重组犬α干扰素在昆虫细胞中的高效表达与抗病毒活性鉴定

论文摘要

目的利用杆状病毒表达系统制备犬α干扰素（Canine interferon-α,CaIFN-α）。方法根据昆虫细胞密码子偏爱性优化CaIFN-α基因,构建含双拷贝CaIFN-α优化基因的载体pFastBacDual-CaIFNα-CaIFNα,转化DH10Bac感受态后获得重组基因组rBacmid-CaIFNα-CaIFNα,转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα,接种Sf9细胞表达rCaIFN-α。采用PCR和透射电子显微镜鉴定重组杆状病毒的外源基因与病毒形态,采用间接免疫荧光染色法检测rCaIFN-α蛋白的表达,采用细胞病变抑制法测定rCaIFN-α抑制水疱性口炎病毒（VSV-GFP）在MDCK细胞的复制能力。结果重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα构建成功,rCaIFN-α在rBac-CaIFNα-CaIFNα感染的Sf9细胞中表达,其抗病毒活性为8.73×105 IU/ml。结论构建的杆状病毒表达系统能高效表达rCaIFN-α,该干扰素具有高效抗病毒活性,这为犬干扰素制剂的研究奠定了基础。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 病毒、质粒和细胞
•     1.2 试剂
•   2 方法
•     2.1 犬α型干扰素基因分析与优化合成
•     2.2 重组杆状病毒转移载体与重组杆粒的构建
•     2.3 重组杆状病毒的拯救
•     2.4 重组杆状病毒的扩增与鉴定
•     2.5 IFA鉴定CaIFNα在Sf9细胞中的表达
•     2.6 rBac-CaIFNα-CaIFNα抗病毒活性测定
• 结果
•   1重组杆粒rBacmid-CaIFNα的构建与鉴定
•   2 rBac-CaIFNα-CaIFNα的扩增与鉴定
•   3 间接IFA检测rBac-CaIFNα-CaIFNα的表达
•   4 rCaIFN-α抗病毒活性测定
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 燕丽娜,傅倩芸,孙培录,赵忠欣,王威,盖微微,郑学星,郑文文,夏咸柱

关键词: 犬干扰素,杆状病毒表达系统,昆虫细胞,抗病毒活性

来源: 中国病原生物学杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 山东大学公共卫生学院,山东省医学科学院药物研究所,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

基金: 山东省自然科学基金项目(No.ZR2016CQ18),中国博士后科学基金项目(No.2015M580592,2016T90637),中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No.2018JC050)

分类号: Q78

DOI: 10.13350/j.cjpb.190103

页码: 12-16+22

总页数: 6

文件大小: 1338K

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