猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4抗体ELISA检测方法的建立

论文摘要

克隆、表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒DY株(GenBank:JN864948)的Nsp4蛋白,并利用Nsp4作为包被蛋白建立了ELISA检测方法。优化的Nsp4抗体ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶40,最佳封闭液为100 mL/L牛血清,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4 000,最佳显色时间为37℃反应15 min。用建立的ELISA检测方法和IDEXX ELISA检测试剂盒检测血清样品130份,总符合率为93.19%。Nsp4抗体ELISA检测方法的建立,可为PRRSV的抗体监测提供技术支持。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞、毒株、菌株及实验动物
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 猪血清检测样品的采集和处理
•     1.2.2 pNsp4引物设计与合成
•     1.2.3 pNsp4基因的扩增与原核表达载体构建
•       1.2.3.1 病毒RNA的提取及目的基因扩增
•       1.2.3.2 pNsp4基因扩增
•       1.2.3.3 表达载体构建
•     1.2.4 重组蛋白的表达纯化与鉴定
•     1.2.5 Western blot分析
•     1.2.6 抗原最佳包被浓度和血清稀释度的确定
•     1.2.7 封闭液的筛选
•     1.2.8 酶标二抗稀释倍数与TMB底物作用时间的确定
•     1.2.9 阴性、阳性临界值的确定
•     1.2.10 Nsp4间接
•     1.2.11 与IDEXX ELISA检测试剂盒符合率试验
• 2 结果
•   2.1 重组表达载体的鉴定
•   2.2 重组蛋白的表达纯化和鉴定
•   2.3 Nsp4-ELISA检测方法的建立
•   2.4 Nsp4-ELISA的特异性试验
•   2.5 与商用试剂盒的符合率试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘磊,马永彪,王文秀,李峰,沈志强,张松林

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,非结构蛋白,抗体检测

来源: 动物医学进展 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院

基金: 山东省重点研发计划项目(2016GNC110032),山东省自然科学基金项目(ZR2017PC003),山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目(SDAIT-08-17)

分类号: S852.651

DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.20180925.003

页码: 9-13

总页数: 5

文件大小: 784K

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