到受体菌E.coli BL21中,经IPTG诱导,表达p ET32a(+)-INHα重组蛋白。对扩增产物的测序鉴定结果显示INHα基因克隆成功;经过酶切和测序鉴定确定准确构建了p ET32a(+)-INHα重组载体;经Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定,检测到INHα基因编码区全序列表达的重组蛋白单一条带,这说明原核表达载体构建成功并在原核细胞中正常表达,这为今后绵羊INHα基因的免疫功能研究提供了参考依据。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年07期）
徐佳妮[3]（2018）在《马铃薯转录因子StPti5表达载体构建及胁迫诱导表达特性分析》一文中研究指出植物生命周期的全过程不可能在完全适宜的环境条件下进行,生物胁迫与非生物胁迫贯穿于植物整个生命周期。转录因子所介导的基因表达调控网络在植物抵御各种胁迫的反应中具有重要功能。AP2/EREBP(APETALA2/ethylene-res ponsive element binding proteins)是一个植物特有的转录因子超家族,其中ERF类属于EREBP转录因子亚族,其主要功能是调节植物对激素(乙烯和ABA等)、病原物和非生物逆境胁迫(低温、干旱及高盐)等的应答反应。前期转录组测序发现马铃薯加湘1号中的一个ERF类转录因子(PGSC0003DMG400010309)在接种晚疫病菌(Phytophthora infestans)24小时后表达量显着上调。为进一步研究转录因子StPti5的功能,本实验克隆了编码StPti5的基因并构建了该基因的植物超表达载体,利用荧光定量的方法分别分析了该基因在生物胁迫(病原菌)和非生物胁迫(高温、低温、干旱和高盐)条件下表达量的变化情况,主要研究结果如下:1、基因克隆和序列分析:以马铃薯加湘1号为材料,根据Spud DB Potato Genomics Resource数据库中PGSC0003DMG400010309基因序列设计引物,并在引物5’端加上BamHI和SalI酶切位点,从加湘1号的RNA中通过RT-PCR扩增获得了加湘1号中的PGSC0003DMG400010309基因,并命名为StPti5,该基因最长开放阅读框为468 bp,编码含156个氨基酸的蛋白。该蛋白的氨基酸序列生物信息学分析结果表明其含有1个典型的AP2结构域,符合ERF类转录因子的结构特征。2、植物表达载体的构建及农杆菌的转化:通过酶切、连接将StPti5基因克隆到表达载体pCAMBIA1301m中。通过测序和酶切验证,证实StPti5基因成功克隆到表达载体中,将其命名为p1301m-StPti5。通过冻融法将p1301m-StPti5转化至根癌农杆菌GV3101中,采用农杆菌花序侵染法进一步将StPti5基因转化拟南芥,潮霉素平板筛选及PCR检测得到4株拟南芥阳性植株。3、胁迫诱导表达分析:分别在接种马铃薯晚疫病菌、高温、低温、干旱、高盐的单一胁迫环境下对马铃薯转录因子StPti5基因进行了实时荧光定量检测,通过对其相对表达量的分析发现,在接种马铃薯晚疫病菌后,StPti5基因在48h内表达量的变化不明显,接种后48h-72h期间,表达量明显上调;在4℃低温下,StPti5基因表达量下调;35℃高温、150mmol/L Nacl高盐溶液中和20%PEG模拟干旱处理下,StPti5基因的表达量先上升后下降。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2018-06-01）
童文艳,徐林娜,乔慧聪,李芬[4]（2018）在《烟草H_2A的序列分析、原核表达载体构建及诱导表达》一文中研究指出[目的]对H2A进行序列分析及蛋白结构域分析,并将其克隆入p GEX4T-1原核表达载体进行诱导表达。[方法]以p GADT7-Rec-H2A质粒为模板,通过PCR扩增烟草H2A(3~140 Aa),将其插入原核表达载体p GEX-4T-1中,并将重组载体转入BL21(DE3)中,诱导其表达。[结果]构建了烟草H2A基因全长和p GEX4T-1载体大片段连接的融合表达载体,并成功地诱导其表达。[结论]该研究为运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作进而确定Nt Tkr与蛋白互作的关键结构域奠定了试验基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2018年10期）
乔慧聪,任向波,吴秀丽,李芬[5]（2017）在《烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化》一文中研究指出通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMXB10-NtTkr-3582经生物公司测序,结果正确。将其转化为BL21(DE3),IPTG诱导其表达目的蛋白,经几丁质法纯化及SDS-PAGE检测,结果表明笔者得到了高纯度的目的蛋白。该试验为进一步运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作及深入研究该蛋白的其他生物学功能奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2017年14期）
张帅扬[6]（2017）在《马铃薯小分子热激蛋白基因表达载体构建及胁迫诱导表达特性分析》一文中研究指出植物生命周期的全过程不可能在完全适宜的环境条件下进行,生物胁迫与非生物胁迫贯穿于植物体的整个生命周期。热激蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)是生物体在不利环境条件因素刺激下应激合成的一组在进化上高度保守的蛋白质,是植物受到外界胁迫时诱导产生的蛋白。HSPs在逆境条件下表达的增强可以提高植物对胁迫环境的抵抗能力,在植物与环境长时间共同进化的过程中起到了非常重要的作用。前期转录组测序结果表明马铃薯Favorita中的一个小热激蛋白基因(PGSC0003DMG400009255)在接种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)24小时后表达量显着上调。为了研究该基因的功能,克隆并构建了该基因的植物表达载体,分别在接种马铃薯晚疫病菌,高温,低温,干旱胁迫条件下对该基因的表达量进行了荧光定量检测,主要研究结果如下:1、基因克隆和序列分析:以马铃薯Favorita为材料,根据Spud DB Potato Genomics Resource(PGSC0003DMG400009255)基因序列设计引物,并在引物5’端加上BamHI和SalI酶切位点,从接种P.infestans 24小时后的Favorita的RNA中通过RT-PCR的方法获得PGSC0003DMG400009255的基因片段,并命名为sHSP-F,该基因最大开放阅读框(ORF)为594 bp,编码197个氨基酸。将该基因的氨基酸序列与其它小热休克蛋白氨基酸序列序列进行同源性比对及生物信息学分析表明,该基因含有ACD_Sc Hsp26_like、HSP20和IbpA叁个结构域,其中ACD_ScHsp26_like是热休克蛋白中较为重要的结构域,对抵抗外界环境胁迫具有重要作用。2、植物表达载体的构建及农杆菌的转化:通过酶切、连接将sHSP-F克隆到表达载体pCAMBIA1301m中。通过测序和酶切验证,表明sHSP-F基因成功克隆到表达载体中,并命名为p1301m-sHP-F。通过电击法将p1301m-sHSP-F转化至根癌农杆菌LBA4404中,该工作为进一步将sHSP-F基因转化马铃薯,研究其功能提供了基础。3、胁迫诱导表达分析:分别在接种马铃薯晚疫病菌、高温、低温、干旱单一胁迫环境下对马铃薯小热激蛋白sHSP-F基因进行了实时荧光定量检测,通过对其相对表达量的分析发现,在接种马铃薯晚疫病菌后24h和48h内s HSP-F表达量显着上调;42℃高温胁迫下,sHSP-F基因在2h后表达量显着增加,6h仍有上调,12h表达量下调;4℃低温胁迫下,叁个时间段的表达量逐渐上调但幅度不明显;模拟干旱胁迫下,不同时间段的表达量与对照组基本上无差异。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2017-06-01）
唐双阳,刘志敏,李冉辉,申海艳,赵兰华[7]（2016）在《原核表达载体pET30a/ATRX-C_(2193-2492)的构建与诱导表达》一文中研究指出[目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。(本文来源于《生物技术》期刊2016年06期）
程瑞雪,蹇华哗,许冠鹏,王风平[8]（2017）在《深海来源低温诱导表达载体pSW4的构建及其应用》一文中研究指出【目的】在深海来源穿梭载体p SW2的基础上构建低温诱导高效表达载体,为最终获得环境污染物高效降解菌提供基础和工具。【方法】通过最小化敲除实验确定载体必需基因,以绿色荧光蛋白GFP为报告基因检测载体的表达能力变化,进一步添加纯化标签、多克隆位点及替换启动子等改造获得低温诱导表达载体pSW4。【结果】敲除实验结果显示编码单链结合蛋白的基因fps B敲除后载体的表达效率显着提高。以GFP为报告基因检测发现,pSW4的表达效率较pSW2有显着提升(4°C条件下提高10.7倍)。以深海细菌Shewanella piezotolerans WP3为宿主菌,应用pSW4为表达载体表达深海细菌Shewanella psychrophila WP2的聚合酶亚基,检测显示其在Mg~(2+)条件下具有切割单链DNA的核酸酶活性,而在Mg~(2+)或Mn~(2+)条件下具有切割双链DNA的核酸酶活性。【结论】构建了低温诱导表达载体pSW4,并证实了其适用性,有助于今后构建环境修复菌及相关的应用性研究。(本文来源于《微生物学通报》期刊2017年04期）
郑旭,黄聪聪,王冠宇,赵亚婷,邢继红[9]（2016）在《拟南芥AtBT4原核表达载体pGEX4T-1-BT4构建及其诱导表达的优化》一文中研究指出本实验室前期获得了拟南芥抗病新基因AtBT4,该基因正调控拟南芥对灰葡萄孢的抗性。AtBT4蛋白属于转录调节因子,并且具有DNA结合活性。通过酵母双杂交实验获得了7个可以与转录调节因子互作的蛋白。本研究以拟南芥野生型cDNA为模板克隆AtBT4基因,通过酶切、连接使其与含有GST标签蛋白的pGEX4T-1载体构成重组载体;经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将重组载体pGEX4T-1-BT4转化大肠杆菌BL21。在不同培养温度、不同诱导时间条件下诱导表达AtBT4蛋白,SDS-PAGE结果显示:pGEX4T-1-BT4载体所表达目的蛋白大小约69kDa,预期大小一致,原核表达蛋白正确。在不同培养温度18℃、28℃、37℃条件下,37℃时表达量较高;在不同诱导培养时间2h、4h、6h条件下,4h时即可高效表达;由此确定了pGEX4T-1-BT4载体在大肠杆菌BL21中高效表达的条件。由于pGEX4T-1-BT4载体所表达的蛋白带有GST标签,我们可以进一步通过pulldown技术鉴定前期由酵母双杂交筛选得到的AtBT4互作蛋白;为阐明AtBT4调控拟南芥抗灰霉病的分子机制奠定基础。(本文来源于《中国植物病理学会2016年学术年会论文集》期刊2016-08-05）
常英英,梁立雄,高亚南,王颜波,丁昌俊[10]（2016）在《去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达》一文中研究指出植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明:17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-ROS1中目的基因的表达,17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50~100μmol·L~(-1);随着诱导时间的延长,目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2016年05期）
光诱导表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本实验以新疆哈萨克羊睾丸组织为实验材料,提取组织总RNA,经反转录得到c DNA并以此为模板,用以Gen Bank(NM_001308579.1)序列为参考设计的特异性引物进行PCR扩增,之后将扩增产物与p ET32a(+)载体相连,构建重组质粒p ET32a(+)-INHα。将构建好的重组质粒转化到受体菌E.coli BL21中,经IPTG诱导,表达p ET32a(+)-INHα重组蛋白。对扩增产物的测序鉴定结果显示INHα基因克隆成功;经过酶切和测序鉴定确定准确构建了p ET32a(+)-INHα重组载体;经Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定,检测到INHα基因编码区全序列表达的重组蛋白单一条带,这说明原核表达载体构建成功并在原核细胞中正常表达,这为今后绵羊INHα基因的免疫功能研究提供了参考依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
光诱导表达载体论文参考文献
[1].童文艳,胡孟可,徐林娜,乔慧聪,李芬.烟草NtTkr尾部T_(1084)缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达[J].华北农学报.2019
[2].解津刚,热衣扎别克·哈德坎,张翔宇,卢奇诚,李东升.哈萨克羊抑制素α基因原核表达载体的构建及其诱导表达[J].中国畜牧杂志.2018
[3].徐佳妮.马铃薯转录因子StPti5表达载体构建及胁迫诱导表达特性分析[D].湖南农业大学.2018
[4].童文艳,徐林娜,乔慧聪,李芬.烟草H_2A的序列分析、原核表达载体构建及诱导表达[J].安徽农业科学.2018
[5].乔慧聪,任向波,吴秀丽,李芬.烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化[J].江苏农业科学.2017
[6].张帅扬.马铃薯小分子热激蛋白基因表达载体构建及胁迫诱导表达特性分析[D].湖南农业大学.2017
[7].唐双阳,刘志敏,李冉辉,申海艳,赵兰华.原核表达载体pET30a/ATRX-C_(2193-2492)的构建与诱导表达[J].生物技术.2016
[8].程瑞雪,蹇华哗,许冠鹏,王风平.深海来源低温诱导表达载体pSW4的构建及其应用[J].微生物学通报.2017
[9].郑旭,黄聪聪,王冠宇,赵亚婷,邢继红.拟南芥AtBT4原核表达载体pGEX4T-1-BT4构建及其诱导表达的优化[C].中国植物病理学会2016年学术年会论文集.2016
[10].常英英,梁立雄,高亚南,王颜波,丁昌俊.去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达[J].浙江农业学报.2016
论文知识图
