大帽藓科植物ISSR-PCR反应体系优化

论文摘要

[目的]建立大帽藓科ISSR-PCR实验最佳反应体系。[方法]提取大帽藓科的基因组DNA,利用5因素4水平的正交设计实验方法对大帽藓科植物ISSR-PCR反应体系进行最佳反应体系的筛选。[结果]大帽藓科植物ISSRPCR的最佳反应体系为（20μL）:即20μL体系中,PCR Buffer 2. 0μL、Mg2+2. 25 mmol/L,d NTP 0. 2 mmol/L,引物0.65μmol/L,Taq DNA聚合酶0. 7 U,模板DNA 10 ng。5个因素对该反应体系的影响顺序为:Mg2+>引物> d NTP> Taq DNA聚合酶>模板DNA。利用该体系,在UBC808等13种引物中进行验证,均能得到有效的扩增条带。[结论]通过对大帽藓科基因组DNA的提取及体系优化,获得了大帽藓科植物最佳反应体系,为后续应用ISSR技术鉴定大帽藓科种质资源以及遗传多样性研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 基因组DNA的提取
•     1.2.2 PCR正交试验设计与分析 （表2, 3）
• 2 结果与分析
•   2.1 大帽藓科植物的ISSR-PCR正交实验
•   2.2 引物退火温度及引物筛选结果
•   2.3 ISSR-PCR反应体系稳定性验证
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 沙毕热木·斯热义力,张梅娟,买买提明·苏来曼,沙伟

关键词: 大帽藓科,正交设计,反应体系,优化

来源: 生物技术 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 新疆大学生命科学与技术学院,齐齐哈尔大学生命科学与农林学院

基金: 国家自然科学基金项目(31660052,31460048),自治区级研究生科研创新项目(XJGRI2017015)

分类号: Q943.2

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.02.0024

页码: 133-139

总页数: 7

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