α-突触核蛋白激活NLRP3炎性小体介导神经细胞焦亡的发生

论文摘要

目的:研究α-突触核蛋白（α-synuclein）对于神经细胞焦亡发生的影响和机制。方法:以小鼠海马神经元细胞HT22细胞株为对象,体外培养后用α-synuclein干预细胞,以CCK-8法检测细胞活力,确定IC50值。设置对照组（Con组）后,采用TUNEL染色法检测细胞焦亡水平,免疫荧光法观察Gasdermin-D-N（GSDMD-N）的表达,Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Gasdermin-D（GSDMD）、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法检测培养基中IL-18、IL-1β的表达水平。采用Caspase-1抑制剂预处理HT22后,同样使用IC50值的α-synuclein干预细胞,同时设置α-synuclein组（单纯α-synuclein干预）和α-synuclein+ML132组,检测细胞焦亡的水平。结果:α-synuclein的IC50值为50 nmol/L。α-synuclein干预后细胞焦亡数目显著增高,TUNEL染色显示阳性细胞数目多于Con组,免疫荧光染色结果显示细胞中GSDMD-N的表达水平上调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著高于Con组,而GSDMD水平下调,同时细胞培养基中IL-18、IL-1β的水平上调。Caspase-1抑制剂处理后,50 nmol/L的α-synuclein干预后,细胞焦亡水平显著低于α-synuclein组,同时免疫荧光染色结果显示GSDMD-N的水平下调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著低于α-synuclein组,而GSDMD水平上调,培养基中IL-18和IL-1β的水平下调。结论:α-synuclein可以通过激活NLRP3炎性小体活化继发神经细胞焦亡的发生,在帕金森病的发生发展中具有一定的作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞和试剂
•   1.2 细胞分组和α-synuclein蛋白IC50值的确定
•   1.3 TUNEL染色检测细胞焦亡水平
•   1.4 免疫荧光染色检测GSDMD-N
•   1.5 Western blot法检测蛋白的表达水平
•   1.6 ELISA试剂盒检测细胞培养基中IL-1β和IL-18的水平
•   1.7 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 α-synuclein对于HT22细胞诱导焦亡的作用及IC50值的计算
•   2.2 α-synuclein诱导HT22细胞焦亡后免疫荧光染色的实验结果
•   2.3 α-synuclein诱导HT22细胞焦亡后相关蛋白的表达水平检测结果
•   2.4 抑制Caspase-1后, α-synuclein诱导HT22细胞焦亡后免疫荧光染色的实验结果
•   2.5 抑制Caspase-1后, α-synuclein诱导HT22细胞焦亡后相关蛋白的表达水平检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韩晨阳,张晓玲,杨毅,郭丽,官俏兵

关键词: 细胞焦亡,突触核蛋白,炎性小体

来源: 中国临床药理学与治疗学 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 嘉兴市第二医院

基金: 浙江省自然科学基金项目(LYY19H280003)

分类号: R338

页码: 637-643

总页数: 7

文件大小: 2334K

下载量: 611